天津地區(qū)豬衣原體流行病學(xué)調(diào)查

朱雅寧（天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300402）

?

天津地區(qū)豬衣原體流行病學(xué)調(diào)查

朱雅寧
（天津市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，天津 300402）

天津市農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化與推廣項(xiàng)目（項(xiàng)目編號(hào)：201204040）

豬衣原體病是由鸚鵡熱衣原體所引起豬的一種接觸性人畜共患傳染病，臨診上可表現(xiàn)為妊娠母豬流產(chǎn)、死產(chǎn)和產(chǎn)弱仔，新生仔豬肺炎、腸炎、胸膜炎、心包炎、關(guān)節(jié)炎，種公豬睪丸炎等。感染發(fā)病畜禽，長(zhǎng)期向體外排出衣原體，嚴(yán)重威脅人類健康。本病在世界范圍均有分布，國(guó)外于20世紀(jì)60年代首先確認(rèn)豬衣原體病，隨后許多國(guó)家相繼報(bào)道了該病。中國(guó)在20世紀(jì)80年代初，從羊流產(chǎn)和豬繁殖障礙病料中分離出鸚鵡熱衣原體，從而證實(shí)中國(guó)動(dòng)物衣原體病的存在。目前，在中國(guó)規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)，豬群存在有不同程度的衣原體感染，并時(shí)有發(fā)病和流行的報(bào)道。由于衣原體可以感染各年齡段的豬，給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失，所以衣原體病的危害應(yīng)引起足夠的重視。

為了掌握天津地區(qū)豬衣原體病流行特點(diǎn)，我們采集了3 132份豬血清、1 451份棉拭子及65份精液樣品進(jìn)行間接血凝試驗(yàn)（IHA）和熒光PCR檢測(cè) ，進(jìn)行了衣原體流行病學(xué)調(diào)查，初步了解天津地區(qū)豬衣原體病的流行現(xiàn)狀。

1 材料與方法

1.1 樣品

共采集豬血清樣品3 132份，喉頭拭子和精液樣品1 499份（其中喉頭拭子樣品1 434份，精液樣品65份）。分別采自寧河、寶坻、武清、薊縣、漢沽、靜海、大港7個(gè)不同地區(qū)的30個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）。見(jiàn)表1和表2。

1.2 診斷試劑

1.2.1 衣原體間接凝集診斷試劑盒（IHA）

購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，抗原批號(hào)為130524。

表1　不同群體的血清樣品　份

表2　不同來(lái)源的豬病原學(xué)樣品　份

1.2.2 鸚鵡熱衣原體（ACP）核酸檢測(cè)試劑盒

購(gòu)自北京索奧生物醫(yī)藥科技有限公司。抗原批號(hào)130524，稀釋液130524，陽(yáng)性血清130403，陰性血清130524。

1.3 方法

1.3.1 間接血凝試驗(yàn)

衣原體IHA抗原，使用前搖勻。每孔加入75μL稀釋液。在第1孔加入25μL被檢血清，呈4倍遞增稀釋3孔（1∶4～1∶16），第3孔棄去25μL。同一板上同時(shí)設(shè)陽(yáng)性、陰性和空白對(duì)照各2孔（2個(gè)陽(yáng)性、2個(gè)陰性，空白2孔）。每孔加入稀釋的抗原25μL，置微型振蕩器上震蕩2 min，封口，在37 ℃作用2 h后判定結(jié)果。

判定標(biāo)準(zhǔn)：在對(duì)照孔成立的條件下，觀察各待檢血清孔，被檢血清1∶16孔為++及以上凝集者為陽(yáng)性，1∶4孔為++及以下者為陰性。

1.3.2 熒光PCR法

用鸚鵡熱衣原體（ACP）核酸檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)ǎ?/p>

1.3.2.1 DNA提取 1)標(biāo)本預(yù)處理。①精液樣品：將精液充分混勻，取0.5 mL轉(zhuǎn)至1.5 mL干凈離心管，加入等體積4%NaOH，充分混勻，室溫放置10 min，13 000 r/min離心5 min，棄上清，保留沉淀。②棉拭子樣品：取1 mL生理鹽水加入5 mL離心管，充分洗滌棉拭子，將洗滌液轉(zhuǎn)至1.5 mL干凈離心管中，13 000 r/min離心5 min，棄上清，保留沉淀。2)DNA提取：向上述標(biāo)本中加入50μL核酸提取液B充分混勻，100 ℃裂解10 min。13 000 r/min離心3 min，取上清液4μL做PCR反應(yīng)。

