高效液相色譜法分離與測定鹽酸多塞平順反式異構(gòu)體的含量

韓春暉，張春泓，欒 爽

(遼寧省大連市藥品檢驗所，遼寧 大連 116021)

高效液相色譜法分離與測定鹽酸多塞平順反式異構(gòu)體的含量

韓春暉，張春泓，欒 爽

(遼寧省大連市藥品檢驗所，遼寧 大連 116021)

目的 建立鹽酸多塞平乳膏中鹽酸多塞平順反式異構(gòu)體分離與含量測定的高效液相色譜法。方法 色譜柱采用Kromasil 100A C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm），流動相為含0．1%三乙胺的0．2 mol／L磷酸二氫鈉溶液－甲醇（65∶35），流速為1．0 mL／min，檢測波長為254 nm，柱溫為50℃。結(jié)果 鹽酸多塞平質(zhì)量濃度在7．90～12．66 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系（r＝0．999 9），平均回收率為98．88%，RSD為1．32%(n＝9)。結(jié)論 該方法能良好地分離鹽酸多塞平順反式異構(gòu)體，可作為鹽酸多塞平乳膏中鹽酸多塞平的質(zhì)量控制方法。

高效液相色譜法；鹽酸多塞平；含量測定；異構(gòu)體

鹽酸多塞平乳膏是非類固醇類藥物，主要是利用鹽酸多塞平的H1阻斷作用治療皮炎、濕疹引起的瘙癢,可避免局部使用皮質(zhì)類固醇制劑所帶來的副作用。現(xiàn)行質(zhì)量標準采用紫外分光光度法于296 nm波長處測定含量[1]。本研究中發(fā)現(xiàn)，在該波長處有紫外吸收的雜質(zhì)，方法專屬性不強，且鹽酸多塞平順反式異構(gòu)體不能良好分離。為此，筆者建立了鹽酸多塞平順反式異構(gòu)體分離的高效液相色譜(HPLC)法，并測定其在鹽酸多塞平乳膏中的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695／2487／2998型高效液相色譜儀；Agilent 1200型高效液相色譜儀；島津LC－20A型高效液相色譜儀；Sartorius MSA225S－100－DA型分析天平（十萬分之一）。鹽酸多塞平對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為100069－201103）；鹽酸多塞平乳膏（市售品，批號為2010001，2010002，2008012，規(guī)格為每10 g中含鹽酸多塞平0．5 g）；甲醇、磷酸為色譜純，鹽酸、磷酸二氫鈉為分析純，試驗用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Kromasil 100A C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：含0．1%三乙胺的0．2 mol／L磷酸二氫鈉溶液（用 2 mol／L磷酸調(diào) pH至 2．5）－甲醇（65∶35）；流速：1．0 mL／min；檢測波長：254 nm；柱溫：50℃；進樣量：20 μL。色譜圖見圖1。理論板數(shù)按順式異構(gòu)體（Z）計算不低于1 500，反式異構(gòu)體（E）與順式異構(gòu)體（Z）峰的分離度大于1．5，乳膏空白基質(zhì)溶液對測定無干擾。

2．2 溶液制備

取鹽酸多塞平對照品適量，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，制成每1 mL中含0．1 mg的溶液，得對照品溶液。精密稱取樣品適量（約相當于鹽酸多塞平20 mg），加1%鹽酸甲醇溶液20 mL，置水浴中加熱充分攪拌使鹽酸多塞平溶解，再置冰浴中冷卻1 h以上，使基質(zhì)凝固，取出后迅速濾過，用冷1%鹽酸甲醇溶液洗滌殘渣數(shù)次，用同一濾器濾過，合并濾液與洗液，置100 mL容量瓶中，用1%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置10 mL容量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。將液態(tài)石蠟、天然脂肪醇、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、平平加A－20、甘油聚乙二醇－75硬脂酸酯、2，6－二叔丁基對甲酚、叔丁基－4－羥基茴香醚、甘油、羥苯乙酯、乙二胺四乙酸二鈉、純化水按處方組分比例稱取適量，加熱至75～80℃，油相與水相等溫混合，攪拌均勻，邊冷卻邊攪拌，直至成霜，作為空白基質(zhì)[2]；取約0．4 g空白基質(zhì)，按供試品溶液制備方法，即得乳膏空白基質(zhì)溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2．3 方法學考察

線性關系考察：精密稱取鹽酸多塞平對照品7．90，9．19，10．48，11．45，12．66 mg，分別置 100 mL容量瓶中，用1%鹽酸甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，作為系列溶液。分別量取上述溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定。以質(zhì)量濃度為橫坐標（X）、反式異構(gòu)體（E）與順式異構(gòu)體（Z）峰面積之和（Y）為縱坐標進行線性回歸，得到鹽酸多塞平的線性回歸方程 Y＝3．170 6×10－8X－5．803 6×10－5，r＝0．999 9（n＝5）。結(jié)果表明，鹽酸多塞平質(zhì)量濃度在7．90～12．66 μg／mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：取同一照品溶液，依法連續(xù)進樣6次。結(jié)果的 RSD為1．0%（n＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，12，16，24，48 h時進樣測定。結(jié)果的 RSD為 0．9%（n＝9），表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復性試驗：取同一批號的樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定。結(jié)果的 RSD為0．6%（n＝6），表明方法重復性良好。

