EDTA依賴性假性血小板減少原因分析及糾正方法

曹錦梅，王兵

(南京醫科大學附屬淮安第一人民醫院檢驗科，江蘇 淮安 223300)

·經驗交流·

EDTA依賴性假性血小板減少原因分析及糾正方法

曹錦梅，王兵

(南京醫科大學附屬淮安第一人民醫院檢驗科，江蘇 淮安 223300)

目的 分析偶爾發生在血常規檢測過程中出現乙二胺四乙酸鹽(EDTA)依賴性假性血小板減少癥(EDTA-PTCP)的現象和糾正措施。方法分別使用末梢血稀釋法、抗凝劑替換法、網織紅細胞通道計數法、外周血涂片染色法等檢測方法，對淮安市一院2例EDTA-PTCP患者的標本進行測定。結果EDTA抗凝常規通道檢測血小板數減少，分別為14×109/L和7×109/L、枸櫞酸鈉抗凝法分別為122×109/L，99×109/L、末梢血稀釋法分別為116× 109/L，95×109/L、網織紅細胞通道計數法分別為127×109/L，105×109/L，血小板計數基本正常，直接外周血涂片染色血小板分布正常。結論EDTA依賴性假性血小板減少現象，可通過末梢血稀釋法、抗凝劑替代法、網織紅細胞通道計數法、外周血涂片染色法等方法加以糾正。

乙二胺四乙酸鹽；枸櫞酸鈉；血小板計數；血小板假性減少癥

血小板是血液的重要形態之一，在止血和凝血過程中發揮重要作用。因此，血小板的數量及功能在疾病診斷中顯得相當重要。目前血小板計數臨床各實驗室普遍使用的是全自動血細胞分析儀，其具有操作簡便、重復性好、準確度高、結果穩定等優點，被廣泛普及。EDTA在實驗室血常規檢查中被定為首選的抗凝劑，其對血細胞的形態和血小板的計數影響都很小，因此，被廣泛使用。但近年來，由此抗凝劑引起的假性血小板減少的現象時有報道，淮安市一院從2015年7月至12月就發現2例，本文分析其原因并探討其糾正方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例1：女，26歲，2015年7月2日卵巢囊腫術后來我院復查。輔助檢查：(1)無肝脾，淋巴及腫大；(2)心電圖正常；(3)超聲：子宮的大小和形態正常，子宮肌層光點均勻分布，附件無異常；(4)肝腎功能正常，血象檢查結果：白細胞3.59×109/L，血紅蛋白96 g/L，紅細胞3.47×1012/L，血小板18×109/L。病例2：男，85歲,糖尿病住院患者，2015年12月2日血常規檢查結果：白細胞5.57×109/L，血紅蛋白93 g/L，紅細胞3.17×1012/L，血小板5×109/L。全身無出血癥狀，其他輔助檢查：(1)無肝脾，淋巴及腫大；(2)心電圖正常；(3)凝血功能正常，肝腎功能正常，治療后血糖也控制在正常范圍內，為4.8 mmol/L。2例患者血小板檢測結果與臨床癥狀不符，在征得患者同意的情況下分別用末梢血稀釋法、抗凝劑替代法、網織紅細胞通道法、外周血涂片瑞氏染色法等方法予以糾正。

1.2 儀器與材料 采用日本SysmesXE-2100全自動血球分析儀及配套試劑，奧林巴斯雙筒顯微鏡；草酸銨稀釋液，瑞氏染液，清潔干燥無塵無油脂載玻片、EDTA-K2抗凝管、枸櫞酸鈉抗凝管。

1.3 方法 兩例患者分別EDTA-K2抗凝負壓管，枸櫞酸鈉抗凝負壓管抽取靜脈血2 mL，顛倒混勻后放置10 min分別用常規通道和網織紅通道各計數3次。同時各吸取末梢血20 μL加添到0.38 mL草酸銨稀釋液中，混勻后沖入計數池靜置15 min，顯微鏡下分別計數3次。另外再次末梢血直接涂片，EDTA-K2抗凝血涂片，瑞氏染色后顯微鏡觀察。

