DPC4和Smurf2在子宮內膜腺癌中的表達及臨床意義

張　新，何　濤，蔡陽陽，梁麗丹，袁紅瑛

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·基礎醫學·

DPC4和Smurf2在子宮內膜腺癌中的表達及臨床意義

張新1，何濤1，蔡陽陽1，梁麗丹1，袁紅瑛2

摘要：目的檢測胰腺癌缺失基因(DPC4)及Smad泛素化調節因子2(Smurf2)在增殖期子宮內膜、子宮內膜不典型增生及子宮內膜腺癌組織中的表達，探討兩者與子宮內膜腺癌發生發展的關系。方法采用免疫組化SP法檢測DPC4和Smurf2在上述3種組織中的表達情況，并結合年齡、病理分期、組織學分級、肌層浸潤深度及淋巴結轉移等臨床特征進行相關性分析。結果與增殖期子宮內膜表達相比在子宮內膜腺癌中，DPC4呈低表達，而Smurf2呈高表達(均P<0.05)，兩者呈負相關(r=-0.525，P<0.05)，兩因子在子宮內膜腺癌中的表達均與其病理分級和臨床分期相關(均P<0.05)，而與淋巴結轉移、癌腫浸潤肌層深度及年齡無關(均P>0.05)。結論DPC4和Smurf2均與子宮內膜腺癌的發生發展相關，兩者均與其病理分級和臨床分期有關，而與淋巴結轉移及癌腫浸潤肌層深度無關，可作為腫瘤惡性程度及預后指標。

關鍵詞：子宮內膜腺癌；DPC4；Smurf2；免疫組化

作者單位：1.河南科技大學第一附屬醫院，河南洛陽 471003

2.河南科技大學醫學院，河南洛陽 471003

子宮內膜腺癌是發生于子宮內膜的一組上皮性惡性腫瘤，占女性生殖道惡性腫瘤的 20%～30%[1]，在美國位居女性惡性腫瘤第4位，而在我國發病率居婦科惡性腫瘤第2位，并且發病人群也越來越年輕[2]。雖然有外科手術、放療、化療等、治療手段，但針對腫瘤復發，對放療和化療抵抗的患者，仍然迫切需要替代療法[3]。因而，針對腫瘤標志物或信號通路的靶向分子治療策略逐漸成為研究熱點[4]。本研究收集河南科技大學第一附屬醫院手術切除子宮內膜石蠟標本91例，應用免疫組化技術比較胰腺癌缺失基因(deleted in pancreatic cancer locus 4,DPC4)和Smad泛素化調節因子2(smad ubiquitin regulatory factor 2,Smurf2)在子宮內膜腺癌表達情況，探討兩者與子宮內膜腺癌發生發展的關系。

1資料與方法

1.1一般資料收集河南科技大學第一附屬醫院2006年1月至2009年1月手術切除的子宮內膜標本91例。其中，子宮內膜腺癌石蠟標本53例，術前均未行放、化療以及激素治療，所有診斷均經手術后病理組織學確定。參照國際婦產科聯盟(federation international of gynecology and obstetrics，FIGO) 2009年手術病理分期標準進行臨床分期，Ⅰ～Ⅱ期35例，Ⅲ～Ⅳ期18例，其中高分化(G1)10例，中分化(G2)31例。低分化(G3)12例；肌層浸潤深度<1/2肌層29例，≥1/2肌層24例；有淋巴結轉移12例，無淋巴結轉移21例；年齡<50歲24例，≥50歲29例。選取手術切除的增殖期子宮內膜組18例，子宮內膜不典型增生組20例作為對照組。

1.2方法每塊石蠟標本持續切片5 μm，并通過免疫組化SP法(streptavidin-peroxidase，SP)檢測，分別檢測子宮內膜腺癌、子宮內膜不典型增生及增殖期子宮內膜組織中DPC4和Smurf2的表達。操作嚴格按照DPC4和Smurf2免疫組化試劑盒(北京博奧森公司)說明書進行，用PBS代替一抗作為陰性對照。結果判斷標準：兩因子陽性表達均位于胞質，根據染色程度和陽性細胞數綜合計算評分。染色程度：未染色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細胞數：10個隨機高倍鏡視野下無陽性細胞為0分，陽性細胞平均百分數<25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，>75%為4分。最后計算a+b之和0～3分為陰性，>4分為陽性。

