不同稀釋液對肌酸激酶及其MB型同工酶測定的影響

陳永傳，崔亞利，李艷，任颯爽

(1.北京善方醫院檢驗科，北京 100027；2.北京豐臺醫院檢驗科，北京 100071)

不同稀釋液對肌酸激酶及其MB型同工酶測定的影響

陳永傳1，崔亞利2，李艷1，任颯爽1

(1.北京善方醫院檢驗科，北京 100027；2.北京豐臺醫院檢驗科，北京 100071)

目的 了解不同的稀釋液對肌酸激酶(CK)及其MB型同工酶(CK-MB)測定結果的影響。方法 收集2009年5月至2014年5月在北京豐臺醫院門診及病房治療的患者，采用生理鹽水、去離子水、正常血清作為稀釋液，按1：10的比例對568例CK及CK-MB大于各自正常參考范圍的血清樣本進行稀釋，根據統計分析比較稀釋前后樣本CK及CK-MB測定值的差異。結果 568例稀釋前原始血清樣本CK、CK-MB范圍分別在1 400～1 610 U/L、232～251 U/L之間，原始血清、生理鹽水1:10稀釋、去離子水1:10稀釋、正常血清1:10稀釋后結果分別為(1 522.3±60)U/L、(243.7±12)U/L；(1 568±55)U/L、(251±10)U/L；(1 543±51)U/L、(247±10)U/L；(1 798±63)U/L、(288±15)U/L。生理鹽水、去離子水稀釋的樣本稀釋前后結果比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，正常血清稀釋的樣本測定值與稀釋前比較差異有統計學意義(P＜0.05)。樣本經生理鹽水、去離子水、正常血清稀釋后的CK、CK-MB與稀釋前原始血清相關系數r分別為0.991、0.990，0.982、0.993，0.975、0.980，均r＞0.97，呈顯著相關。放置一定時間內的CK及CK-MB測定值比較差異無統計學意義(P＞0.05)。結論 正常血清不適合作為高濃度CK、CK-MB的稀釋液，而生理鹽水和去離子水適合作為稀釋液。

肌酸激酶；MB型同工酶；生理鹽水；去離子水；正常血清

肌酸激酶(Creatine kinase，CK)也被稱為肌酸磷酸激酶(CPK)，主要存在于心肌、骨骼肌，其次在腦組織，另有極少量存在于肝臟、平滑肌和紅細胞，主要起到催化肌酸與ATP高能磷酸鍵轉移的作用，為肌肉收縮提供能量[1]。CK同工酶有三種：CK-MB為心肌型，CK-MM為骨骼肌型，CK-BB為腦型。臨床上，CK及CK-MB測定是判斷心肌損傷的重要指標。部分心肌損傷可造成血清中CK及CK-MB超過試劑盒檢測的線性范圍，必須經過稀釋才能測出，而不同的稀釋液對測定結果的影響差異較大。為了選擇合適的稀釋液，本文采用三種稀釋液對線性范圍內血清CK及CK-MB進行檢測分析。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 Olympus AU2700生化檢測儀。試劑、校準品、質控品均為原裝配套產品。儀器按說明書進行操作和維護保養，用原裝校準品、質控液進行校準和質控，以保證實驗結果準確。

1.2 樣本收集 選取2009年5月至2014年5月在北京豐臺醫院門診及病房治療的患者，共568例，其中男性300例，女性268例。所有患者的CK、CK-MB原始血清測定值均大于各自正常參考范圍(CK參考范圍：≤171 U/L；CKMB參考范圍：＜24 U/L)，同時所有病例CK、CK-MB原始血清測定值均落在各自線性范圍(CK線性范圍：10～2 000 U/L；CK-MB線性范圍：線性范圍：10～2 000 U/L)之內。血清樣本-20℃以下保存備用，所有樣本避免溶血和脂血。

