梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方對反流性食管炎模型大鼠胃腸激素的影響

劉小河，馬艷紅，何麗清，傅延齡

(1.湖北省中西醫結合醫院，武漢 430015;2.北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029)

梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方對反流性食管炎模型大鼠胃腸激素的影響

劉小河1，馬艷紅2，何麗清2，傅延齡2

(1.湖北省中西醫結合醫院，武漢 430015;2.北京中醫藥大學基礎醫學院，北京 100029)

目的:探討梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方對混合性反流性食管炎大鼠食管黏膜及胃腸激素的影響及作用機制。方法:采用食管十二指腸吻合術建立反流性食管炎模型，1周后假手術組、模型組給予生理鹽水灌胃，西藥組大鼠灌胃莫沙必利，各中藥組分別灌胃梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及合方;術后5周處死大鼠計算食管系數并做組織病理學觀察;檢測血清中胃腸激素GAS、MIL、VIP含量。結果:三方均可顯著降低血清中GAS、MIL含量，提高血清中VIP含量，降低食管系數，改善食管大體及病理組織評分，其中合方效果最顯著。結論:梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及合方能夠提高反流性食管炎大鼠GAS、MIL水平和降低VIP水平，增強食管下括約壓力，制止胃腸內容物反流到食管，從而保護食管黏膜起到治療反流性食管炎的作用。

梔子甘草豉湯;大黃黃連瀉心湯;反流性食管炎;胃腸激素

反流性食管炎(reflux esophagitis，RE)是胃食管反流病的一種，是指胃十二指腸內容物反流入食管，不僅引起燒心和反流等癥狀，還會引起咽喉、氣道等食管鄰近的組織損害。目前西藥治療本病常用的藥物主要有促胃腸動力藥、H2受體拮抗劑、PPI和抗酸藥等，雖然有一定的療效，但副作用較大，經濟負擔重且易復發。筆者采用清宣郁熱、暢利氣機治法，選用梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方。前期課題組觀察其對反流性食管炎模型大鼠氧化應激的影響［1-2］，此實驗觀察兩方及其合方對反流性食管炎模型大鼠胃腸激素的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康清潔級雄性3月齡SDIGS大鼠72只，體質量(240±20)g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供(許可證號SCXK(京)2007-0001)。

1.2 實驗藥品

梔子甘草豉湯是由梔子、甘草、淡豆豉組成，用量為成人每日用量梔子20 g、生甘草10 g、淡豆豉20 g。臨床用量按成人60 kg體質量計算單位體質量日服生藥量，大鼠用藥劑量為人用藥劑量的7倍(下同)。藥物加適量的水煎煮2次合并濾液，濃縮成含生藥0.583 g/ml的混懸液。大黃黃連瀉心湯是由大黃、黃連、黃芩組成，用量為成人每日用量制大黃8 g、黃連8 g、黃芩15 g。藥物加適量的水煎煮2次，合并濾液濃縮成0.362 g/ml的混懸液。梔子甘草豉湯合大黃黃連瀉心湯(簡稱合方)由梔子、生甘草、淡豆豉、大黃、黃連、黃芩組成，用量為梔子、淡豆豉各10 g，生甘草5 g，制大黃、黃連各4 g、黃芩8 g。藥物加適量的水煎煮2次，合并濾液濃縮成0.478 g/ml的混懸液。西藥為枸櫞酸莫沙必利分散片，制成0.175 mg/ml的混懸液(批號071207，成都大西南制藥股份有限公司生產)。

1.3 動物分組

雄性大鼠72只，在同樣環境下給予基礎飼料常規飼養1周后，體質量均衡隨機分成6組，每組12只，即假手術組、模型組、西藥對照組、梔子甘草豉湯組、大黃黃連瀉心湯組及其合方組(以下分別簡稱假手術組、模型組、西藥組、梔豉組、瀉心組、合方組)。

