急性白血病患者骨髓CD47表達變化及意義

張睿，王娟，馬洪玉，趙芳，許衛星，劉靜，尹鳳雷

(滄州市中心醫院，河北滄州 061001)

急性白血病患者骨髓CD47表達變化及意義

張睿，王娟，馬洪玉，趙芳，許衛星，劉靜，尹鳳雷

(滄州市中心醫院，河北滄州 061001)

目的 觀察CD47在急性白血病(AL)患者骨髓中的表達變化，并探討其對患者療效和預后的判斷價值。方法 選擇AL患者97例(觀察組)，同期擬行骨髓檢查的健康體檢者32例(對照組)。采用流式細胞術檢測兩組入組時骨髓CD47陽性表達率，記錄觀察組治療2個療程的完全緩解(CR)率，以及出院1年療效已達到CR患者的復發情況，分析CD47表達與患者療效、復發情況的關系。結果 觀察組與對照組治療前CD47陽性表達率分別為71.13%(69/97)、3.57%(7/32)，兩組比較P<0.05。治療2個療程，觀察組CD47陽性表達者與陰性表達者CR率分別為43.48%(30/69)、71.43%(20/28)，CD47不同表達者比較P<0.05。出院1年，觀察組CD47陽性表達者與陰性表達者復發率分別為63.33%(19/30)、35.00%(7/20)，CD47不同表達者比較P<0.05。結論 AL患者骨髓CD47表達升高，其表達情況檢測有助于對患者療效及預后的判斷。

急性白血??；CD47；療效；復發

急性白血病(AL)是一類造血組織的惡性腫瘤，發病原因是由于造血干細胞及祖細胞發生惡性病變，失去正常的增殖、分化及成熟能力，從而無限持續增長，逐步取代骨髓直至全身組織及器官[1]。隨著生活環境的惡化和生活方式的變化，AL的發病率逐年上升[2]。臨床上將AL分為急性淋巴細胞白血病(ALL)及急性髓系白血病(AML)兩類[3]。AL發病原因尚未明確，研究證實白血病干細胞(LSC)可能與白血病的發生、發展及復發有關[4]。CD47是一種免疫球蛋白，廣泛表達于不同組織的LSC細胞膜表面，具有黏附、吞噬、參與信號轉導等多種生理功能[3,5]。本研究觀察AL患者骨髓中CD47表達變化，并探討其對患者療效和預后判斷的作用?，F報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年6月～2015年5月我院血液科收治的AL患者97例(觀察組)，男57例、女40例，年齡14～65(41.49±5.21)歲；FAB分型[3]：M0型12例，M1型11例，M2型10例，M2a型11例，M2b型12例，M3型11例，M4型12例，M5型11例，M6型7例；ALL 38例，AML 59例。納入標準：①經骨髓和外周血細胞形態、免疫表型、染色體核型和白血病特異相關融合基因檢測均確診為AL；②均為初次治療者，近1個月內未進行任何相關化療；③臨床資料保存完整；④患者及其家屬均簽署知情同意書。排除標準：①合并其他疾病者；②病理資料不完整者；③屬于疾病晚期者。選取同期行骨髓檢查的健康體檢者32例(對照組)，男18例、女14例，年齡16～66(42.01±4.14)歲。兩組性別、年齡具有可比性。

1.2 治療方法 觀察組除給予輸血、抗感染及對癥治療外，AML患者采用IDA (去甲氧柔紅霉素+阿糖胞苷)、DA(柔紅霉素+阿糖胞苷)或 MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)為主的方案進行誘導緩解化療，ALL患者采用VDCP(長春地辛+柔紅霉素+環磷酰胺+強的松)和VDLP(長春地辛+柔紅霉素+左旋門冬酰胺酶+強的松)為主的方案進行誘導緩解化療。療程均為1個月，共2個療程。

1.3 骨髓CD47表達檢測 采用流式細胞術。觀察組于治療前、治療后及出院后1年分別采集骨髓2～5 mL，對照組入組時采集等量骨髓，置于含有EDTA的試管中。取50 μL骨髓，加入3種熒光標記抗體[異硫氰酸熒光素(FITC)、藻紅蛋白(PE)、PE-CY7標記的單克隆抗體]20 μL，渦旋混勻。4 ℃條件下反應20～30 min，加入2 mL紅四寶溶解液，震蕩后室溫下放置10 min。1 000 r/min離心5 min，棄去上清液，使用1 mL PBS反復洗滌3次；加入PBS制成單細胞懸液，調整細胞濃度為1×105/mL，以CD45/SSc設門識別白血病幼稚細胞，以白血病細胞表面抗原表≥20%為CD47陽性。

