嬰幼兒血培養(yǎng)分離細(xì)菌及其耐藥性分析*

吳曉明，鐘華敏，關(guān)小珊，容莉莉，謝永強(qiáng)，劉海英，龐舒尹

(廣州市婦女兒童醫(yī)療中心檢驗(yàn)科，廣東廣州 510120)

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·論著·

嬰幼兒血培養(yǎng)分離細(xì)菌及其耐藥性分析*

吳曉明，鐘華敏，關(guān)小珊，容莉莉，謝永強(qiáng)，劉海英，龐舒尹

(廣州市婦女兒童醫(yī)療中心檢驗(yàn)科，廣東廣州 510120)

摘要:目的分析住院嬰幼兒(≤3個(gè)月)血培養(yǎng)分離病原菌的分布及其耐藥情況，為臨床合理選擇抗菌藥物治療血流感染提供參考。方法收集2011年1月至2015年5月該院疑似血流感染住院嬰幼兒(≤3個(gè)月)血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本分離病原菌299株，采用VITEK 2 Compact全自動(dòng)微生物分析儀進(jìn)行菌株鑒定和藥物敏感試驗(yàn)，分析菌株的構(gòu)成及耐藥情況。結(jié)果分離的299株病原菌中革蘭陽(yáng)性球菌169株(占56.5%)，主要為凝固酶陰性葡萄球菌95株(占31.8%)，其次為金黃色葡萄球菌28株(占9.4%)；革蘭陰性桿菌120株(占40.1%)，主要為大腸埃希菌53株(占17.7%)；真菌8株(占2.7%)；革蘭陽(yáng)性桿菌2株(占0.7%)。藥敏結(jié)果顯示，除萬古霉素、利奈唑烷外，革蘭陽(yáng)性球菌對(duì)其他所測(cè)試的抗菌藥物均呈現(xiàn)耐藥性；革蘭陰性桿菌除對(duì)阿米卡星、亞胺培南、美羅培南高度敏感外，對(duì)其他所測(cè)試的抗菌藥物均有耐藥性；真菌對(duì)所有抗真菌藥物高度敏感。結(jié)論住院嬰幼兒血液感染病原菌以革蘭陽(yáng)性球菌和革蘭陰性桿菌為主，耐藥情況嚴(yán)峻，臨床需合理選擇抗菌藥物，以提高療效并減少耐藥菌株的產(chǎn)生。

關(guān)鍵詞:嬰幼兒；血培養(yǎng)；病原菌；抗菌藥物；藥物敏感試驗(yàn)

血流感染是嚴(yán)重的小兒臨床感染性疾病，病情發(fā)展迅速，病死率較高，尤其是免疫功能較差的嬰幼兒。加之嬰幼兒病情復(fù)雜多變，用藥局限等原因，及時(shí)準(zhǔn)確的檢測(cè)病原菌和選擇合理的抗菌藥物是治療的關(guān)鍵。本研究分析本院兒童院區(qū)2011年1月至2015年5月出生不超過3個(gè)月的嬰幼兒血培養(yǎng)分離細(xì)菌的分布特點(diǎn)及耐藥性，為臨床醫(yī)生合理使用抗菌藥物提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1菌株來源收集本院2011年1月至2015年5月疑似血流感染住院嬰幼兒(≤3個(gè)月)血培養(yǎng)陽(yáng)性菌株299株。

1.2儀器與試劑美國(guó)BD公司BACTECTMFX血培養(yǎng)儀及配套的BD樹脂培養(yǎng)瓶；法國(guó)生物梅里埃公司VITEK 2 Compact全自動(dòng)微生物分析儀和配套的GP、GN、YST等鑒定卡，以及GN13、GN09、GP67、GP68等AST藥敏卡；迪景公司的血瓊脂平板及萬古巧克力培養(yǎng)基。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923及銅綠假單胞菌ATCC27853，均購(gòu)自原衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。

