消炎散質量控制研究

藍獻麗，巫玲玲，藍 彬，植國繁，羅春水，蔣敏捷，蔣偉哲，孔曉龍

（廣西醫科大學藥學院，廣西 南寧 530021）

消炎散質量控制研究

藍獻麗，巫玲玲，藍 彬，植國繁，羅春水，蔣敏捷，蔣偉哲，孔曉龍

（廣西醫科大學藥學院，廣西 南寧 530021）

目的 建立消炎散的質量控制方法。方法 用薄層色譜（TLC）法進行定性鑒別，用高效液相色譜（HPLC）法測定大黃素和大黃酚的含量。結果 薄層色譜斑點清晰集中，大黃素進樣量在 0．018 6～0．127 6 g（r＝0．999 6），大黃酚進樣量在 0．041 0～0．406 0 g（r＝1．000 0）范圍內與各自峰面積積分值呈良好線性關系。大黃素與大黃酚平均回收率分別為 100．37%，91．41%，RSD分別為3．57%，1．95%（n＝6）。結論 薄層色譜定性鑒別準確，HPLC法準確度高，專屬性強，重復性好，可用于消炎散的質量控制。

大黃素；大黃酚；消炎散；高效液相色譜法；薄層色譜法；質量控制

消炎散是在臨床經驗方的基礎上研制開發而成的 具有民族特色的壯藥復方制劑，由卡?。[節風）、棵蒙

廣西壯族自治區西南特色民族藥物開發工程研究中心項目，項目編號：桂教科研[2013]8號－3。秒（腎茶）、大黃、棵烘（大青葉）、冰片等5味中藥材組方，具有清熱解毒、消腫祛瘀、散結止痛功效，臨床通過透穴療法外用于咽喉疼痛、牙齦腫痛、皮膚軟組織感染、附件炎、尿路感染、痔瘡發炎等各種淺、中度炎癥性疼痛，有良好的抗菌消炎、鎮痛作用。

壯藥透穴療法是在傳統療法的基礎上結合廣西壯藥發展起來的創新性特色療法，是將壯藥貼敷于人體特定穴位上，以增強藥物療效而達到治療目的的方法，所選用的藥物和穴位、部位應視具體疾病和病情而定。消炎散主要取穴于關元、中極等穴位，多數炎性疼痛外用1次痛減，2～4次可治愈。此方中腫節風為君藥，具有清熱解毒、祛風除濕、通絡止痛功效，對金黃色葡萄球菌（包括耐藥菌株）、甲型鏈球菌、肺炎鏈球菌、卡他球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等均有一定的抑制作用[1]。腎茶、大黃及大青葉為臣藥，腎茶具有清利濕熱、排石通淋功效，現代醫學常用于治療腎炎、膀胱炎及尿道結石；大黃具有攻下導滯、瀉火解毒、祛瘀止血功效，對多種細菌有不同程度的抑制作用，尤其對葡萄球菌、鏈球菌最敏感，對白喉桿菌、枯草桿菌也較敏感；大青葉具有清熱解毒、涼血止血、消斑功效，大青葉煎劑在體外對金黃色葡萄球菌、甲型鏈球菌、腦膜炎雙球菌、肺炎鏈球菌等均有一定的抑制作用[1－2]。冰片為佐藥，具有開竅醒神、散熱止痛、利咽明目功效[2]。

近年來，隨著抗菌藥物的使用日益廣泛，由此導致的抗菌藥物不合理應用甚至濫用，正嚴重威脅著人類的健康[3]。消炎散的使用在一定程度上可避免或減少部分抗菌藥物的使用。此外，消炎散和傳統中藥比較，無需輸液、打針、吃藥，避免傳統給藥途徑造成的損害；費用較低，患者易接受，醫療成本低，醫療風險極低?？梢?，消炎散有較好的應用和研究前景。至今，本品尚未有可靠的質量標準控制其質量。為此，本研究中采用高效液相色譜（HPLC）法測定大黃素和大黃酚的含量，旨在為消炎散的質量控制及探索其藥效物質基礎提供參考依據。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

EL204型電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；XS205DU型十萬分之一電子天平（梅特勒－托利多儀器上海有限公司）；KQ－500DB型超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；安捷倫1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）。

1．2 試藥

消炎散（市售品，批號分別為20150612，20150721，20150727）；大黃素對照品（批號為110756－200110，純度為100%），大黃酚對照品（批號為110796－201319，含量以 99.6%計），大黃酸對照品（批號為 110757－200206），大黃對照藥材（批號為120984－201202），均由中國食品藥品檢定研究院提供。硅膠H板（青島鼎康硅膠有限公司，批號為20150704）。乙腈、甲醇均為色譜純；水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2．1 性狀