1.3統計方法采用SPSS16. 0統計軟件分析，計數資料采用百分比(%)表示，組間比較采用χ2檢驗及Spearman等級相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1DPC4在子宮內膜組織中的表達DPC4在53例子宮內膜腺癌中的表達率為33.96%，低于在18例增殖期子宮內膜組的88.89%(χ2=16.244，P<0.001)和20例不典型增生組的55.00%(χ2=2.684，P>0.05)；3組比較χ2=16.533，P<0.001，差異有統計學意義。DPC4在增殖期子宮內膜組表達，見圖1。DPC4在子宮內膜不典型增生組表達，見圖2。

圖1　DPC4在增殖期子宮內膜中的表達(SP，×200)

圖2　DPC4在不典型增生子宮內膜中的表達(SP，×200)

2.2Smurf2在子宮內膜組織中的表達Smurf2在53例子宮內膜腺癌中的表達率為83.02%，高于在18例增殖期子宮內膜組的44.44%(χ2=10.201，P<0.05)和20例不典型增生組的60.00%(χ2=4.307,P>0.05)；三組比較，差異有統計學意義(χ2=10.892，P<0.005)。Smurf2在子宮內膜不典型增生組表達，見圖3。

圖3　Smurf2在不典型增生子宮內膜中的表達(SP，×200)

2.3DPC4和Smurf2在子宮內膜腺癌的表達DPC4在子宮內膜腺癌中的表達率與病理分級和臨床分期呈負相關，在病理分級中的表達逐漸降低(χ2=6.489，P<0.05)，隨著臨床分期的增高而降低，差異有統計學意義(χ2=6.346，P<0.05)；而與淋巴結轉移、癌腫浸潤肌層深度及年齡無關(均P>0.05)。Smurf2在子宮內膜腺癌的表達與病理分級和臨床分期呈正相關，在高分化、中分化和低分化分級中的表達逐漸增高(χ2=11.701，P<0.05)；隨著臨床分期的增高而增高，差異有統計學意義(χ2=3.900，P<0.05)；而與淋巴結轉移、癌腫浸潤肌層深度及年齡差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。DPC4與Smurf2在子宮內膜腺癌表達情況分別見圖4、圖5。

圖4　DPC4在中分化子宮內膜腺癌中的表達(SP，×400)

圖5　Smurf2在中分化子宮內膜腺癌中的表達(SP，×400)

例(%)

2.4DPC4與Smurf2表達的關系在53例子宮內膜腺癌組織中，DPC4陽性表達18例，陰性表達35例；Smurf2陽性表達44例，陰性表達9例；DPC4和Smurf2共同陽性表達為10例，共同陰性表達為1例。采用Spearman等級相關分析，DPC4和Smurf2表達呈負相關(rs=-0.525,P<0.001)。

3討論

子宮內膜腺癌是常見的惡性腫瘤，且發病年齡也越來越低，對女性的健康產生嚴重的影響。對子宮內膜腺癌復發、放療和化療抵抗的患者，腫瘤標志物或信號通路的靶向分子治療策略逐漸成為研究熱點。DPC4位于染色體18q21.1上，與胰腺癌的發生發展過程有極其密切的關系[5]。DPC4是胰腺癌發生發展中比較特異的腫瘤抑制基因[7]，首先由Hahn等于1996年報道[6]。它編碼的DPC4蛋白與果蠅的MAD(mather against pp-de-capentaplgic)和線蟲的Smad2、Smad3、Smad4蛋白同源[8]，所以DPC4亦稱Smad4。Smad4是轉移生長因子β(TGF-β)信號傳導通路的中心分子[9]，參與調節細胞的增殖分化與凋亡。經典的TGF-β，Smad依賴性信號通路，主要通過TGF-β結合于的TGF-βⅠ類受體(ALK-5)/Ⅱ類受體復合體，使Ⅰ類受體激活并產生磷酸化，促使Smad2、Smad3蛋白激活并磷酸化，后者與Smad4結合形成三聚體復合體。這種復合體進入并聚集于細胞核，調控靶基因的表達[10]，抑制腫瘤細胞增殖。本研究中DPC4在子宮內膜腺癌組中的表達低于在增殖期子宮內膜組及不典型增生子宮內膜組，并與子宮內膜腺癌病理分級和臨床分期相關，但DPC4的表達與淋巴結轉移及癌腫浸潤肌層深度無關，提示其可能在子宮內膜腺癌的發生發展中發揮重要作用。