1.3方法靜脈采集患兒血液1～3 mL立即注入血培養(yǎng)瓶，放置到自動(dòng)血培養(yǎng)儀中進(jìn)行震蕩培養(yǎng)，儀器報(bào)陽(yáng)性時(shí)立即轉(zhuǎn)種血平板和巧克力平板，置35 ℃培養(yǎng)24～48 h，同時(shí)作涂片染色初步報(bào)告并電話通知臨床醫(yī)生，報(bào)告危急值；全程按照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)進(jìn)行操作，采用全自動(dòng)微生物分析儀進(jìn)行鑒定，并用配套的AST藥敏卡進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。藥敏判讀、解釋參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)2014年版的M100-S24標(biāo)準(zhǔn)[1]。采用大腸埃希菌ATCC25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923及銅綠假單胞菌ATCC27853作為質(zhì)量控制菌株。對(duì)主要病原菌進(jìn)行耐藥分析。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理對(duì)分離的病原菌進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分類，采用WHONET5.4軟件進(jìn)行耐藥性分析。

2結(jié)果

2.1分離菌株的分布分離革蘭陽(yáng)性球菌169株，占56.5%；革蘭陰性桿菌120株，占40.1%；真菌8株，占2.7%；革蘭陽(yáng)性桿菌2株，占0.7%。主要為凝固酶陰性葡萄球菌(CNS)95株，占31.8%；其次為大腸埃希菌53株，占17.7%；金黃色葡萄球菌28株，占9.4%，居第3位。主要分離菌株分布情況，見表1。

2.2主要分離菌株耐藥情況分析

2.2.1主要革蘭陽(yáng)性球菌耐藥性檢出耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)4株，占14.3%(4/28)；耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌(MRSCN)71株，占74.7%(71/95)。主要革蘭陽(yáng)性球菌耐藥性，見表2。

2.2.2主要革蘭陰性桿菌耐藥性產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)大腸埃希菌檢出率為49.0%(26/53)，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌檢出率為54.2%(13/24)。主要革蘭陰性桿菌耐藥性，見表3。

-：未檢測(cè)。

*：頭孢哌酮與舒巴坦為2∶1；-：未檢測(cè)。

2.2.3真菌耐藥性經(jīng)鑒定8株真菌均為念珠菌，對(duì)所檢測(cè)的5種真菌藥物兩性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑、氟康唑均有較高的敏感度。

3討論

本研究結(jié)果顯示，299株嬰幼兒(≤3個(gè)月)血培養(yǎng)分離菌株以革蘭陽(yáng)性球菌為主，共169株(占56.5%)，與徐瑗瑗等[2]報(bào)道的結(jié)果較為一致，但與夏涵等[3]報(bào)道的以革蘭陰性桿菌為主的結(jié)果有所不同，說明存在地區(qū)差異性；其中CNS檢出率最高，共檢出95株(占31.8%)，CNS在皮膚和環(huán)境中大量存在，不排除污染的可能，應(yīng)結(jié)合患兒的臨床情況謹(jǐn)慎考慮，必要時(shí)需再次送檢，建議在抽取標(biāo)本時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作；另外，金黃色葡萄球菌感染率為9.4%(28/299)仍然較高。革蘭陰性桿菌中以大腸埃希菌檢出率最高(占17.7%)，其次是肺炎克雷伯菌(占8.0%)，這與區(qū)海萍等[4]報(bào)道相似。由于本研究標(biāo)本為本院出生不超過3個(gè)月的嬰幼兒血培養(yǎng)陽(yáng)性標(biāo)本，患兒機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育不完善，網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和白細(xì)胞的吞噬能力薄弱，免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)水平較低，所以對(duì)侵入細(xì)菌的抵抗能力不足，可能因細(xì)菌擴(kuò)散導(dǎo)致敗血癥的發(fā)生。此外，嬰幼兒皮膚和黏膜較脆弱，易遭受細(xì)菌感染，而局部血管、淋巴管豐富，又給細(xì)菌進(jìn)入提供了有利條件。另外激素等免疫抑制劑的大量使用及近年來新生兒介入治療的發(fā)展使得嬰幼兒容易感染條件致病菌。