1.3 檢測方法 具體操作按試劑盒說明書進行。儀器處于良好狀態，室內質控在控，嚴格按照儀器的操作步驟進行操作。收集的樣本用生理鹽水、去離子水、正常血清分別做1:10稀釋，所有測試均連續測定3次取均值，將測定結果均值乘以稀釋倍數，即為最終結果。

1.4 重現性評價 從收集的樣本中隨機取100份血清，分別用生理鹽水、去離子水、正常血清做1:10稀釋，每個樣品每種稀釋液各分裝三個密閉管放置，在0 h、12 h、24 h分別取1份室溫平衡30 min后進行測定，所有測試均連續測定3次取均值，將測定結果均值乘以稀釋倍數，即為最終結果。

1.5 統計學方法 應用SPSS20統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，多組間兩兩均數比較采用SNK-q檢驗。檢驗標準為α=0.05。兩組數據間采用Pearson分析，相關系數r＞0.97為高度相關。

2 結果

2.1 不同稀釋液稀釋前后測定的CK、CKMB結果 收集的樣本用生理鹽水、去離子水、正常血清分別按1：10稀釋后測定表明，正常血清稀釋的樣品測定值與稀釋前CK及CK-MB測定值比較差異有統計學意義(P＜0.05)，而生理鹽水和去離子水稀釋樣品與稀釋前測定值比較差異無統計學意義(P＞0.05)，見表1。

表1 不同稀釋液稀釋前后測定的CK、CK-MB值比較(U/L，±s)

表1 不同稀釋液稀釋前后測定的CK、CK-MB值比較(U/L，±s)

注：與稀釋前原始血清比較，t=2.358，aP＜0.05；t=2.786，bP＜0.05。

樣本 標本總例數CK CK-MB稀釋前原始血清生理鹽水1：10稀釋去離子水1：10稀釋正常血清1：10稀釋568 568 568 568 1522.3±60 1568±55 1543±51 1798±63a243.7±12 251±10 247±10 288±15b

2.2 不同稀釋液稀釋后CK及CK-MB的相關性 生理鹽水1:10稀釋CK、CK-MB與稀釋前原始血清相關系數r分別為0.991、0.990，去離子水1:10稀釋CK、CK-MB與稀釋前原始血清相關系數r分別為0.982、0.993，正常血清1:10稀釋CK、CK-MB與稀釋前原始血清相關系數r分別為0.975、0.980，均r＞0.97，呈顯著相關。

2.3 不同稀釋液稀釋后CK及CK-MB測定值重現性評價 比較樣本經生理鹽水、去離子水、正常血清稀釋后，放置一定時間內的CK及CK-MB測定值的重現性，結果表明樣品經三種溶劑稀釋后，在0 h、12 h、24 h測定值間差異無統計學意義(P＞0.05)，重現性較好，見表2。

表2 不同稀釋液稀釋后CK及CK-MB重現性評價(U/L，±s)

表2 不同稀釋液稀釋后CK及CK-MB重現性評價(U/L，±s)

注：與0 h比較，aP＞0.05，bP＞0.05；與12 h比較，cP＞0.05。

測定時間CK CK-MB正常血清369±12 372±12a368±5bc0 h 12 h 24 h生理鹽水1198±23 1203±19a1201±17bc去離子水1210±20 1193±23a1207±26bc正常血清1260±17 1267±20a1253±19bc生理鹽水343±7 346±6a340±9bc去離子水341±11 343±12a344±9bc

3 討論

CK是細胞內重要的能量代謝酶,分布廣泛，主要存在于骨骼肌、心肌和腦組織中，CK有3種同工酶：CK-MM、CK-MB和CK-BB。生理情況下，CK及CK-MB水平受性別、年齡、地域、種族、運動狀態等多種因素的影響。CK-MB主要存在于心肌細胞的外漿層,當炎癥或梗死等原因引起心肌細胞受損或壞死時該酶大量釋放入血，引起血清中CK和CK-MB增高，是臨床診斷急性心肌梗死(AMI)常用的酶學指標。此外，肌肉損傷、腦損傷，或應用他汀類降脂藥、核苷類抗病毒藥，也可能會使CK及CK-MB升高，過勞、飲酒、肌肉注射也可能導致特發性CK及CK-MB持續升高[2]。因此臨床上常常遇到CK及CK-MB升高接近甚至超過檢測線性范圍的情況，而此時如果不對樣本進行稀釋，所得結果不可靠，容易導致臨床誤判。因此，在臨床工作中對超過檢測線性范圍的CK及CK-MB稀釋研究顯得尤為重要。