1.4 動物模型［3］

結合對雙載式多層穿梭車立體倉庫聯合進出庫流程的分析，設單次入庫兩個貨物分別為i和j，貨架的列方向為x，層方向為y，目標貨位分別為(xi，yi)和(xj，yj)；出庫兩個貨物分別為m和n，所在貨位分別為(xm，ym)和(xn，yn)；I/O位置用o點表示。按照進出庫貨物是否在同一層，單次聯合進出庫分為以下4種情況進行分類討論：

各組大鼠均于術前24 h禁食，術前禁水2～4 h，應用1%戊巴比妥鈉腹腔注射(30～45 mg/kg體質量)進行麻醉。固定在手術臺上，嚴格按照無菌操作進行模型制作。沿腹正中線開腹，將食管下段分離出迷走神經及血管，切斷食管;縫合賁門并荷包包埋入胃中，保留全胃，在十二指腸距幽門1 cm處側壁縱行切開0.4 cm，將其與食管下段進行端側吻合，用6-0無創傷縫線進行全層間斷密集縫合。關腹前，用無菌紗布吸盡腹腔中的液體，注入2～3 ml含有慶大霉素的生理鹽水(1萬/ml)。術后24 h禁食不禁水，術后1周內大鼠每日腹腔注射青霉素(1.6萬/100 g體質量)。假手術組行假手術，開腹后約10 min即關腹。

1.5 給藥方法

術后1周開始給藥。假手術組、模型組每日給予生理鹽水1 ml/100 g體質量灌胃，西藥組每日灌服莫沙必利1 ml/100 g體質量(0.175 mg/ml);梔豉組、瀉心組、合方組每日按1 ml/100 g體質量灌胃相應的湯藥。每周禁食稱重1次，連續給藥4周，觀察大鼠的活動表現、攝食量、進水量及精神狀態。

1.6 標本采集與檢測

末次給藥后禁食不禁水24 h，用10%水合氯醛按4 ml/kg體質量腹腔注射麻醉。腹主動脈取全血放入肝素鈉管中，3500 r/min離心20 min，取上清冷藏待測。將大鼠食管從咽部至吻合口整段取出縱行剖開，精密電子天平稱重后肉眼觀察并評分。將食管縱切一分為二，一份放入4%中性多聚甲醛溶液中固定48 h，常規組織脫水、透明、浸蠟、包埋。石蠟切片用于HE染色和免疫組化染色。另一份稱重后用生理鹽水制備10%食管勻漿，4℃3500 r/min，離心15 min取上清待測。

1.7 指標測定

1.7.2 食管系數 食管系數=食管濕重/體質量。

1.7.3 食管黏膜肉眼及病理形態學觀察 將食管從咽部至吻合口整段取出，生理鹽水輕輕沖洗食管，濾干稱重后縱行剖開觀察肉眼大體表現。石蠟切片、HE染色后進行光鏡觀察。

1.7.4 血清檢測 血清中胃腸激素 GAS、MIL、VIP的檢測由北京華英生物工程研究所代測。運用放免分析法(RIA)檢測大鼠血清中胃泌素(GAS)、胃動素(MTL)、血管活性腸肽(VIP)的含量影響。

1.8 統計學方法

采用SAS8.2統計軟件進行統計分析，數據以均數±標準差(±s)表示，正態分布及方差齊性檢驗后用F檢驗進行多組均數的兩兩比較，方差不齊者用秩和檢驗，P＜0.05，P＜0.01為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況

實驗中死亡大鼠共5只，均在術后1周內出現。其中模型組2只，西藥組、瀉心組、合方組大鼠各死亡1只。術后主要死亡原因為梗阻、腹腔撕裂等，死亡動物不進行統計。表1顯示，模型組、西藥組、梔豉組、瀉心組、合方組大鼠的體質量增長幅度明顯低于假手術組，梔豉組與合方組的平均體質量增加明顯高于模型組。