耐藥分析顯示，所有革蘭陽(yáng)性球菌對(duì)萬古霉素、利奈唑烷等均敏感，可作為治療革蘭陽(yáng)性球菌引起血流感染的首選藥物。此外，MRSA檢出率為14.3%(4/28)，MRSCN為74.7%(71/95)。CNS對(duì)青霉素類、紅霉素、克林霉素、頭孢類抗菌藥物耐藥率高達(dá)60%以上；金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素、紅霉素、克林霉素等抗菌藥物的耐藥率已達(dá)50%以上；除萬古霉素、利奈唑烷、替考拉林、慶大霉素，腸球菌對(duì)其他抗菌藥物的耐藥率均在50%以上，并且篩選出的高水平耐藥菌株中有1株對(duì)高濃度慶大霉素耐藥；溶血性鏈球菌對(duì)除紅霉素、克林霉素、復(fù)方磺胺甲噁唑、四環(huán)素外的其他抗菌藥物高度敏感；肺炎鏈球菌對(duì)復(fù)方磺胺甲噁唑、四環(huán)素、紅霉素、克林霉素和美羅培南的耐藥率均在50%及以上。

所有革蘭陰性桿菌對(duì)阿米卡星、亞胺培南、美羅培南等抗菌藥物均高度敏感，其中產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌的檢出率為49.0%(26/53)，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌的檢出率高達(dá)54.2%(13/24)，產(chǎn)ESBLs革蘭陰性桿菌檢出率較高，使得細(xì)菌對(duì)青霉素類、頭孢菌素類、單酰胺類抗菌藥物敏感性降低，臨床應(yīng)謹(jǐn)慎使用。而近一兩年來臨床比較少見的人蒼白桿菌的檢出率逐漸上升，該細(xì)菌為條件致病菌，其感染可能與嬰幼兒免疫功能低下有關(guān)，該菌對(duì)大多數(shù)頭孢菌素和青霉素類抗菌藥物不敏感，治療時(shí)應(yīng)考慮聯(lián)合用藥。本研究中陰溝腸桿菌檢出13株，該菌對(duì)氨芐西林高度耐藥，對(duì)氨曲南、環(huán)丙沙星、呋喃妥因和阿米卡星的敏感率也不高，在治療陰溝腸桿菌感染時(shí)，應(yīng)根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選擇合理的治療方案，避免濫用抗菌藥物。銅綠假單胞菌雖然檢出率不高，但因其為非發(fā)酵菌引起的血流感染在臨床治療較困難，病死率較高，其耐藥性也應(yīng)引起臨床重視，在單一抗菌藥物治療療效較差時(shí)也應(yīng)當(dāng)考慮聯(lián)合用藥。

本研究結(jié)果中真菌均為念珠菌，對(duì)5種抗真菌藥物的選擇余地較大，但抗真菌感染具有療程較長(zhǎng)的特點(diǎn)，需要療程性治療，避免耐藥菌株的產(chǎn)生；更要注意天然耐藥現(xiàn)象如克柔念珠菌對(duì)氟康唑耐藥，而光滑念珠菌對(duì)氟康唑敏感度也不高，在選擇藥物的過程中應(yīng)避免誤用而造成耐藥菌株的播散與流行。

血流感染是引起嬰幼兒死亡的主要原因之一。隨著各種新型抗菌藥物的發(fā)展和使用，以及各種免疫抑制劑和各種介入導(dǎo)管的使用，使得血流感染率和病原菌的耐藥率日趨增高，尤其對(duì)出生3個(gè)月內(nèi)的嬰幼兒，選擇抗菌藥物時(shí)需更加注意藥物的不良反應(yīng)，這已經(jīng)成為臨床對(duì)嬰幼兒血液感染治療的棘手問題。所以一般情況下，呈免疫抑制狀態(tài)和重癥監(jiān)護(hù)的患兒，以及靜脈置管等耐藥菌株感染危險(xiǎn)因素下的嬰幼兒，應(yīng)當(dāng)采用廣譜且不良反應(yīng)小的抗菌藥物進(jìn)行治療。另外，嚴(yán)格無菌操作觀念及消毒隔離措施，及時(shí)更換和拔除各種導(dǎo)管，合理使用抗菌藥物和各類激素等，均有利于減少血流感染的發(fā)生[5]。