本品為棕黃色粉末，具有輕微的芳香氣味。

2．2 薄層色譜(TLC)鑒別(大黃)

取本品粉末1.0 g，加甲醇20 mL，浸泡1 h，濾過，取濾液5 mL，蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，再加鹽酸1 mL，加熱回流30 min，立即冷卻，用乙醚分2次振搖提取，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材0.2 g和缺大黃陰性對照品1.0 g，同法分別制成大黃對照藥材溶液和缺大黃陰性對照品溶液。再取大黃酸對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

照2015年版《中國藥典（四部）通則0502》薄層色譜法試驗，吸取上述3種溶液各10 μL，分別點于同一含羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以石油醚（30～60℃）－甲酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 mm）下檢視。置氨氣中熏后，日光下檢視。結果供試品溶液色譜中，在與對照品和對照藥材溶液色譜相應位置上顯相同的橙黃色熒光主斑點，陰性無干擾；日光下，供試品溶液在與對照品和對照藥材溶液色譜相應位置上，顯相同紅色斑點。結果見圖1。

2．3 檢查

粒度檢查：取同一批供試品（批號為 20150612）3份，照2015年版《中國藥典（四部）通則0982單篩分法》粒度和粒度分布測定法測定，結果通過七號篩的平均值為96.42%（＞95%）。

外觀均勻度檢查：取供試品適量，置光滑紙上，平鋪約5 cm，將其表面壓平，在明亮處觀察，結果消炎散色澤均勻，無花紋與色斑。

水分檢查：取同一批供試品（批號為 20150612）3份，照2015年版《中國藥典（四部）通則0982烘干法》水分測定法測定，結果平均含水量為8.40%（＜9%）。

裝量差異：取消炎散10袋，按2015年版《中國藥典（四部）制劑通則10115散劑檢查》散劑檢查法測定，裝量差異小于5%，表明該散劑裝量差異符合規定。

2．4 含量測定

2．4．1 色譜條件與系統適用性試驗

圖1 大黃薄層色譜圖

色譜柱：Luna?5μm C18柱（250mm×4.6mm，4.6μm）；流動相：乙腈－甲醇－0.1%磷酸（42∶23∶35）；流速：1 mL／min；檢測波長：254 nm；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。理論板數按大黃素峰計算應不低于3 000。結果陰性對照對含量測定無干擾，目標峰與相鄰色譜峰分離度均大于2．0，見圖2。

2．4．2 溶液制備

取本品粉末約0．75 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過；精密量取續濾液5 mL，置燒瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液10mL，超聲（功率500W）處理2min，再加三氯甲烷10mL，加熱回流1 h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，減壓回收溶劑至干，殘渣加甲醇適量超聲（功率500 W）處理1 min，轉移至10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。分別稱取大黃素對照品2．9 mg、大黃酚對照品5．1 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別制成每1 mL含大黃素58 μg、大黃酚101．59 μg的對照品溶液，作為貯備液。按消炎散的處方及工藝，制成不含大黃的陰性樣品，按供試品溶液方法制成陰性對照品溶液。

圖2 高效液相色譜圖

2．4．3 方法學考察

線性關系考察：分別精密量取0．8，1．5，2．5，3．5，4．5，5．5 mL大黃素對照品貯備液和1，2，4，6，8，10 mL大黃酚對照品貯備液，置25 mL容量瓶中，混勻，加甲醇定容至刻度，配成6個不同濃度的混合對照品溶液。分別進樣2次，每次10 μL。以對照品進樣量（X，μg）為橫坐標、峰面積積分值（Y）為縱坐標進行線性回歸，得大黃素線性回歸方程 Y＝4 110．834 9 X－9．574 9（r＝0．999 6），大黃酚線性回歸方程 Y＝5 587．482 6 X－2．479 6（r＝1．000 0）。結果表明，大黃素和大黃酚進樣量分別在0．018 6～0．127 6 μg和0．041 0～0．406 0 μg范圍內與各自峰面積積分值呈良好線性關系。

精密度試驗：精密吸取同一混合對照品溶液，按擬訂色譜條件測定。結果大黃素、大黃酚峰面積的 RSD分別為0．37%，0．26%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品（批號為20150612）溶液，按擬訂色譜條件測定，在常溫下分別于0，2，4，6，8，10，12，14，16，18 h時進樣，記錄大黃素、大黃酚峰面積。結果的 RSD分別為0．72%和0．74%(n＝10)，表明供試品溶液常溫下在18 h內穩定性良好。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為20150612）適量，共6份，分別按2．4．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結果大黃素、大黃酚的平均含量分別0．408 6 mg／g和1．177 4 mg／g，RSD分別為1．79%和1．10%（n＝6），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量（批號為20150612）的樣品（大黃素、大黃酚的含量分別為 0．408 6 mg／g，1．177 4 mg／g）粉末6份，分別精密加入大黃素對照品溶液（質量濃度為58 μg／mL）2．5 mL和大黃酚對照品溶液（質量濃度為71．71 μg／mL）6 mL，按2．4．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定，計算回收率。見表1。