表1 各組大鼠體質量增加、食管系數和黏膜損傷評分(±s)

表1 各組大鼠體質量增加、食管系數和黏膜損傷評分(±s)

注:與假手術組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01;與模型組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01;與西藥組比較:▽P＜0.05，▽▽＜0.01

組 別 例數 體質量增加(g)食管系數 黏膜損傷評分假手術組12 141.40±36.14 6.77±0.64 0.00±0.00模 型 組 10 73.56±30.73△△ 13.58±2.32△△▽▽ 3.50±0.97△△西 藥 組 11 81.00±41.52△△ 11.69±1.85△△﹡﹡ 2.73±1.01△△梔 豉 組 12 102.80±19.91△△﹡10.31±1.03△△﹡﹡▽ 2.42±0.99△△﹡瀉 心 組 11 81.00±25.63△△ 10.34±1.15△△﹡﹡▽ 2.27±0.90△△﹡﹡合 方 組 11 106.33±30.52△﹡ 10.01±0.67△△﹡﹡▽ 2.00±0.82△△﹡﹡▽

2.2 食管系數及黏膜損傷評分

與假手術組比較，各組大鼠食管系數均明顯增高。與模型組比較，各治療組大鼠的食管系數均有明顯降低，各中藥組效果明顯優于西藥組。與假手術組比較，各組大鼠的黏膜損傷顯著。與模型組比較，梔豉組、瀉心組、合方組大鼠的黏膜損傷有不同程度的改善，合方組減輕黏膜損傷的效果明顯優于西藥組。

2.3 食管大體形態觀察及病理組織學變化

圖1顯示，假手術組大鼠食管黏膜完整、光滑且呈白色。經過造模手術后的大鼠食管黏膜粗糙，散在分布糜爛及潰瘍，出現不同程度的“樹皮樣”黏膜增生外觀，吻合口處最重逐漸向上累及，范圍可達食管的黏膜各段，食管壁明顯增厚，下段不規則擴張，但以模型組最為明顯，其他各治療組食管損傷程度明顯減輕。

圖1

光鏡下形態學改變看，圖2觀察到假手術組食管黏膜除上皮細胞層內間或存在少量炎細胞外，無其他明顯異常表現，其余各實驗組均可見不同程度的幾種組織學改變:一是炎性細胞浸潤，主要為中性粒細胞、淋巴細胞及少量嗜酸性粒細胞;二是鱗狀上皮過度增生，食管上皮層不同程度增厚，以基底層及棘層細胞增生為主，成纖維細胞增生;三是固有層乳頭延長，向表面延伸達上皮層厚度的2/3，角化過度，淺層毛細血管擴張、充血;四是糜爛、潰瘍，食管上皮部分或全層缺損，底部覆以滲出物及肉芽組織。各組組織學改變由下向上逐漸減輕，各治療組病理學改變均有不同程度的減輕。

圖2

2.4 血清中胃腸激素GAS、MIL、VIP的測定

表4顯示，模型組大鼠與假手術組大鼠比較，GAS、MIL明顯降低(P＜0.01)，VIP明顯升高(P＜0.01)。與模型組比較，各治療組GAS、MIL均有上升趨勢。與西藥組比較，各中藥組GAS均有增加，且合方組顯著(P＜0.05);瀉心組和合方組MIL均增加，且合方組極顯著(P＜0.01)。與模型組比較，西藥組、梔豉組、瀉心組、合方組VIP均下降。與西藥組比較，梔豉組、瀉心組和合方組VIP值更小，且合方組明顯(P＜0.05)。

表4 胃腸激素GAS、MIL、VIP的影響比較(±s)

表4 胃腸激素GAS、MIL、VIP的影響比較(±s)

注:與假手術組比較:△P＜0.05，△△P＜0.01;與模型組比較:﹡P＜0.05，﹡﹡P＜0.01;與西藥組比較:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

