當歸藥材霉變前后質量變化研究

孫 歡，劉勝蘭，胡 綱，唐建川，秦 雪

（1．四川省攀枝花市食品藥品檢驗所，四川 攀枝花 617000； 2．攀枝花鑫利中藥飲片有限公司，四川 攀枝花 617000）

當歸藥材霉變前后質量變化研究

孫 歡1，劉勝蘭1，胡 綱1，唐建川2，秦 雪1

（1．四川省攀枝花市食品藥品檢驗所，四川 攀枝花 617000； 2．攀枝花鑫利中藥飲片有限公司，四川 攀枝花 617000）

目的 考察當歸藥材霉變前后的質量變化，為藥材的霉變危害研究提供參考。方法 采用薄層色譜法鑒定霉變前后的當歸藥材薄層鑒別；采用高效液相色譜法測定阿魏酸與藁本內酯的含量變化。結果 薄層色譜中，霉變當歸藥材主斑點的直徑大小與熒光強度都比未霉變的藥材要小。阿魏酸與藁本內酯含量分別比霉變前降低了60．71%和53．16%。結論 霉變會嚴重影響當歸藥材的質量。

當歸；霉變；薄層色譜法；高效液相色譜法

霉變是中藥材在運輸、貯藏保管過程中常見的變異現象，直接影響中藥的質量與療效。有報道顯示[1－2]，市售中藥飲片的霉菌污染率為97．6%，平均污染量每1 g含3 200個，庫存中藥材平均污染霉菌每1 g含3 637個。目前，常采用水洗法、撞擊法、油擦法、醋洗發等方法除去霉變藥材表面霉跡，由于這種去霉后的藥材與正常藥材不易區別，且中藥材成分復雜、質量控制指標相對片面，這就為霉變藥材重入市場提供了條件。霉變中藥材不但會使藥材的治療效果大大下降，同時還可能威脅到患者的生命安全。當歸為傘形科（umbrelliferae）植物當歸 Angelica sinensis(Oliv．)Diels的干燥根，始載于《神農本草經》，具有補血活血、調經止痛及潤燥滑腸之功效[3]，為臨床使用頻率最高的中藥，素有“十方九歸”之稱，同時也是衛生部規定可以用于保健食品的原料。近年來研究發現，其還具有改善血液系統、增強免疫、利膽保肝以及抗腫瘤、抗放射性損傷等廣泛的藥理活性[4－5]。筆者考察了當歸藥材霉變前后的質量變化，以探討霉變對中藥材質量的影響，同時也為藥材的霉變危害研究提供參考。

1 儀器與試藥

DFY－300型搖擺式高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；KQ5200DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；XS205型電子天平（梅特勒－托利多儀器＜上海＞有限公司）；TU－1型手提便攜式紫外燈（上海科哲生化科技有限公司）；高效硅膠G板（青島市海洋化工廠分廠）；Waters 2695－2489型高效液相色譜儀（沃特世科技＜上海＞有限公司）。阿魏酸對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110773－201313，純度為99．6%）；藁本內酯對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為111737－201406）；正己烷、乙酸乙酯、乙醚、乙醇、甲醇均為分析純，水為雙蒸水。當歸藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號為120927－201315，120927－201014，120927－200613）。將無霉變藥材適當粉碎后置恒溫恒濕箱內（溫度為30℃，相對濕度為85%～90%），促使霉變發生并定期觀察，當藥材表面布滿灰色菌絲時即為霉變藥材。

2 方法與結果

2．1 薄層色譜鑒別[6]

取霉變與未霉變當歸藥材粉末各0．5 g，加乙醚20 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1 mL使溶解，分別作為供試品溶液與對照藥材溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，置展開劑飽和的層析缸內，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，色譜圖見圖1。在與對照藥材溶液色譜相應的位置上，供試品溶液色譜基本顯相同顏色的斑點，但主斑點的直徑大小與熒光強度都較小，且其中由下往上的第3個主斑點基本消失。

1－3．供試品溶液（批號為 120927－201315，120927－201014，120927－200613） 4－6．對照藥材溶液（批號為 120927－201315，120927－201014，120927－200613）