回收率試驗：取鹽酸多塞平原料、輔料，按處方組分比例模擬工藝流程分別制成模擬乳膏，其中已知含量的鹽酸多塞平原料藥分別按標示量的80%，100%，120%加入到模擬乳膏中。依法測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 鹽酸多塞平回收試驗結(jié)果（n＝9）

2．4 樣品含量測定

取樣品3批(批號為2010001，2010002，2008012），依法制備供試品溶液，按外標法測定并計算含量。結(jié)果3批樣品中含鹽酸多塞平分別為標示量的101．3%，100．5%和100．7%。

3 討論

文獻[3－4]報道，測定鹽酸多塞平含量采用多塞平的紫外最大吸收波長為297 nm。本研究中通過DAD檢測器3D掃描發(fā)現(xiàn)，297 nm波長處峰純度不高。通過分析國內(nèi)企業(yè)的生產(chǎn)工藝得知，鹽酸多塞平的主要工藝雜質(zhì)為羥基物，該物質(zhì)于297 nm波長處有較強紫外吸收，嚴重干擾鹽酸多塞平的測定。故選擇測定波長為鹽酸多塞平吸收較強且雜質(zhì)吸收較弱的254 nm。

鹽酸多塞平原料藥為反式異構(gòu)體（E）與順式異構(gòu)體（Z）的混合物。早期含量測定中未將順反式異構(gòu)體分離[5]，導致色譜峰出現(xiàn)明顯肩峰。有研究報道，使用HPLC法[6]和毛細管氣相色譜法[7]測定順式異構(gòu)體含量。本研究中通過優(yōu)化色譜條件，將順反式異構(gòu)體完全分離，排除了測定過程中的相互干擾，相關研究尚未見有報道。

流動相的水相中加入0．1%的三乙胺，有效地改善了峰拖尾現(xiàn)象。試驗表明，在主成分與各雜質(zhì)的分離中順、反式異構(gòu)體峰最難分離，故使用順、反式異構(gòu)體峰的分離度進行系統(tǒng)適用性試驗。當順、反式異構(gòu)體峰的分離度大于1．5時，其他雜質(zhì)均可獲得良好分離。

本研究中采用了另外3個品牌的色譜柱，如AMERITECH Accurasil C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm)，Dilkma Platisil C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm），ThermoHyparcil GOLD C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm），分別在Waters 2695／2996型、Agilent 1200型與島津 LC－20A型液相色譜儀上進行方法耐用性試驗考察。結(jié)果提示，供試品溶液色譜圖中順反式異構(gòu)體之間及與相鄰雜質(zhì)峰間分離度均大于1．5，耐用性良好。

[1]國家藥典委員會．國家食品藥品監(jiān)督管理局《國家藥品標準》新藥轉(zhuǎn)正標準第 34冊[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：193．

[2]唐 芳，丁登峰，周金玉．復方鹽酸多塞平乳膏的制備與質(zhì)量控制[J]．中國藥房，2004，15(1):26－28．

[3]周利娟，艾嗚哲，谷亦平．高效液相色譜法測定鹽酸多塞平乳膏中鹽酸多塞平含量[J]．醫(yī)藥導報，2007，26(8):938．

[4]宋興發(fā)，高 山．高效液相色譜法測定鹽酸多塞平片含量[J]．醫(yī)藥導報，2009，28(10):1 359－1 360．

[5]張晨華．反相高效液相色譜法測定鹽酸多塞平片的含量[J]．中國藥師，2007，10(12):1 220－1 221．

[6]郝榮華．高效液相色譜法測定鹽酸多塞平順式異構(gòu)體限度[J]．藥學與臨床研究，2008，16(3):242－244．

[7]周利娟，艾鳴哲，谷亦平．毛細管氣相色譜法測定鹽酸多塞平順式異構(gòu)體含量[J]．醫(yī)藥導報，2006，25(4):344－345．

Separation and Determination of ZE－Doxepin Hydrochloride by HPLC

Han ChunHui,Zhang ChunHong,Luan Shuang
(Dalian Institute for Drug Control,Dalian,Liaoning,China 116021)

Objective To establish a method for the separation and determination of Doxepin Hydrochloride in Doxepin Hydrochloride Cream by HPLC．Methods Chromatography was performed on a Kromasil 100A C18(150 mm×4．6 mm,5 μm)column．The mobile phase was consisted of 0．1% triethylamine in 0．2 mol／L sodium dihydrogen phosohate solution－methanol(65∶35)．The flow rate was 1．0 mL／min．The detection wavelength was 254 nm．The column temperature was 50℃．Results The linear response range was 7．90～12．66 μg／mL for Doxepin Hydrochloride(r＝0．999 9)．The recovery of Doxepin Hydrochloride was 98．88%(RSD＝1．32%，n＝9)．Conclusion The method can separate ZE－doxepin hydrochloride,which was suitable for the determination of Doxepin Hydrochloride in doxepin hydrochloride cream．

HPLC;doxepin hydrochloride;determination;isomer

R927．11；R971＋．43

A

1006－4931(2016)01－0061－03

韓春暉，男，碩士研究生，主管藥師，主要從事藥物分析及藥品質(zhì)量標準研究，（電話）0411－84255311（電子信箱）luanshuangdl＠163．com。

2015－07－28)