高效液相色譜法測定蒙藥毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量

銀金蘭，鄭 敏，李佳青

（內蒙古自治區人民醫院，內蒙古 呼和浩特 010017）

高效液相色譜法測定蒙藥毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量

銀金蘭，鄭 敏，李佳青

（內蒙古自治區人民醫院，內蒙古 呼和浩特 010017）

目的 建立測定蒙藥毛浩日查干 －5中二苯乙烯苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法 色譜柱采用 Eclipse Plus－C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）、ODS預柱，流動相為乙腈－水（25∶75），檢測波長320 nm，流速為1．0 mL／min。結果 二苯乙烯苷進樣量在0．05～0．75 μg與峰面積呈良好線性關系(r＝0．999 99，n＝6)，加樣回收率為98．34%，RSD為1．56%(n＝6)。結論 該法結果準確，可用于測定毛浩日查干－5中二苯乙烯苷含量。

毛浩日查干－5；二苯乙烯苷；含量測定；高效液相色譜法

蒙藥毛浩日查干－5由手掌參、黃精、玉竹、制何首烏、廣棗組方，具有補腎、滋補強身之功效；用于腎寒、腎虛、精血不足、筋骨酸痛、年邁體弱等癥。二苯乙烯苷是方中制何首烏藥材特有的生物活性成分，水溶性良好，同時具有補肝益腎的作用，現代藥理研究表明其還具有抗衰老、降低膽固醇、提高免疫功能、防止動脈硬化及護肝等作用[1－2]。且其含量較穩定，檢測重現性好，質量易控制。為此，將其作為毛浩日查干－5的指標性成分進行含量測定，現報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（美國 Agilent公司)，包括四元泵、在線脫氣機、柱溫箱、自動進樣器、VWD檢測器，HP化學工作站。乙腈為色譜純試劑，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純；對照品為2，3，5，4′－四羥基二苯乙烯－2－O－β－D葡萄糖苷（簡稱二苯乙烯苷，中國食品藥品檢定研究院，批號為 110844－201310）；毛浩日查干 －5(自制，批號為 140401，140402，140403）。

2 方法與結果

2．1 色譜條件

色譜柱：Eclipse Plus－C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），ODS預柱；流動相：乙腈－水（25∶75）；檢測波長：320 nm；流速：1．0 mL／min；柱溫：室溫；進樣量：10 μL。

2．2 溶液制備

取本品粉末約0．5 g，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，加流動相40 mL，超聲處理30 min（功率250 W，頻率20 kHz），放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得供試品溶液[3－5]。精密稱取二苯乙烯苷對照品適量，加流動相制成每100 mL含5 mg的溶液，即得對照品溶液。按處方量制備缺制何首烏藥材的陰性樣品，取約0．5 g，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備得陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

系統適用性試驗：取供試品溶液、二苯乙烯苷對照品溶液和陰性對照品溶液在上述色譜條件下進樣10 μL，記錄色譜圖，見圖1。可見陰性對照品溶液在二苯乙烯苷峰位置無相應峰出現，且二苯乙烯苷和其他組分色譜峰可很好分離，對二苯乙烯苷的測定無干擾；在與二苯乙烯苷對照品峰相對應位置上供試品具有相應色譜峰，且與相鄰峰的分離度大于1．5，按二苯乙烯苷峰計算理論板數為10 000以上，拖尾因子為1．03。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：精密量取二苯乙烯苷對照品溶液（50 μg／mL）1，2，4，8，10，15 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，以峰面積（A）對進樣量（C）進行線性回歸，得回歸方程 A＝0．936 2 C－1．78，r＝0．999 99(n＝6)。結果表明，二苯乙烯苷進樣量在0．05～0．75 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：精密量取同一對照品溶液10 μL，連續進樣6次。結果的 RSD為0．22%(n＝6)，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品（批號為140404）溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時進樣。結果的 RSD為0．20% (n＝6)，表明供試品溶液在10 h內穩定。

重復性試驗：取同一批樣品（批號為140401），依法制備6份供試品溶液，按擬訂方法分別進樣，測定峰面積并計算含量。結果平均含量為1．620 mg／片，RSD為1．60%(n＝6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品9份（批號為140401）約0．2 g，精密稱定，置50 mL棕色容量瓶中，分別按不同量級加入二苯乙烯苷對照品溶液（0．123 g／L），按供試品溶液制備方法制備，依法測定，計算回收率。結果見表1。

表1 二苯乙烯苷回收試驗結果(n＝9)

2．4 樣品含量測定

取3批樣品，按供試品溶液制備方法制備，依法測定。結果批號為140401，140402，140403的二苯乙烯苷含量分別每片為1．62，1．49，1．49 mg。

3 討論

目前，用HPLC法測定二苯乙烯苷含量所用的流動相多為乙腈－水的不同比例[3－5]。本試驗中比較了乙腈－水（19∶81）、乙腈－水（25∶75）、乙腈－水（24∶76），發現第2個峰形好，且與2010年版《中國藥典(一部)》藥材項下二苯乙烯苷含量測定所用流動相一致，故流動相選擇乙腈－水（25∶75）。

本法作為該藥品的含量測定方法，能保證藥品檢測時數據的真實性、可靠性，可作為保證藥品質量的檢測依據。

[1]許評比，李榮宗 ．人參、何首烏的毒性反應[J]．海峽藥學，2001，13（3）：112－113．

[2]李玉芳，和玄華．何首烏現代研究進展[J]．中成藥，1997，19（5）：37－39．

[3]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010:946．

[4]鄭麗娜，任海勇，張作平．HPLC法測定養血生發膠囊中二苯乙烯苷、大黃素、大黃素甲醚的含量[J]．中國藥物警戒，2011，8（4）：199－201．

[5]秦郁文，唐富麗．HPLC法測定七寶美髯軟膠囊中二苯乙烯苷的含量[J]．中國藥師，2013，16（5）：686－688．

R284．1；R286

A

1006－4931(2016)01－0066－02

銀金蘭，女，主任藥師，研究方向為藥物分析，(電子信箱)nmyyyjl＠sohu．com。

2015－06－30)