2．2 主成分含量測定

2．2．1 色譜條件及系統適用性試驗

色譜柱：Sapphire C18柱（250 mm×4．6 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）－0．085%磷酸溶液（B），梯度洗脫條件見表1；流速：1．0 mL／min；柱溫：25℃；檢測波長：320 nm；進樣量：10 μL。色譜圖見圖2。

表1 梯度洗脫表

圖2 高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

分別精密稱取阿魏酸、藁本內酯對照品適量，加甲醇制成每1 mL分別含阿魏酸12 μg／mL、藁本內酯180 μg／mL的混合對照品溶液。分別取未霉變及霉變的當歸粉末約0．3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，密塞，稱定質量，超聲處理45 min，放冷，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，靜置，取上清液，經0．45 μm濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

2．2．3 方法學考察

線性關系考察：分別精密吸取混合對照品溶液2，4，6，8，10，12 μL，按擬訂色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標 A、含量為橫坐標 C繪制標準曲線。結果回歸方程阿魏酸為 A＝879 588．2 C－27 358．91（R2＝0．999 4），藁本內酯為 A＝3．883 300 C－52 664（R2＝0．999 1），分別在 0．024～0．144 μg和 0．30～1．20 μg與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：精密吸取同一混合對照品溶液10 μL，連續進樣5次，測定峰面積。結果阿魏酸與藁本內酯峰面積的 RSD均≤3%為0．62%和0．49%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取按2．2．2項下方法制備的未霉變當歸供試品溶液，分別于0，2，4，6，8，10 h時進樣，按擬訂色譜條件下測定峰面積。結果阿魏酸、藁本內酯峰面積的 RSD均≤3%，為1．68%和2．76%(n＝6)，表明供試品溶液在10 h內基本穩定。

重復性試驗：取未霉變當歸藥材，按2．2．2項下方法制備供試品溶液5份，分別進樣。結果的 RSD分別為1．74%和2．09%(n＝5)。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量（阿魏酸0．086 9%，藁本內酯0．794%）的未霉變當歸藥材5份，分別精密加入阿魏酸、藁本內酯對照品適量，按2．2．2項下供試品溶液的制備方法制備，測定峰面積，外標一點法計算含量及回收率。結果見表2。

2．2．4 樣品含量測定

分別精密吸取混合對照品溶液及供試品溶液10 μL，按上述色譜條件進樣，測定峰面積，計算含量，結果見表3。

3 討論

阿魏酸是公認的天然抗氧化劑，具有明顯的改善心肌缺血、增加冠脈流量、擴張冠脈血管、抑制膠原和二磷酸腺苷(ADP)誘導的血小板聚集等藥理作用[7]，是近年來國際認知的防癌物質，與賦予當歸揮發油香味特征的藁本內酯一同被認為是當歸藥理作用的主要物質基礎[8－9]。王婕等[10]通過對30批當歸中阿魏酸與藁本內酯含量的測定數據進行系統聚類分析，得出阿魏酸含量與藁本內酯含量相關性較好，并指出為更全面地控制當歸藥材質量，應增加藁本內酯含量的測定。2010年版《中國藥典(一部)》當歸的質量控制中含量測定僅以阿魏酸為指標成分，藁本內酯只收載了定性的薄層鑒別，本研究中通過梯度洗脫了建立同時測定阿魏酸與藁本內酯含量的高效液相色譜法，并以此為指標評價霉變后當歸藥材的質量變化。

表2 加樣回收試驗結果(n＝10)

表3 霉變前后當歸中阿魏酸與藁本內酯的含量（%）

藁本內酯是當歸揮發油的主要成分，阿魏酸亦對熱不穩定，長時間加熱回流可造成成分丟失。本試驗中采用了超聲提取法，并考察了超聲20，30，40，60 min的提取效果，結果超聲60 min與40 min的含量測定值差異很小，即超聲40 min已提取較徹底。提取溶劑采用了2010年版《中國藥典（一部）》當歸藥材中阿魏酸的溶劑，即70%甲醇。在檢測波長的選擇上，通過分別對阿魏酸和藁本內酯對照品于200～500 nm波段進行波譜掃描，結果阿魏酸于310～328 nm波段時有強吸收帶，藁本內酯在276～290 nm與300～330 nm波段時有強吸收帶，其中320 nm是峰值吸收。綜合考慮后選取320 nm作為檢測波長。

