新疆石河子地區規?；i場豬瘟抗體檢測及分析

劉功成，張 倩，屈勇剛，楊 蓓，楊慧敏，王欣雨，王園園，李新順，馬 博（石河子大學動物科技學院，新疆 石河子 832003）

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新疆石河子地區規模化豬場豬瘟抗體檢測及分析

劉功成，張 倩，屈勇剛*，楊 蓓，楊慧敏，王欣雨，王園園，李新順，馬 博（石河子大學動物科技學院，新疆 石河子 832003）

豬瘟（Classic swine fever ，CSF）是由豬瘟病毒（Classic swine fever virus，CSFV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。1993年后，一些已宣布消滅豬瘟的國家和地區，如荷蘭、瑞士、比利時、德國等，又相繼出現了豬瘟疫情[1]。目前，該病主要在亞洲、非洲、南美洲和歐洲等44個國家流行[2]。

近年來，新疆的養豬業受到生豬價格持續下跌的影響，部分小規模豬場遭到連續入不敷出的打擊后，不得不宣告破產；而一些較大規模的豬場仍然在等待養豬業的轉機。這種形勢無疑會對新疆石河子地區豬場防疫工作帶來影響。但在這種情況下，大多豬場CSFV的抗體水平仍相對較高，提示石河子地區對CSF的防疫基礎相對較好。

摘 要：為了解新疆石河子地區豬場豬瘟病毒（CSFV）抗體水平，試驗從新疆石河子地區的12個不同規模豬場共采血樣743份，采用間接ELISA（酶聯免疫吸附試驗）法檢測CSFV的抗體水平。結果發現，該地區CSFV抗體平均陽性率為85.87%（638/743），免疫抗體陽性率超過80.00%的豬場占75%，各豬場抗體水平差異極顯著（p＜0.01）。結果表明石河子地區CSFV抗體水平較高，該結果可為新疆石河子地區豬瘟防疫工作提供一定的參考。

關鍵詞：豬瘟病毒；ELISA；抗體水平；陽性率

1 材料與方法

1.1 血清樣品

2014—2015年，743份血液樣品采自新疆石河子地區12個規?；i場（能繁母豬500頭及以上的4個，301～499頭的3個，201～300頭的2個，200頭以下的3個），其中選取9個豬場的豬群不同構成成分如下： 0～10日齡仔豬42份，11～20日齡仔豬61份，21～30日齡仔豬70份，種公豬78份，后備母豬100份，經產母豬135份，共486份血清。

1.2 檢測試劑盒和主要儀器

豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒（武漢科前生物制品有限責任公司，批號：141115），自動酶標儀（美國BioTek公司）。

1.3 間接ELISA方法

根據試劑盒說明書的操作步驟，對待檢血清進行1∶40稀釋(例如：195μL樣品稀釋液中加5μL待檢血清)。將稀釋好的血清100μL加入到抗原包被板中，同時設定陰性和陽性對照各1孔，均勻震蕩后，置于37 ℃溫箱中溫浴30 min。然后，棄去抗原包被板中的液體，對抗原包被板進行洗滌，每孔加入羊抗豬酶標二抗，同樣進行37 ℃溫浴30 min，隨后棄掉廢液，再次洗滌。再在抗原包被板的每孔中分別加入底物A、底物B，混勻室溫避光顯色10 min，最后，每孔加入終止液，10 min內，用酶標儀在630 nm波長下對樣品的OD值進行測定，根據OD值的大小，判定樣品抗體的水平。

1.4 結果轉化 (參照豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書)

測定結果的轉化值見表1。

表1　豬瘟抗體ELISA檢測OD值與豬瘟間接血凝試驗（HIA）效價的轉換

1.5 統計分析

用Excel軟件、SPSS軟件對試驗數據進行統計分析，OD值結果以平均值±標準差表示。

2 結果

2.1 新疆石河子地區12個規?；i場的豬瘟抗體水平

743份豬血清共檢出抗體陽性638份，陽性率為85.87%，OD平均值為1.210，標準差為0.773，平均效價為1∶256。A～L的12個豬場的陽性率分別為100.00%、85.71%、71.11%、46.88%、95.71%、93.65%、73.24%、81.25%、95.00%、95.45%、97.33%、98.21%，運用SPSS軟件進行單樣本t檢測P為0.005，表明各豬場抗體水平差異極顯著（P＜0.01）。結果見表2。