Smurf2屬于泛素蛋白水解酶途徑中的E3泛素連接酶，TGF-β信號通路中Smad7又稱為抑制性Smad蛋白[11]，主要與激活后的TGF-β1類受體結合，并阻止信號在ALK-5至Psmad2/3與Smad4之間傳遞，而Smurf2主要存在于TGF-β信號通路中與Smad7結合，增強Smad7在TGF-β信號系統中的抑制效應，另一方面Smurf2介導Smad2、Smad3和Smad4三聚體復合體的降解，抑制TGF-β信號通路的活性[12]，從而促進了腫瘤的發生發展。本研究中Smurf2在子宮內膜腺癌組中的表達高于增殖期子宮內膜組及不典型增生子宮內膜組，與病理分級和臨床分期相關，也與淋巴結轉移及癌腫浸潤肌層深度無關，提示其也可能在子宮內膜腺癌的發生發展中發揮作用。

DPC4和Smurf2共同通過TGF-β信號傳導通路調節腫瘤的發生發展，共同參與子宮內膜腺癌的發生發展，而且兩者在子宮內膜腺癌的表達呈負相關，聯合檢測兩個因子可能對子宮內膜腺癌的復發和預后提供檢測指標。

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Expression and Clinical Significance of DPC4 and Smurf2 in Endometrial Carcinoma

ZHANG Xin1, HE Tao1, CAI Yang-yang1, LIANG Li-dan1, YUAN Hong-ying2

(1.First Affiliated Hospital,Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003,China；2.Medical College,Henan University of Science and Technology, Luoyang 471003,China)

Abstract:ObjectiveTo detect the expression of deleted in pancreatic cancer locus (DPC4) and Smad ubiquitin regulatory factor 2 (Smurf2) in the normal endometrium, atypical hyperplasia and endometrial adenocarcinoma, and explore the relationship between the expression and the development of endometrial adenocarcinoma.MethodsThe immunohistochemistry of streptavidin-peroxidase method was used to detect the expression of DPC4 and Smurf2 in the endometrial tissue. The relationship were analyzed between the expression and clinical characteristics of age, pathological stage, differentiation degree, tumor invasive depth and lymph node metastasis. ResultsDPC4 was lowly expressed in endometrial adenocarcinoma, however Smurf2 was showed high expression (P<0.05). The expression of the two facters were a negative correlation in endometrial adenocarcinoma (r=-0.525, P<0.05). They were correlation with the pathological grade and clinical stage of endometrial adenocarcinoma (P<0.05), but not a relationship between the expression and lymph node metastasis, tumor invasive depth and age (P>0.05). ConclusionDPC4 and Smurf2 were correlation with the development of endometrial adenocarcinoma. The expression of two factors were correlation with the pathological grade and clinical stage, but not with lymph node metastasis,tumor invasive depth. It can be used as an indicator malignant degree and prognosis of endometrial adenocarcinoma.

Key words:endometrial adenocarcinoma；deleted in pancreatic cancer locus 4；smad ubiquitin regulatory factor 2；immunohistochemistry

通信作者：袁紅瑛，女，教授，E-mail:125492984@qq.com

作者簡介：張新(1987-)，女，河南安陽人，醫師，從事婦科腫瘤研究工作。

收稿日期：2016-01-02

中圖分類號：R737.33

文獻標志碼：B

DOI：10.15926/j.cnki.issn1672-688x.2016.01.001

文章編號：1672-688X(2016)01-0001-04