酶學生化測定是一系列的酶促反應過程，該過程中許多因素均可影響酶活性，如pH值、溫度、抑制劑、激活劑和介質等[3]。其中介質因素的影響往往被忽視，特別是待測血清中酶活性超過了檢測方法線性范圍時，需要對標本進行稀釋檢測，選用的稀釋液常常會影響檢測結果的準確性[4]。

血清CK、CK-MB超過試劑盒的檢測范圍時需要適當稀釋后才能測出結果，但由于人體血清中存在有一種內源性抑制物質，當對血清進行稀釋后其中的抑制物質也被稀釋，稀釋后的標本測定結果較真值要高[5]本試驗是在溫度等條件一致的情況下，觀察不同的稀釋液對CK及CK-MB測定的影響。本試驗中采用三種介質：生理鹽水、去離子水及正常血清。對高值樣本進行稀釋后分析表明，經正常血清稀釋的樣本，CK及CK-MB值與稀釋前差異有統計學意義(P＜0.05)，不能作為CK、CK-MB高值血清的稀釋液使用。其原因是正常血清作為稀釋液對高值血清CK、CK-MB進行稀釋后，測定時也把正常血清的CK、CK-MB值帶入了測定中，為減少誤差，需要把帶入的CK、CK-MB值從測定中扣除掉，這需要進一步的研究分析。而生理鹽水及去離子水稀釋的樣本與稀釋前差異無統計學意義。此外重現性和相關性分析均表明，三種溶劑稀釋后所測定樣本的CK及CK-MB值與稀釋前相比重現性較好，并且存在顯著的相關性，這些結果表明生理鹽水和去離子水適合作為CK、CK-MB高值血清樣本的稀釋液。

目前，臨床上常用的血清稀釋液為：生理鹽水、去離子水、正常人低值血清及緩沖液[6]。不同的測定項目、不同的方法及不同的儀器都會對標本稀釋液相應的要求[7]。本研究表明，生理鹽水、去離子水稀釋后的樣本與稀釋前差異無統計學意義(P＞0.05)，適合做高值CK及CK-MB血清稀釋介質。

[1]汪翼.肌酸激酶升高的臨床意義與特發性高肌酸激酶血癥[J].中國實用兒科雜志,2009,24(6):494-496.

[2]Kini AS,Lee P,Marmur JD,et al.Correlation of postpercutaneous coronary intervention kinase-MB and troponin I elevation in predicting midterm mortality[J].Am J Cardiol,2004,93(1):18-23.

[3]朱愛萍,呂秀英.不同稀釋介質對15個生化項目測定的影響[J].國際檢驗醫學雜志,2009,30(3):214-216.

[4]畢瑩,程陽.不同稀釋液對高水平CK、CK-MB測定的影響[J].貴陽醫學院學報,2010,35(5):509-510.

[5]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].3版.長沙:東南大學出版社,2006:422.

[6]Panteghini M,Pagani F.AACC creatine kinase MB(CK-MB)standardization material used as manufacturer's working calibrator is unable to harmonize CK-MB results between two commercial immunoassays[J].Clin Chem,2004,50(9):1711-1712.

[7]徐友文,王樂見,陳琪,等.不同免疫分析系統測定血清心肌標志物的比對分析和偏倚評估[J].中國衛生檢驗雜志,2013,23(2): 403-405.

R446.6

B

1003—6350（2016）15—2569—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.15.058

2015-12-27)

崔亞利。E-mail：chenyc717@sohu.com