本試驗結果顯示，薄層色譜圖中，幾乎霉變當歸藥材的所有主斑點都比未霉變的小，有的甚至消失，即各成分含量大大降低，這與高效液相色譜法測定結果相一致：霉變當歸藥材的阿魏酸含量僅為未霉變的39%，藁本內酯含量亦下降53%；且比較兩者的色譜圖發現，霉變當歸藥材色譜圖中的“雜質峰”相對較少且保留時間有異，即某些組分可能缺失或新增。但本試驗尚未進一步研究，缺乏有力證據。

綜上所述，霉變對當歸藥材的質量影響巨大，使用霉變的當歸藥材制劑或食用，不僅不能達到理想的藥效，還可能存在安全隱患。由于中成藥處方組分多，原料藥材成分復雜，不可能將藥品中所有物質列為檢驗項目，而只能進行指標性成分檢測，故國家藥品標準只能是作出合格藥品判斷的必要條件，而不是充分必要條件。目前，對于中成藥是否添加霉變藥材并無有效檢測手段，應重視對中藥材貯藏管理的研究，并可把篩查藥材霉變可能產生的共同特征物質作為監控霉變藥材重入市場的研究方向。

[1]張文娟．庫存中藥材霉變菌分離的研究[J]．北京醫科大學學報，1995，27(3):167．

[2]張秋實，郭朝暉，張曉明．中藥飲片霉菌污染狀況的調查[J]．甘肅中醫學院學報，1998，15(2):62－63．

[3]鄧永健，郭志偉，王 萌．當歸的化學成份及其藥理作用研究進展[J]．新疆中醫藥，2006，24(5):109－113．

[4]尹 華，董曉燁 ．當歸藥材的質量標準研究[J]．中醫藥學刊，2005，23(8):1 500－1 503．

[5]胡小平，李玉云，李先何．當歸多糖的成分及藥理學研究新進展[J]．中藥材，2004，27(1):70－72．

[6]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京：中國醫藥科技出版社，2010:124－125．

[7]唐文文，李國琴，晉小軍．當歸不同藥用部位有效成分研究[J]．中國中醫藥信息雜志，2012，19(12):58－60．

[8]楊 帆，肖遠勝，章飛芳 ．當歸化學成分的 HPLC－MS／MS分析[J]．藥學學報，2006，41(11):1 078－1 083．

[9]Lü JL，Duan JA，Tang YP，et al．Two new ceramides from the radix of Angelica sinensis[J]．J Chem Res，2008(11):658－661．

[10]王 婕，趙建邦，宋平順．30批當歸中阿魏酸、藁本內酯含量的測定[J]．中國實驗方劑學雜志，2011，17(16):70－73．

Quality Change of Angelicae Sinensis before and after Mildew

Sun Huan1,Liu Shenglan1,Hu Gang1,Tang Jianchuan2,Qin Xue1
(1．Panzhihua Institute for Food and Drug Control Panzhihua,Sichuan,China 617000; 2．Xinli Company limited of Chinese Herbal Pieces, Panzhihua,Sichuan,China 617000)

Objective To investigate the quality change of Angelicae sinensis before and after mildew,and to provide a valid theory basis for research about the harm of mildew medicinal materials．Methods Angelicae sinensis were distinguished by thin layer chromatography before and after mildew;the methods of high performance liquid chromatography was used to determine the content of ferulic acid and ligustilid．Results The principal spots ofAngelicae sinensis after mildew were smaller than those in Angelicae sinensis before mildew; compared with the Angelicae sinensis before mildew,the content of ferulic acid and ligustilid decreased by 60．71% and 53．16%．Conclusion The factor of mildew has great impact on the quality of Angelicae sinensis．

Angelicae sinensis;Mildew;thin layer chromatography;high performance liquid chromatography

R282．71；R286．0

A

1006－4931(2016)01－0044－03

孫歡（1989－），女，碩士研究生，藥師，主要從事藥品檢驗工作，（電話）0812－3336009（電子信箱）sunhuan6689＠163．com。

2014－10－27)