GAS MIL VIP假手術組組 別 例數12 36.47±5.82 316.40±49.11 24.03±11.47模 型 組 10 26.10±6.27△△ 219.01±64.78△△▽▽ 45.52±17.40△△西 藥 組 11 29.79±10.09 296.88±63.11＊＊ 38.66±17.27△梔 豉 組 12 36.72±10.62＊＊ 285.07±48.78* 32.00±15.15*瀉 心 組 11 32.91±4.23 303.63±32.74＊＊ 31.91±14.21*合 方 組 11 39.06±9.70＊＊▽ 393.71±97.46△△＊＊▽▽22.90±10.17＊＊▽

3 討論

梔子甘草豉湯見于《傷寒論》第76條:“發汗吐下后，虛煩不得眠，若劇者，必反復顛倒，心中懊，梔子豉湯主之。若少氣者，梔子甘草豉湯主之。”條文中提到虛煩不得眠、心中懊，以及梔子豉湯類方主治病證可能見到的“胸中窒”“心中結痛”等癥狀，與RE的燒心、反酸、胸痛等臨床表現頗為相似，故后世有用于治療RE者。梔子質稟輕浮，味苦性寒，能上入心胸而清熱除煩，常用于心熱、肝熱及胃熱諸癥，能迫熱下行而利小便，清除胃中積熱;生甘草性平、味甘，能益氣補中、緩急止痛、調和藥性;淡豆豉性涼、味甘辛，能解表除煩又能和降胃氣;甘草、淡豆豉與梔子苦寒藥同用，可護胃益氣和中，防其苦寒傷胃，三藥同用可清宣郁熱、益氣和中。

大黃黃連瀉心湯見于《傷寒論》第154條:“心下痞，按之濡，其脈關上浮者，大黃黃連瀉心湯主之。”第164條:“傷寒大下后，復發汗，心下痞，惡寒者，表未解也。不可攻痞，當先解表，表解乃可攻痞。解表宜桂枝湯，攻痞宜大黃黃連瀉心湯。”條文中大黃黃連瀉心湯用于治療熱痞，臨床表現為胃脘部有堵悶痞塞感覺、吞咽不利、口干等。本實驗所用大黃黃連瀉心湯由大黃、黃連、黃芩組成，三藥皆為苦寒之品，大黃瀉熱、和胃、開結，有推陳致新之力;黃芩、黃連清心胃之火，三藥合用邪熱得除，氣機流暢。

在本研究中，術后各組大鼠的體質量增加均明顯低于假手術組，可能與術中損傷較大或術后病變形成較重而影響營養有關。梔豉組與合方組的平均體質量增加明顯高于模型組。梔子甘草豉湯及合方均能清宣郁熱、益氣和胃，促進正氣恢復，故大鼠體質量增加效果明顯。實驗結果顯示，梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方均能減輕黏膜損傷程度，組織病理也較模型組有明顯改善，三方效果均優于莫沙必利。反流性食管炎突出的病理特點即鱗狀上皮增生和炎細胞浸潤，各治療組的食管系數較模型組均有顯著降低，提示莫沙必利、梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯以及合方均可不同程度地抑制食管黏膜增生以及減輕局部炎癥細胞的浸潤，其中合方效果最好，優于莫沙必利。關于三方抑制上皮增生以及抗炎機制將在今后的研究中進一步深入探討。