陰性質(zhì)控品：取50μL陰性質(zhì)控品加入50μL核酸提取液B，充分震蕩。然后100 ℃裂解10 min，然后13 000 r/min離心3 min，取上清液4μL做PCR反應(yīng)。

ACP-陽(yáng)性質(zhì)控品：直接取4μL進(jìn)行PCR擴(kuò)增。或按照PCR擴(kuò)增介紹方法進(jìn)行定量分析。

1.3.2.2 PCR擴(kuò)增

從試劑盒中取出ACP-PCR MIX、Taq酶系，室溫融化并振蕩混勻后，10 000 r/min離心10 s。

設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N （N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+4管陽(yáng)性對(duì)照），每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制用量為ACP-PCR MIX試劑24μL，Taq酶系2μL。

1.3.2.3 結(jié)果判定 1)如果Ct值＜38，則實(shí)驗(yàn)樣品的ACP DNA含量（基因拷貝數(shù)/mL）=Qty-Copies/mL。2)如果38＜Ct值＜40，為灰區(qū)，建議重新檢測(cè)，重新檢測(cè)若38＜Ct值＜40判為陽(yáng)性，否則為陰性。。3)如果Ct值=40，則ACP DNA含量（基因拷貝數(shù)/ml）＜1×102Copies/mL（低于檢測(cè)下限）。

2 結(jié)果

在采集豬的3 132份血清樣品中，IHA檢測(cè)出153份抗體陽(yáng)性樣品，除武清沒(méi)有陽(yáng)性豬檢出外，其他各區(qū)縣均有檢出，且陽(yáng)性率從2.29%到10.02%不等，寶坻血清陽(yáng)性率最高，達(dá)到10.02%，靜海檢測(cè)較低，為2.29%。詳見(jiàn)表3。

表3　豬血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表4　不同群體血清抗體檢測(cè)結(jié)果

表5　豬衣原體病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果

用IHA法檢測(cè)被檢血清3 132份，結(jié)果顯示母豬、斷奶仔豬、育肥豬、公豬的陽(yáng)性率分別為7.87%、0.68%、3.46%和5.15%，其中母豬的陽(yáng)性率最高，達(dá)到7.87%，公豬的陽(yáng)性率次之，達(dá)到5.15%。具體結(jié)果見(jiàn)表4。根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以母豬的陽(yáng)性率作為對(duì)比對(duì)象，育肥豬和公豬呈現(xiàn)差異顯著，斷奶仔豬差異極顯著。

病原學(xué)檢測(cè)1 499份精液、母豬陰道拭子、斷奶仔豬的喉頭拭子樣品，PCR檢測(cè)出235份陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率為15.68%。其中母豬的陰道拭子陽(yáng)性率最高，其次為公豬精液。詳細(xì)見(jiàn)表5。

3 討論

本次利用IHA和熒光PCR方法對(duì)天津地區(qū)部分豬場(chǎng)進(jìn)行了衣原體病抗體血清學(xué)和病原學(xué)監(jiān)測(cè)，結(jié)果表明各地區(qū)基本存在衣原體感染，抗體平均陽(yáng)性檢出率為4.89%，病原學(xué)平均陽(yáng)性率為15.68%，比以前報(bào)道結(jié)果偏低。邱昌慶等(2000)報(bào)道河北省衡水地區(qū)某規(guī)模化豬場(chǎng)的豬衣原體病抗體陽(yáng)性率可達(dá)35.0%。高雙娣等(2003)報(bào)道甘肅省7個(gè)市(地)的部分豬場(chǎng)豬群共檢測(cè)468份豬血清，平均陽(yáng)性率達(dá)34.4%，個(gè)別地區(qū)的陽(yáng)性率高達(dá)67%。廣東、廣西兩省部分地區(qū)的中小型豬場(chǎng)送檢的264份樣本進(jìn)行衣原體病血清學(xué)調(diào)查，顯示感染率為21.7%～66.7%，平均陽(yáng)性率為42.2%。從本次調(diào)查數(shù)據(jù)中可以看出，天津地區(qū)規(guī)模化豬場(chǎng)抗體陽(yáng)性率均顯著性低于其他省市的血清學(xué)報(bào)道結(jié)果。

