乳腺癌患者基質金屬蛋白酶抑制因子－1和人類表皮生長因子受體－2表達的臨床意義研究

龐菁春，樊 靜

（重慶醫科大學附屬第一醫院，重慶 400021)

乳腺癌患者基質金屬蛋白酶抑制因子－1和人類表皮生長因子受體－2表達的臨床意義研究

龐菁春，樊 靜

（重慶醫科大學附屬第一醫院，重慶 400021)

目的 觀察基質金屬蛋白酶抑制因子－1（TIMP－1）和人類表皮生長因子受體－2（HER－2）在乳腺癌患者中的表達及其臨床意義。方法 收集2007年1月至2008年12月收治的乳腺癌患者98例，所有病例均隨訪5年，分析TIMP－1和HER－2在乳腺癌中的表達與不同臨床病理特征的關系，應用總生存時間（OS）評估患者預后情況。結果 全組腫瘤組織TIMP－1陽性表達率為57．14%，HER－2為42．86%，二者的表達與患者年齡、腫瘤大小、臨床分期和病理類型均無關（P＞0．05）；TIMP－1的表達與淋巴結轉移、組織學分級有關（P＜0．05）；HER－2與雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)狀態有關（P＜0．05）。TIMP－1表達者5年生存率為 61．79%，低于TIMP－1未表達者的66．64%，差異無統計學意義（P＞0．05）；HER－2表達者5年生存率為56．43%明顯低于未表達者的64．32%（P＜0．05）。結論 TIMP－1表達者可能與腫瘤淋巴轉移、組織分化有關，但不能作為不良預后的獨立指標；HER－2陽性表達者5年生存率明顯較低，可作為不良預后指標。

金屬蛋白酶抑制劑；基質金屬蛋白酶抑制因子－1；人類表皮生長因子受體－2；乳腺惡性腫瘤

乳腺癌是危害女性健康的惡性腫瘤，是異質性強的腫瘤，但隨著醫學科學技術的發展，對腫瘤疾病的治療或預后預測研究的深入，其發病率從20年前的大幅上升逐漸開始下降，許多預后因素如淋巴結狀態、內分泌受體狀態等的提出，有效地指導了乳腺癌患者的綜合性治療，使其死亡率得到明顯下降[1]。目前，有許多學者對基質金屬蛋白酶抑制劑（TIMP－1）和人類表皮生長因子－2（HER－2）開展了研究，但TIMP－1的陽性表達對腫瘤細胞的轉移抑制作用還存在爭議[2]，HER－2的表達與乳腺癌發生、轉移和預后有關。筆者通過對我院收集的98例乳腺癌患者檢測其TIMP－1和HER－2的表達，探索其臨床病理特征及預后的意義，現報道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料

收集我院2007年1月至2008年12月收治的乳腺癌患者98例，均為女性；年齡25～72歲，平均（55．4± 12．1）歲；術前均未接受過任何治療，臨床資料記錄完整。排除標準：術前接受新輔助治療、放射治療（簡稱放療）、化學治療（簡稱化療）；晚期轉移性乳腺癌、雙原位癌患者；臨床資料不全或標本不符合要求。入選患者中，左乳48例，右乳50例；腫瘤組織直徑0．8～10 cm，中位數為3．6 cm，≤2 cm者24例，2～5 cm者51例，＞5 m者23例；淋巴結轉移56例，無淋巴結轉移42例；組織學分級Ⅰ級53例，Ⅱ級28例，Ⅲ級17例；臨床分期Ⅰ期20例，Ⅱ期52例，Ⅲ期26例；浸潤性導管癌83例，其他類型癌15例；孕激素受體（PR）陽性64例，陰性34例；雌激素受體（ER）陽性66例，陰性32例。所有病例隨訪5年，采用定期門診復查和電話隨訪相結合的方式，隨訪了解患者術后治療、生存情況，隨訪截至2014年12月31日或死亡時間。

1．2 方法

采用免疫組織化學法檢測98例乳腺癌患者石蠟切片標本，觀察乳腺癌組織中TIMP－1和HER－2的表達水平。免疫組化試劑：鼠抗人TIMP－1，HER－2單克隆抗體及S－P試劑盒（福建福州邁新生物技術公司）。試驗操作步驟嚴格按照S－P法進行，所有標本經10%福爾馬林液固定，石蠟包埋，取6張切片，切片厚度4～5 μm，TIMP－1及HER－2單克隆抗體為一抗；DBA顯色后做陽性和陰性對照，以已知的陽性乳腺癌切片作為陽性對照，磷酸鹽緩沖液代替相應抗體作為陰性對照；試驗平行重復觀察2次，每張切片取代表性的高倍視野≥5，以保證結果的準確性。