胃動素(MIL)、胃泌素(GAS)以及血管活性腸肽(VIP)是調控胃腸運動的重要因素，可直接與相應受體結合發揮效應，也可通過迷走神經介導，在中樞和外周水平上對胃腸運動進行精細調節［4］。GAS是最強的促胃酸分泌的激素，可使壁細胞最大限度地分泌胃酸［5］。下食管括約肌作為RE發病中的一個關鍵因素，其受胃腸激素的影響也較大，MIL、GAS均可增加下食管括約肌壓力(LESP)，而VIP可降低下食管括約肌壓力［6］。本實驗研究表明，與假手術組比較，模型組大鼠GAS和MIL明顯下降，而VIP明顯上升。用藥治療后，與模型組比較各治療組GAS和MIL明顯上升，而VIP明顯下降。證實了反流性食管炎不僅與胃腸激素GAS、MIL和VIP有關，而且梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及合方對其的治療可能是通過影響GAS、MIL和VIP實現的。進一步推測，梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及合方能提高反流性食管炎大鼠GAS、MIL水平和降低VIP水平，增強食管下括約壓力，制止胃腸內容物反流到食管，從而保護食管黏膜，起到治療反流性食管炎的作用。

［1］馬艷紅，劉小河，何麗清，等.梔子甘草豉湯、大黃黃連瀉心湯及其合方對反流性食管炎模型大鼠氧化應激影響［J］.山西中醫，2009，15(1):49-52.

［2］劉小河，馬艷紅，傅延齡.黃芩湯對反流性食管炎模型大鼠氧化應激和胃腸激素的影響［J］.時珍國醫國藥，2011，22(7): 1778-1780.

［3］王雯，李兆申，許國銘，等.不同方式建立3種反流性食管炎模型［J］.解放軍醫學雜志，2000，25(3):171-173.

［4］Grundy D，AI-Chaer ED，Aziz Q，et al.Fundamentals of neurogastroenterology:basicscience［J］.Gastroenterology，2006，130:1391-1411.

［5］Feng G，Xu X，Wang Q，et al.The protective effects of calcitonin gene-related peptide on gastric mucosa injury after cerebral ischemia reperfusion in rats［J］.Regul Pept，2010，160(1-3): 121-128

［6］魏良洲.胃食管反流病［M］.北京:人民軍醫出版社，2004:9.

Effects of Zhizi Gancao Chi Decoction，Dahuang Huanglian Xiexin Decoction and Their Combined Decoction on the Gastrointestinal Hormone in the Rat Model of Anti Reflux Esophagitis

LIU Xiao-he1，MA Yan-hong2，HE Li-qing2，FU Yan-ling2
(1.Hubei Provincial Hospital of Integrated Chinese＆Western Medicine，Wuhan 430015，China; 2.Basic Medicine College in Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China)

Objective:To observe the effects of Zhizi Gancao Chi Decoction(ZGCD)，Dahuang Huanglian Xiexin Decoction(DHXD)and the Integrated Decoction(ID)on Reflux esophagitis and the mechanism of action of Gastrointestinal hormones in rat’s esophagus mucosa.Method:Using esophagoduodenostomy to estabish the model of reflux esophagitis，after 1 week，normal saline was given to sham operated group and model group by intragastric administration，Mosapride was given to western medicine control group，corresponding Chinese crude drug was given to each Chinese drugs group which was ZGCD，PHXD and ID.After 5 weeks of operation execute all the rats，calculate esophago coefficient，do histopathology observation and test gastrointestinal hormones GAS，MIL，VIP content of serum.Result:The three decoctions could significantly reduce serum GAS，MIL content，increased serum levels of VIP，and improved esophagus body and score of pathological tissue，ID is best.Conclusion:ZGCD，PHXD and ID can increase GAS and MIL level，and lower VIP level with reflux esophagitis in rats，and then enhance the lower esophageal sphincter pressure and stop the gastrointestinal contents into the esophagus，thus protecting the esophageal mucosa，play the important role to treat the reflux esophagitis.

Zhizi Gancao Chi Decoction;Dahuang Huanglian Xiexin Decoction;Reflux esophagitis;Gastrointestinal hormones

R285.5

B

1006-3250(2016)06-0768-03

2015-12-01

劉小河(1978-)，男，副主任醫師，醫學博士，從事中醫藥防治心血管疾病的臨床與研究。