1.4 療效評價及隨訪 觀察組治療2個療程，參照文獻[3]方法評價臨床療效，計算完全緩解(CR)率。觀察組出院1年，由至少兩名專業醫護人員進行隨訪，詳細記錄獲得CR患者的復發情況。復發標準：白血病臨床癥狀依然存在，血細胞檢查不合格，外周血中依然存在白血病細胞，或存在骨髓外的白血病細胞浸潤現象。

1.5 統計學方法 采用SPSS18.0統計軟件。計數資料以率表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組骨髓CD47陽性表達率比較 觀察組治療前CD47陽性表達率為71.13%(69/97)，對照組為3.57%(7/32)，兩組比較P<0.05。觀察組中AML患者CD47陽性表達率為67.80%(40/59)，ALL患者為76.32%(29/38)，兩者比較無統計學差異(P>0.05)。

2.2 觀察組CD47表達與療效的關系 治療2個療程，觀察組CD47陽性表達者與陰性表達者CR率分別為43.48%(30/69)、71.43%(20/28)，CD47不同表達者比較P<0.05。AML患者中，CD47陽性表達者與陰性表達者CR率分別為45.00%(18/40)、63.16%(12/19)，CD47不同表達者比較P<0.05；ALL患者中，CD47陽性表達者與陰性表達者CR率分別為41.38%(12/29)、88.89%(8/9)，CD47不同表達者比較P<0.05；AML和ALL患者CD47陽性表達者或陰性表達者CR率比較均無統計學差異(P均>0.05)。

2.3 觀察組CD47表達與復發的關系 出院1年，觀察組CD47陽性表達者與陰性表達者復發率分別為63.33%(19/30)、35.00%(7/20)，CD47不同表達者比較P<0.05。AML患者中，CD47陽性表達者與陰性表達者復發率分別為55.56%(10/18) 、33.33%(4/12)，CD47不同表達者比較P<0.05；ALL患者中CD47陽性表達者與陰性表達者復發率分別為75.00%(9/12)、37.50%(3/8)，CD47不同表達者比較P<0.05；AML和ALL患者CD47陽性表達者或陰性表達者CR率比較均無統計學差異(P均>0.05)。

3 討論

AL的發病受到各種因素的影響，涉及多種染色體異位和基因突變，其發病機制尚未明確[3]。臨床上主要通過骨髓移植和化療來緩解AL患者的病情，但大部分患者容易在CR后再次復發，最終導致死亡[6,7]。研究證實，AL的發生、發展、復發與免疫逃逸和LSC關系密切[3]，而細胞表面抗原的表達對于機體的免疫應答具有重要作用。CD47是一種廣泛表達于細胞表面的膜蛋白(又稱為整合素相關蛋白)，通常在正常細胞，如紅細胞、巨噬細胞、樹突細胞等表面表達[8,9]。CD47可以與巨噬細胞表面分子信號調節蛋白α(SIRPα)結合，通過抑制吞噬細胞內酪氨酸磷酶的活化和吞噬性突觸的聚集，抑制吞噬泡的形成。正常細胞可以向吞噬細胞發出信號，避免被吞噬，從而維持機體的正常功能。

本研究結果表明，觀察組CD47陽性表達率明顯高于對照組，提示CD47可以作為診斷AL的指標之一。分析原因，可能是白血病細胞表面表達的CD47與SIRPα結合后可以產生抑制信號，從而躲避巨噬細胞的吞噬并大量增殖，最終導致病情惡化[3]。經過兩個療程的治療，觀察組CD47陽性表達者CR率顯著低于CD47陰性表達者，AML和ALL患者也出現同樣的情況，表明白血病細胞表面CD47的表達對于AL的治療效果具有一定的影響?？赡苁怯捎贑D47陽性表達患者可以利用CD47-SIRPα結合調節蛋白α鏈結合，抑制吞噬細胞的吞噬功能，逃避免疫系統對白血病細胞的清除，從而降低CR率[10,11]。CD47陰性表達患者體內過度增殖的白血病細胞被機體的免疫系統清除出體外，因此經過治療后CR率明顯升高。這也為臨床上可以通過抑制CD47和SIRPα結合治療AL提供了理論基礎。AL患者病情較難獲得緩解，且緩解后容易復發。本研究發現，獲得CR的CD47陽性表達患者復發率顯著高于CD47陰性表達患者，在AML和ALL患者中也是如此；可能是AL患者體內CD47的陽性表達可以激活CD47-SIRPα通路的負向調節，從而降低被吞噬的概率和機體固有免疫系統的清除作用[12,13]；證實CD47可以作為判斷AL患者預后的指標之一。

綜上所述，AL患者骨髓CD47表達升高，CD47可作為判斷患者療效及預后的指標之一，但是其具體機制仍需進一步探討。

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