參考文獻(xiàn)

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute．M100-S24 Performance standards for antimicrobial susceptibility testing[S]．Wayne，PA，USA：CLSI，2014．

[2]徐瑗瑗，徐少寶，熊自忠，等．2003～2009年血標(biāo)本分離病原菌分布及其藥敏分析[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2011，21(10)：2103-2105．

[3]夏涵，劉智勇，任章銀，等．24 141份血培養(yǎng)病原菌的分布及耐藥性分析[J]．中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22(20)：4607-4610．

[4]區(qū)海萍，彭桂堅(jiān)，羅麗貞，等．130例血培養(yǎng)病原菌分布及耐藥性分析[J]．現(xiàn)代醫(yī)院，2011，11(3)：71-73．

[5]孫長(zhǎng)貴，楊燕，陳堅(jiān)，等．5 356例血培養(yǎng)病原菌分布及耐藥分析[J]．浙江臨床醫(yī)學(xué)，2012，14(5)：530-532．

Analysis of blood culture isolates from infants and antibacterial resistance*
WuXiaoming，ZhongHuamin，GuanXiaoshan，RongLili，XieYongqiang，LiuHaiying，PangShuyin

(DepartmentofClinicalLaboratory,GuangzhouWomenandChildren′sMedicalCenter,Guangzhou,Guangdong510120,China)

Abstract:ObjectiveTo analyse distribution and antibacterial resistance status of pathogenic bacteria isolated from blood cultures of hospitalized infants,in order to provide references for rational use of antimicrobial agents in the treatment of bloodstream infection.MethodsA total of 299 strains of pathogenic bacteria isolated from positive blood culture specimens from infants(3 or less than 3 months of age) suspected with bloodstream infections in this hospital from January 2011 to May 2015 were collected,the bacteria identification and drug sensitivity test were carried out by using the VITEK 2 Compact automatic microorganism analyzer.The composition and antibacterial resistance of these isolates were analyzed.ResultsAmong the 299 strains of pathogenic bacteria,there were 169 strains of gram-positive cocci(accounted for 56.5%),including 95 strains of coagulase negative Staphylococcus (accounted for 31.8%) which was the main isolates,and followed by 28 strains of Staphylococcus aureus(accounted for 9.4%);there were 120 strains of gram-negative bacilli(accounted for 40.1%) and mainly were Escherichia coli(53 strains,accounted for 17.7%);otherwise,there were 8 strains of fungi(accounted for 2.7%) and 2 strains of gram-positive bacillus(accounted for 0.7%).The results of drug susceptibility test indicated that the gram-positive cocci had multiple drug resistance to antibacterial agents except for vancomycin and linezolid;the gram-negative bacilli shown multiple drug resistance except for amikacin,imipenem and meropenem.The fungus,however,displayed high sensitivty to all antifungal drugs.ConclusionGram-positive and gram-negative bacteria are the main pathogens of hospitalized infants with bloodstream infection,and are severely resistant to antibacterial agents.Rational use of antimicrobial agents should be recommend for improving clinical efficacy and prohibiting the emergence of drug-resistant strains.

Key words:infants；blood culture；pathogenic bacteria；antibacterial agents；drug sensitivity test

基金項(xiàng)目：廣州市衛(wèi)計(jì)委醫(yī)藥衛(wèi)生科技項(xiàng)目(20151A010034)。

作者簡(jiǎn)介：吳曉明，女，檢驗(yàn)技師，主要從事臨床微生物學(xué)與檢驗(yàn)研究。

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.006

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)05-0591-03

(收稿日期：2015-12-07)