本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)抗體陽(yáng)性率排在前兩位的是母豬和公豬的血清，分別為7.87%和5.15%。對(duì)應(yīng)的抗原陽(yáng)性率排在前2位的是母豬的陰道拭子和公豬的精液，為27.13%和24.62%。這與白挨泉等（2004）調(diào)查的結(jié)論一致，并且與Johannes Kauffold（2006）和Teankum（2006）的國(guó)外研究報(bào)道一致，豬衣原體病在公豬精液和母豬的陽(yáng)性率高于其他階段的豬群。因此，公豬的精液和母豬在本病的傳播中可能起著很關(guān)鍵的作用，尤其是種公豬的精液污染衣原體在傳播中起主要作用，母豬感染后又通過(guò)陰道向外排菌，感染哺乳仔豬群和飼養(yǎng)人員，這提示養(yǎng)豬企業(yè)中除了重視對(duì)母豬的防控外，應(yīng)該重視種公豬精液污染衣原體問(wèn)題，應(yīng)該把豬嗜流產(chǎn)衣原體納入精液病原體檢查項(xiàng)目。阻斷衣原體通過(guò)精液垂直傳播衣原體，造成懷孕母豬群流產(chǎn)和死胎的危險(xiǎn)。

4 結(jié)論

本次流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)豬流產(chǎn)衣原體在每個(gè)年齡段的豬都有感染，尤其是母豬的感染率更高，公豬的抗體陽(yáng)性率為5.15%，精液的陽(yáng)性率為24.62%，因此公豬在衣原體病的傳播中的作用要引起足夠的重視。

豬衣原體病的感染有3種來(lái)源，一是盲目從曾發(fā)生過(guò)衣原體病的豬場(chǎng)引種；二是管理比較粗放，豬舍過(guò)于擁擠，加上氣候聚變而發(fā)病。這一點(diǎn)從我們此次流行病學(xué)調(diào)查過(guò)程中可以得到驗(yàn)證，管理好的豬場(chǎng)，陽(yáng)性率低。三是通過(guò)購(gòu)買(mǎi)和使用污染衣原體的種公豬精液而傳播。豬衣原體病病程長(zhǎng)，且呈小區(qū)域流行，癥狀典型，對(duì)天津養(yǎng)豬業(yè)造成很大的威脅。本病在某些豬場(chǎng)同豬偽狂犬病等疫病幾乎在同一時(shí)間并發(fā)，增加疫情的復(fù)雜性，也給診斷和治療工作增加較大難度，但只要認(rèn)真貫徹“預(yù)防為主”的方針，實(shí)施計(jì)劃免疫，便能有效予以防治。為了更好的控制本病，具體建議措施如下：第一，建立密閉的種豬群飼養(yǎng)系統(tǒng)，嚴(yán)格對(duì)引進(jìn)母豬進(jìn)行衣原體病的檢疫。建立嚴(yán)格的衛(wèi)生消毒制度。嚴(yán)格把好工作區(qū)大門(mén)通道消毒、產(chǎn)房消毒、圈舍消毒、場(chǎng)區(qū)環(huán)境消毒的質(zhì)量，以有效控制發(fā)生衣原體接觸傳染的機(jī)會(huì)。對(duì)流產(chǎn)胎兒、死胎、胎衣要集中無(wú)害化處理，同時(shí)用火堿等消毒劑進(jìn)行嚴(yán)格消毒，加強(qiáng)產(chǎn)房衛(wèi)生工作，以防新生仔豬感染本病。第二，對(duì)血清學(xué)檢查為陰性的種豬場(chǎng)，要給適繁母豬在配種前注射豬衣原體流產(chǎn)滅活苗，以防感染，確保向商品豬場(chǎng)或市場(chǎng)提供無(wú)衣原體感染的健康種豬。對(duì)確診感染了衣原體的種公豬和母豬予以淘汰，其所產(chǎn)仔豬不能作為種豬，未感染的種公豬和母豬應(yīng)及時(shí)接種衣原體滅活疫苗。第三，選擇藥物治療。藥物預(yù)防和治療可選用藥敏試驗(yàn)篩選的敏感藥物，如四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、土霉素、青霉素、紅霉素、麥迪霉素、金霉素、泰樂(lè)菌素、螺旋霉素等進(jìn)行豬衣原體的預(yù)防和治療。出現(xiàn)臨床癥狀的新生仔豬可肌肉注射1%土霉素1 mg/kg，連續(xù)治療5～7 d；懷孕母豬產(chǎn)前2～3周，注射四環(huán)素類抗生素以預(yù)防新生仔豬感染本病。流行期間使用四環(huán)素或土霉素添加于飼料中（300 g/t），自由采食。為了防止出現(xiàn)抗藥性，要合理交替用藥。

收稿日期：（2015-11-09）

作者簡(jiǎn)介：朱雅寧（1982-），女，獸醫(yī)師，大學(xué)本科