胃癌患者外周血骨髓干細(xì)胞水平變化的初步研究

聶魯愚，朱海濤，謝敏

(1.南京醫(yī)科大學(xué)鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院 普外科，江蘇 南京　210008； 2.馬鞍山十七冶醫(yī)院 普外科，安徽 馬鞍山　243000； 3.江蘇省腫瘤醫(yī)院 普外科，江蘇 南京　210009)

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胃癌患者外周血骨髓干細(xì)胞水平變化的初步研究

聶魯愚1，2，朱海濤3，謝敏1

(1.南京醫(yī)科大學(xué)鼓樓臨床醫(yī)學(xué)院 普外科，江蘇 南京210008； 2.馬鞍山十七冶醫(yī)院 普外科，安徽 馬鞍山243000； 3.江蘇省腫瘤醫(yī)院 普外科，江蘇 南京210009)

[摘要]目的:比較胃癌患者與對(duì)照者之間外周血骨髓干細(xì)胞水平的差異及其在胃癌患者手術(shù)前后的變化，為胃癌診治提供新的診斷指標(biāo)。方法:收集12例胃癌患者術(shù)前以及術(shù)后第7天的外周血，以同期12例腹腔鏡膽囊切除患者的外周血作為對(duì)照組。采用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定骨髓干細(xì)胞占單核細(xì)胞的百分比，觀察胃癌患者循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平以及根治術(shù)前后循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平的變化。結(jié)果:外周血骨髓干細(xì)胞水平胃癌組明顯高于非胃癌的對(duì)照組(P<0.05)，根治性胃癌切除手術(shù)后明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論:骨髓來(lái)源干細(xì)胞在癌癥生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移等過(guò)程中起著重要作用，而外周血骨髓干細(xì)胞水平有望成為胃癌診斷、評(píng)估治療療效的重要參考指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]胃癌； 外周血； 骨髓干細(xì)胞

1971年Folkman[1]首次提出了腫瘤生長(zhǎng)依賴血管新生的假說(shuō)，1997年Asahara等[2]首次從外周血分離出一類源自骨髓的干細(xì)胞，它能夠分化為成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞從而構(gòu)建新生血管。從此骨髓來(lái)源干細(xì)胞在人類癌癥生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移的潛在作用及臨床意義得到大量關(guān)注。本研究對(duì)胃癌患者手術(shù)前后循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平進(jìn)行檢測(cè)，做對(duì)照研究，探討循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平測(cè)定在胃癌診斷、療效評(píng)估中的作用，以期推動(dòng)胃癌的診治水平。

1資料和方法

1.1一般資料

病例系鼓樓醫(yī)院普外科2015年3月至2015年6月行胃癌根治性切除手術(shù)的患者，共12例，術(shù)前均未行放化療，術(shù)后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為胃癌。選擇同期的擇期腹腔鏡膽囊切除患者12例作為對(duì)照組。所有患者均排除他汀類藥物使用史，均無(wú)冠心病、腦血管病史。所有患者均自愿并簽署知情同意書(shū)。

1.2試劑

鼠抗人CD45- PECyTM7、CD34- FITC、VEGFR2- Alexa Fluor 647、紅細(xì)胞裂解液購(gòu)自BD Biosciences公司，單克隆抗體CD133- PE購(gòu)自Miltenyi Biotec公司，BD FACS Aria Ⅱ型流式細(xì)胞儀。

1.3研究方法

流式細(xì)胞儀檢測(cè)循環(huán)骨髓干細(xì)胞占外周血單個(gè)核細(xì)胞百分比：兩組患者均清晨抽安靜狀態(tài)下空腹外周靜脈血2 ml，置于EDTA抗凝管中，4 ℃保存，2 h內(nèi)送檢。細(xì)胞表面標(biāo)志選用CD45-、CD34+、CD133+、 VEGFR2+。取干凈試管分別加抗體：CD45 3 μl,CD34、CD133各5 μl，VEGFR2 10 μl，同型對(duì)照組只加CD45 3 μl。加入50 μl抗凝血，震蕩混勻避光孵育20 min。加入1 ml紅細(xì)胞裂解液，震蕩混勻避光10 min后離心(1 500 r·min-1，共5 min)。棄上層液體，加1 ml磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)，再次震蕩混勻后離心(1 500 r·min-1，共5 min)，再次倒掉上層液體，加入200 μl PBS后上機(jī)檢測(cè)。胃癌組患者術(shù)后第7天再次檢測(cè)循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

胃癌組與對(duì)照組循環(huán)骨髓干細(xì)胞占外周血單個(gè)核細(xì)胞百分比分別為(0.046485±0.033518)%和(0.023104±0.015192)%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.201，P=0.039)。

胃癌組患者手術(shù)前后循環(huán)骨髓干細(xì)胞占外周血單個(gè)核細(xì)胞百分比分別為(0.046485±0.033518)%和(0.023864±0.011903)%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.880，P=0.015)。

3討論

胃癌是人類最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)胃癌的發(fā)病率已位居惡性腫瘤發(fā)病率的第2位，死亡率居第3位[3]。我國(guó)早期腫瘤發(fā)現(xiàn)率<5%，絕大多數(shù)患者初診時(shí)已是進(jìn)展期，5年生存率僅為30%～50%[4]。CA242、CA19- 9等經(jīng)典的腫瘤標(biāo)志物在胃癌診斷、治療效果、復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中的判斷作用一直備受爭(zhēng)議。