1．3 檢測結果判定標準

TIMP－1陽性標準：TIMP－1呈棕色顆粒狀，主要定位于癌細胞細胞質或少許其他間質細胞內；按Shimizu等方法，根據發生棕色反應的陽性強度和棕色顆粒面積進行判斷。每張切片按照棕色陽性強度分為無著色、淡黃色、棕黃色和褐黃色，分別評分0，1，2，3分。切片棕色反應面積按陽性細胞數計算，陽性細胞數量＜5%為陰性（－）；陽性細胞數5%～25%為弱陽性（＋）；陽性細胞數達26%～50%為陽性（＋＋）；陽性細胞數＞50%以上為強陽性（＋＋＋），陽性數包括弱陽性、陽性和強陽性。

HER－2陽性標準：依據ASCO／CAP評分標準對HER－2陽性細胞數和著色程度評分分級。HER－2呈棕黃色顆粒，定位于癌細胞胞膜。細胞未染色或＜10%的腫瘤細胞胞膜染色為0級；＞10%的腫瘤細胞胞膜呈現微弱染色為1級；＞10%的腫瘤細胞呈現弱至中度的染色和＜30%的腫瘤細胞較強的染色之間的為2級；＞30%的腫瘤細胞呈浸潤性染色為3級。其中0級和1級為陰性，2級和3級為陽性。

1．4 統計學處理

采用SPSS 20．0統計軟件對數據進行統計分析，年齡、腫瘤大小、淋巴結轉移、組織學分級、臨床分期、病理類型、ER／PR狀態等計數資料采用百分比表示，不同病理特征組間比較采用 χ2檢驗。采用乘積極限法（Kapplan－Meier法）計算患者TIMP－1和 HER－2表達5年生存率，取Log－Rank法比較不同組間生存率。P＜0．05表示差異有統計學意義。

2 結果

2．1 與臨床病理特征的關系

全組腫瘤組織 TIMP－1陽性表達率達 57．14%（56／98），HER－2陽性表達率為 42．86%（42／98）。TIMP－1和HER－2表達與乳腺癌患者的年齡、腫瘤大小、臨床分期和病理類型均無關（P＞0．05）；TIMP－1的表達與淋巴結轉移、組織學分級有關（P＜0．05），與ER及PR狀態無關；HER－2與ER及PR狀態有關（P＜0．05），但與淋巴結轉移、組織學分級無關，詳見表1。

表1 TIMP－1和HER－2表達與臨床病理特征的關系(例)

2．2 與生存率的關系

乳腺癌患者TIMP－1表達者5年生存率為61．79%，低于陰性表達者的66．64%，但差異無統計學意義(P＞0．05)，見圖1。HER－2表達者5年生存率為56．43%，明顯低于陰性表達者的64．32%(P＜0．05)，見圖2。

圖1 TIMP－1表達與患者生存率關系曲線

圖2 HER－2表達患者生存率關系曲線

3 討論

目前，TIMP－1是有關乳腺癌治療和預后研究的熱點問題之一。TIMP－1能有效抑制基質金屬蛋白酶（MMPs）的活性，阻止MMPs對細胞外基質（ECM）的降解，而ECM是阻止腫瘤細胞向外擴散、轉移的天然生理屏障，腫瘤細胞必須穿越ECM，才可能進入血管或淋巴管遠處擴散。TIMP－1除了抑制MMPs降解作用外，還可抑制腫瘤血管的形成，從而抑制腫瘤細胞的生長和擴散。本研究結果顯示，TIMP－1高表達促進腫瘤細胞的淋巴轉移和腫瘤細胞的分化，理論上也認為TIMP－1表達越強，乳腺癌的預后越好。但有研究顯示，TIMP－1的增高，同時也伴隨著MMPs增高，導致TIMP／MMP的比例失衡，尤其是在轉移性乳腺癌中MMP－2，MMP－9顯著增高[3－4]，主要是因為機體受腫瘤細胞的刺激宿主細胞和腫瘤細胞同時產生大量的MMP的原因；當TIMP－1主要來源于腫瘤內源性表達時，TIMP－1反而會促進腫瘤細胞的增長，只有當來源于外源性時，才可能抑制腫瘤細胞的生長、擴散；表達TIMP－1的乳腺癌更具有侵襲性，這類患者術后更容易出現骨轉移[5]。本試驗結果顯示，TIMP－1在乳腺癌中陽性率占57．14%，TIMP－1陽性表達者生存率低于表達陰性者，但無顯著差異，可能與TIMP－1主要來源于內源性腫瘤細胞有關，在本研究中來源于浸潤性腫瘤的占89．29%（50／56）。該研究結論與張紹坤等[6]的研究一致。