2.2 部分豬場豬群不同構成成分的豬瘟抗體水平

12個豬場選取9個豬場，對豬群不同構成成分的豬瘟抗體水平進行分析，0～10日齡仔豬、11～20日齡仔豬、21～30日齡仔豬、后備母豬、經產母豬、種公豬的豬瘟抗體陽性率分別為85.71%、85.48%、77.14%、96.00%、89.63%、97.44%；豬群不同構成成分之間的豬瘟抗體水平存在較大差異，種公豬的抗體水平最高，其次為后備母豬，21～30日齡仔豬的抗體水平最低，但也超過了70.00%，結果見表3。

表2　新疆石河子地區12個不同規模豬場豬瘟免疫抗體檢測結果

表3　部分豬場豬群不同構成成分的豬瘟抗體水平

3 討論

3.1 新疆石河子地區豬瘟抗體水平相對較高

新疆石河子地區12個規模化豬場的抗體陽性率有11個均大于70%，抗體的平均水平達到了農業部《2012年國家動物疫病強制免疫計劃》規定的抗體合格率在70%以上的要求[3]。有1個豬場的抗體水平偏低，僅為46.88%，需要引起足夠的重視。根據杜希珍等研究報道，規?；i場豬瘟疫情穩定需要豬瘟抗體合格率必須達到90%以上[4]，而新疆石河子地區豬瘟抗體陽性率達到了90%以上的豬場有7個，這說明新疆石河子地區各個豬場的豬瘟免疫狀況較好。近幾年來，個別豬場為了節約成本，沒有像以前一樣嚴格做好豬場的防疫工作。所以導致新疆石河子地區不同規模化豬場的豬瘟抗體水平有所差異。

3.2 豬群不同構成成分豬瘟抗體水平存在明顯差異

對1～10日齡仔豬，11～20日齡仔豬，21～30日齡仔豬，后備母豬，經產母豬，種公豬的豬瘟抗體水平檢測發現，后備母豬和種公豬的抗體水平最高，21～30日齡仔豬最低，本試驗結果與牟群等（2012）對不同階段豬群豬瘟抗體進行檢測分析結果[4]基本相符。筆者把0～30日齡仔豬按10日齡為一個階段分為3個階段，用以判斷仔豬豬瘟抗體水平的消長規律，來排除母源抗體的干擾以確定仔豬的最佳首免時間。結果發現新疆石河子地區各個規模化豬場前兩個階段的仔豬抗體水平較高，第3階段抗體水平下降至77.14%，提示仔豬母源抗體保護作用效力下降，說明仔豬在20日齡左右時需要給予豬瘟疫苗接種。

3.3 科學做好豬場防疫工作

豬瘟抗體水平的高低直接反映了豬群免疫接種的效果，是豬群抵抗豬瘟病毒的關鍵因子[5]。現在，很多豬場都懂得了防疫工作重要性，所以他們也在不斷加大對豬場防疫的投入。當然，防疫工作中疫苗是關鍵，所以豬場在疫苗的采購時，一定要選擇質量過硬的廠家，切勿貪圖便宜，購進劣質疫苗，以防給豬場帶來不可估量的后果。然后就是疫苗的保存工作，豬瘟疫苗是凍干苗，需要放在-20 ℃條件下保存，稀釋好后要在一定時間內用完。同時，在給各類豬群接種疫苗時，要使用不同規格的針頭，切勿圖快打飛針，要保證每頭豬都接種上了規定的頭份，要對不同窩豬群接種疫苗時要注意更換針頭。同時，豬場要定期進行血清學檢測，檢測不同豬群豬瘟抗體水平，及早發現問題，及時做好疫苗補免與淘汰工作，做到防微杜漸。

參考文獻

[1] 殷震，劉景華.動物病毒學[M].2版.北京：科學出版社，1997：652-664.

[2] S T A R K R，R U M E N A P F G，MEYERS，et al.Genomic localization of hogcholera virus glycoproteins [J]. Virology，1990(1)：280-286

[3] 劉志勇，韓慶安，劉乃強，等.規模養豬場主要疫病免疫效果評估模型的建立[J].中國獸醫雜志，2011（7）：88-90.

[4] 牟群，李茂寧，覃慶玉，等. 規?；i場不同階段豬群豬瘟抗體水平調查報告[J]. 畜牧獸醫雜志，2012（6）：86-88.

[5] 杜希珍，高麗娜，趙海山，等.規?；i場母豬群豬瘟抗體血清學調查[J].豬業科學，2009，26（6）：86-88.

收稿日期：（2015-11-13）

*通訊作者：屈勇剛（1971-），男，陜西渭南人，副教授，主要從事動物傳染病診斷與防治工作

基金項目：新疆石河子市農業科技攻關項目（2013NY04）
作者：劉功成（1990-），重慶合川人，碩士研究生，主要從事動物傳染病診斷與防治工作