2 結 果

末梢血直接涂片瑞氏染色鏡檢顯示血小板形態、分布正常；EDTA-K2抗凝血涂片瑞氏染色鏡下看到血小板分布不均，片尾有微弱聚集，還可見到衛星現象[1]；EDTA-K2抗凝法實驗結果：常規通道血小板數異常；網織紅通道血小板數正常；枸櫞酸鈉抗凝計數結果：常規通道、網織紅通道血小板數基本正常；末梢血草酸銨稀釋法結果基本在正常范圍，結果見表1，血小板數正常參考范圍(100～300×109/L)。EDTA-K2抗凝血涂片瑞氏染色鏡下可看到衛星現象，見圖1；外周血直接涂片瑞氏染色鏡檢可見正常分布的血小板，見圖2(×1 000倍)。

表1 兩例患者不同檢測通道的PLT計數結果(×109/L)

圖1 血小板圍繞在白細胞周圍的衛星現象

圖2 正常散在分布的血小板

3 討 論

全自動血細胞分析儀利用電阻抗法或化學發光法原理來計數血小板，由于EDTA二鉀抗凝劑基本不影響細胞形態，對細胞數目及大小也無改變等優點，被國際血液學標準委員會認定并廣泛普及使用。而此抗凝劑所致的血小板假性減少現象屢見報道，引起人們廣泛關注。對患者發生EDTA-PTCP的可能原因，有資料表明是一種隱蔽性抗原存在于血小板的表面，EDTA可促進血小板活化，使血小板表面的隱蔽抗原和血漿中的自身抗體相結合產生一些活性物質，這些活性物質具有活化血小板纖維蛋白原受體的功能，從而使血小板聚集成一團[2]。血細胞分析儀常規通道計數原理是：不同大小體積的細胞，通過計數小孔時電阻值增加，從而引起電壓改變產生一個脈沖，根據脈沖的振幅大小來區分細胞大小，根據產生脈沖的數目來計數細胞多少。儀器只能辨別細胞大小，而辨別不了細胞類型，從而導致多個聚集成一團的血小板被當成了單個細胞計數或被劃入其他細胞計數范圍，導致血小板數目減少。

臨床上此類患者的發病率較低，為0.09%～0.21%[3]，這個現象可見于健康的人群中，也可見于某些疾病如癌癥、自身免疫性疾病、糖尿病、肝病及一些原因不明的病癥[4]。以上列舉了4種臨床上便于接受、操作簡單的糾正EDTA-PTCP的方法，經實驗證實是可行的，雖也出現過個別病例枸櫞酸鈉抗凝后也發生血小板聚集現象的報道[5]，但總體上枸櫞酸鈉抗凝作為糾正EDTA-PTCP的方法之一仍比較常用。另外在末梢血草酸銨稀釋法計數血小板時，使用的器材必須規范，混懸液滴入計數池后應靜置15 min后再計數，并在1 h內完成。時間過短，血小板未完全沉下；時間過長，血小板被破壞，都會使結果偏低[6]。EDTA-K2抗凝血在SysmesXE-2100全自動血細胞分析儀網織紅細胞通道檢測的血小板數結果更為可靠[7]。這是由于核酸染液對血小板進行了染色，再經熒光散射判斷，即可較為準確的得到血小板的數量。此法既不會把大血小板算成紅細胞中,也不易將破碎紅細胞誤認為血小板。因此,網織紅通道檢測的血小板數可作為EDTA-PTCP患者實際血小板數量。臨床實驗室檢驗人員，對于單純性血小板減少患者，應結合患者的病情、病史、凝血功能等實驗室報告綜合分析，發現可疑結果應及時與患者或醫生溝通，了解患者具體狀況，及時復檢，對于選擇何種糾正方法，視實驗室及患者具體情況而定，一定要保證檢測質量，為臨床醫生提供準確可靠的診斷依據。

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R558+.2

B

1003—6350（2016）11—1881—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.11.055

2015-12-24)

曹錦梅。E-mail：1114737825@qq.com