表1 大黃素及大黃酚加樣回收試驗結果（n＝6）

2．4．4 樣品含量測定

取3批樣品，按2．4．2項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品和供試品溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定，結果見表2。試驗結果顯示，本品每1 g含大黃以大黃素（C15H10O5）、大黃酚（C15H10O4）平均值計算，均不少于0．60 mg。

表2 消炎散中大黃素和大黃酚含量測定結果（mg／g，n＝3）

3 討論

3．1 檢查

TLC鑒別法斑點清晰、陰性無干擾，可用于消炎散中大黃的鑒別，粒度、外觀均勻度檢查、水分檢查及裝量差異皆符合《中國藥典》要求。

3．2 含量測定

參考《中國藥典》及文獻[4－7]，流動相考察了甲醇－0．1%磷酸（85∶15）、甲醇－0．1%磷酸（82∶18）、甲醇－0．1%磷酸（80∶20）、甲醇－0．1%磷酸（78∶22），結果大黃素、大黃酚均出現較嚴重拖尾。參考文獻[8]將流動相調為乙腈－甲醇－0．1%磷酸溶液（42∶23∶35），經多次考察，選擇其為流動相，分離度好，保留時間適宜，峰形較好。本試驗中建立的含量測定方法準確度高，專屬性強，重復性好，可作為消炎散質量控制方法。

[1]范文昌，梅全喜，李楚源．廣東地產清熱解毒藥物大全[M]．香港：中醫古籍出版社，2011：86－87，444．

[2]宋立人，洪 恂，丁緒亮，等．現代中藥學大辭典上冊[M]．北京：人民衛生出版社，2001：116－122，138－140，891－892，1 263．

[3]胡 燕，白繼庚，胡先明，等．我國抗生素濫用現狀、原因及對策探討[J]．中國社會醫學雜志，2013，30（4）：128．

[4]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2015：23－24．

[5]巫 濤，顧明君．HPLC測定黃連上清膠囊中大黃素、大黃酚的含量[J]．中成藥，2005，27（4）：472－473．

[6]祁秀玲，孫會昌，王曉琦，等．香黃通便膠囊中大黃素、大黃酚含量測定的研究[J]．中國醫藥導報，2014，11（17）：93－99．

[7]孔慶菊．HPLC測定黃連上清熱神芎丸中大黃酸、大黃素、大黃酚的含量[J]．青島醫藥雜志，2015，45（5）：52－54．

[8]母小東，蘇 晶，汪楊麗，等．HPLC測定八正片中大黃素及大黃酚的含量[J]．食品與藥品，2014，16（3）：203－206．

Quality Control of Xiaoyan Powders

Lan Xianli，Wu Lingling，Lan Bin，Zhi Guofan，Luo Chunshui，Jiang Minjie，Jiang Weizhe，Kong Xiaolong
（Pharmaceutics College，Guangxi Medical University，Nanning，Guangxi，China 530021）

Objective To establish the quality control method of Xiaoyan Powders．M ethods Xiaoyan Powders was identified by TLC and the contents of emodin and chrysophanold were determined by HPLC．Results TLC spots were clear．Emodin and Chrysophanold had a good linear relationship among 0．018 6－0．127 6 μg（r＝0．999 6）and 0．041 0－0．406 0 μg（r＝1．000 0）respectively．The average recovery rate of emodin and chrysophanold were 100．37% and 91．41%，the RSD were 3．57% and 1．95% （n＝6）．Conclusion The qualitative identification is accurate，the HPLC method is accurate and specific with good reproducibility．It can be used for quantity control of Xiaoyan Powders．

emodin；chrysophanold；Xiaoyan Powders；HPLC；TLC；quality control

R284．1；R286．0

A

1006－4931(2016)08－0016－04

藍獻麗（1989－），女，廣西貴港人，在讀碩士研究生，研究方向為新藥開發，（電子信箱）435522979＠qq．com；蔣偉哲（1968－），男，博士研究生，教授，研究方向為新藥開發，本文通訊作者，（電話）0771－5358272（電子信箱 ）jiangweizhe6812＠163．com；孔曉龍（1966－），男，碩士研究生，副教授，研究方向為新藥開發，本文通訊作者，（電話）0771－5358272（電子信箱）KXL192＠163．com。

2015－07－14；

2015－08－29)