血管新生是腫瘤的重要特性之一，研究[5]表明，骨髓干細(xì)胞在腫瘤血管發(fā)生中起主要的決定性作用。外周血中骨髓來(lái)源干細(xì)胞濃度已成為一個(gè)有前途的和有效的檢測(cè)標(biāo)志，它可以更準(zhǔn)確、更直接地反映腫瘤血管生成活性。Ho等[6]比較了80例肝細(xì)胞癌和14名健康受試者的循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平，發(fā)現(xiàn)其在肝癌患者中顯著升高。近來(lái)大量研究顯示，外周循環(huán)中骨髓干細(xì)胞水平在肺癌[7]、卵巢癌[8]、腎癌[9]、結(jié)腸癌[10]中明顯升高。但也有研究[11]認(rèn)為，惡性腫瘤患者與正常人循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。由于許多混雜因素如心血管疾病、糖尿病、生活方式(包括吸煙、鍛煉身體等)、口服他汀類藥物等可能會(huì)影響研究結(jié)果，因此，驗(yàn)證外周循環(huán)中骨髓來(lái)源干細(xì)胞水平的診斷價(jià)值，對(duì)癌癥患者和健康對(duì)照組的選擇標(biāo)準(zhǔn)須嚴(yán)格。在本研究中，我們選擇的患者均排除他汀類藥物使用史，均無(wú)冠心病、腦血管病史。

Yang等[9]發(fā)現(xiàn)，腎癌患者術(shù)后3個(gè)月的循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平明顯低于術(shù)前水平，但也有研究發(fā)現(xiàn)癌癥患者術(shù)后循環(huán)骨髓干細(xì)胞濃度與術(shù)前水平比較無(wú)明顯變化[10]。這種矛盾的結(jié)果可能是由多種因素造成的，如手術(shù)后骨髓中干細(xì)胞動(dòng)員并向手術(shù)損傷部位聚集、手術(shù)損傷引起的應(yīng)激反應(yīng)等。因此，本研究均在術(shù)后第7天抽血復(fù)查循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平，以避免手術(shù)創(chuàng)傷對(duì)研究結(jié)果的影響。

本研究結(jié)果顯示，胃癌患者循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平較對(duì)照組明顯升高，根治性切除術(shù)后胃癌患者循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平明顯下降。說(shuō)明循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平可以作為診斷胃癌及判斷胃癌手術(shù)治療效果的一個(gè)重要指標(biāo)。然而由于循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平受多種因素影響,而流式細(xì)胞技術(shù)又相對(duì)復(fù)雜，限制了流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平在臨床中的應(yīng)用；另外循環(huán)骨髓干細(xì)胞水平與腫瘤浸潤(rùn)程度、放化療效果及遠(yuǎn)期生存率等指標(biāo)是否相關(guān)，尚需進(jìn)一步研究證實(shí)。

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Study of circulating bone marrow stem cells content change in patients with gastric cancer

NIE Lu- yu1，2，ZHU Hai- tao3，Xie Min1

(1.DepartmentofGeneralSurgery，DrumTowerHospital，NanjingMedicalUniversity，Nanjing210008，China2.DepartmentofGeneralSurgery，MaanshanShiqiyeHospital，Maanshan243000，China； 3.DepartmentofGeneralSurgery，JiangsuCancerHospital，Nanjing210009，China)

[Abstract]Objective： To compare the levels of circulating bone marrow stem cells between patients with gastric cancer and controls，observe its change in gastric cancer patients before and after radical resection in order to provide a new diagnostic index for the diagnosis and treatment of gastric cancer. Methods: Peripheral blood of 12 patients with gastric cancer before operation and 7 d after operation were collected. The peripheral blood of 12 patients with laparoscopic cholecystectomy were used as control group. The percentage of bone marrow stem cells of monocyte was detected by flow cytometry，the level of circulating bone marrow stem cells and its change in patients with gastric cancer before and after radical resection were observed. Results: The level of the circulating bone marrow stem cells in the gastric cancer group was significantly higher than that of control group(P<0.05)，and it was significantly decreased after radical resection(P<0.05). Conclusion: Bone marrow stem cells play a great role in cancer growth，invasion and metastasis，and the level of the circulating bone marrow stem cells has the important reference index for the diagnosis and treatment of gastric cancer．

[Key words]gastric carcinoma; peripheral blood; bone marrow stem cells

doi：10.3969/j.issn.1671- 6264.2016.02.018

[中圖分類號(hào)]R604

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671- 6264(2016)02- 0226- 03

[通信作者]謝敏E- mail：M- xie0828@medmail.com.cn

[作者簡(jiǎn)介]聶魯愚(1979-)，男，安徽馬鞍山人，主治醫(yī)師，在讀碩士研究生。E- mail：28640967@qq.com

[基金項(xiàng)目]江蘇省自然基金(BK20131438);江蘇省人事廳第十一批次六大人才高峰項(xiàng)目基金(WSW- 036，WSW- 038);南京醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院院基金資助項(xiàng)目

[收稿日期]2015- 10- 07[修回日期] 2015- 11- 27

[引文格式] 聶魯愚，朱海濤，謝敏.胃癌患者外周血骨髓干細(xì)胞水平變化的初步研究[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2016,35(2):226- 228.

·論著·