HER－2是表皮生長因子受體家族中的一種跨膜蛋白，與配體相結合發揮類似酪氨酸激酶活性，通過細胞信號通路的調節細胞生長、增殖和分化作用。乳腺癌患者HER－2表達與預后的相關性研究已逐漸受到重視。有臨床研究報道，HER－2蛋白過度表達的患者相比無HER－2表達的患者的腫瘤負荷較大，腫瘤增殖指數高，組織分化低，淋巴轉移發生率高，患者的總生存率與無病生存率均減少[7]。本研究進一步證實，HER－2高表達者的5年生存率為56．43%，明顯低于HER－2陰性表達患者的64．32%，表明HER－2作為一項獨立的預后指標可預測乳腺癌患者預后。本結果與楊黎等[8]的研究報道一致，也有研究結果報道HER－2高表達者的5年無遠處轉移生存率并未見明顯差別。HER－2高表達導致乳腺癌患者生存率降低的因素，可能通過磷酸肌醇－3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）通路促進乳腺癌癌細胞的生長增殖、侵襲轉移的作用有關；同時可導致細胞表面整合素和黏合素功能的異常，促進了腫瘤細胞的擴散和轉移。王言等[9]的研究認為，HER－2在腋淋巴陽性乳腺癌患者中高表達與預后相關，HER－2陽性患者中5年生存率達55．2%，明顯低于陰性患者。在本次研究ER和PR狀態中，ER和PR陰性患者中HER－2高表達，這可能與ER和PR陰性也是乳腺癌預后不良的因素有關，ER和PR陽性通常乳腺癌發展比較緩慢，分化好，術后生存率高[10－11]。王鴻雁等[12]已經報道HER－2基因的擴增與ER和PR陰性有顯著的相關性。李春艷等[13]報道，ER及PR和HER－2均陰性乳腺癌的侵襲性更強，預后更差。目前，HER－2也成為乳腺癌的治療靶點，出現了曲妥珠單抗、拉帕替尼等藥物，目前還有有關數種新型HER－2靶向藥物單一或聯合治療的試驗正在進行，有望為HER－2靶向治療帶來新的改觀。

綜上所述，TIMP－1和HER－2可作為預測指標對乳腺癌患者的預后進行預測，TIMP－1高表達者可能抑制腫瘤細胞的擴散，但同時來源于內源性的TIMP－1有可能會促進腫瘤細胞的增殖、擴散，在對患者進行預后預測時需要綜合考慮相關因素。HER－2高表達患者5年生存率較低，預后較差，綜合考慮 TIMP－1和HER－2可以較好的預測乳腺癌患者的預后。但HER－2表達水平與臨床病理相關性還存在不同的認識，TIMP－1對乳腺癌患者的預后也存在不確定性，還有待進一步深入研究。

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Clinical Significance of TIMP－1 and HER－2 Expression in Breast Cancer Patients

Pang Jingchun,Fan Jing
(The First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing,China 400021)

Objective To investigate the clinical significance of tissue inhibitors of metalloproteinase－1 (TIMP－1)and human epidermal growth factor receptor 2(HER－2)expression in breast cancer patients．Methods 98 breast cancer patients from January 2006 to December 2007 were collected and followed－up for 5 years,then the relations between TIMP－1,HER－2 and clinical pathological features of breast cancer patients were analyzed,and the overall survival(OS)was applied to assess the patients′prognosis．Results The rate of TIMP－1 positive expression was 57．14%,and HER－2 was 42．86%．The TMP－1 and HER－2 expressions and patient age,tumor size,clinical stage and histological type were irrelevant(P＞0．05);TIMP－1 expression and lymph node metastasis,histological grade were relevant(P＜0．05);HER－2 and ER,PR status information were relevant(P＜0．05),the 5－year survival rate of patients with TIMP－1 expression(61．79%)was less than that of patients with no TIMP－1 expression(66．64%),and there was no statistical difference(P＞0．05);the 5－year survival rate of patients HER－2 expression(56．43%)was significantly lower than that of patients with the negative HER－2 expression(64．32%),and there was statistical difference(P＜0．05)．Conclusion TIMP－1 expression is related to lymphatic metastasis and tissue differentiation but it may be not an independent predictor of poor prognosis．The 5－year survival rate of HER－2 positive expression is significantly lower,which could be used as an adverse prognostic indicator．

metalloproteinase inhibitor;TIMP－1;HER－2;malignant breast tumors

R730．231；R737．9

A

1006－4931(2016)03－0021－04

2015－07－31)