大理地區(qū)女性人乳頭瘤病毒感染亞型分析

李正金，楊錫彤，畢磊，王光明

(大理大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，云南 大理 671000)

大理地區(qū)女性人乳頭瘤病毒感染亞型分析

李正金，楊錫彤，畢磊，王光明

(大理大學(xué)附屬醫(yī)院病理科，云南 大理 671000)

目的 了解云南省大理地區(qū)女性人乳頭瘤病毒(HPV)的感染率、感染亞型、感染年齡等特點(diǎn)。方法應(yīng)用分子導(dǎo)流雜交技術(shù)對(duì)2012年4月1日至2015年8月31在我院體檢中心和婦產(chǎn)科門(mén)診就診的女性患者3 292例行HPV 21種亞型檢測(cè)，并對(duì)各個(gè)年齡段的感染情況進(jìn)行分析。結(jié)果3 292例樣本中，檢測(cè)到HPV陽(yáng)性445例，陽(yáng)性率為13.52%，共檢出除低危型HPV43型外的20種亞型；感染高危型411例，占92.36%；低危型53例，占11.91%；高危型和低危型混合感染19例，占4.27%；感染高危型病例中，有兩型或者兩型以上感染者70例，占高危型感染的17.03%；感染低危型病例中，有兩型或者兩型以上感染者4例，占低危型感染的7.55%；在20種HPV亞型感染中，HPV16型陽(yáng)性率最高(26.29%)，其次為HPV52亞型(23.15%)。各個(gè)年齡段中以＞60歲以上感染率最高(22.95%)，其次為≤20歲以下的感染(18.18%)，不同年齡段樣本陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.030)。結(jié)論云南省大理地區(qū)人乳頭瘤病毒的感染分布具有異質(zhì)性，年齡段感染率60歲以上最高，20歲以下次之，因此應(yīng)加強(qiáng)年輕女性人群HPV感染的宣傳和篩查力度。

大理地區(qū)；人乳頭瘤病毒；高危型；低危型；分子導(dǎo)流雜交

宮頸癌是婦女第二大常見(jiàn)惡性腫瘤，在一些發(fā)展中國(guó)家和地區(qū)的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中占第一位[1]。中國(guó)每年有約10萬(wàn)新發(fā)病例，占世界新發(fā)病例總數(shù)的大約1/5，每年約有3萬(wàn)婦女死于宮頸癌[2]。目前，對(duì)適齡女性進(jìn)行婦科相關(guān)篩查是預(yù)防和減少子宮頸癌發(fā)生的主要手段。流行病學(xué)和基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)在幾乎所有宮頸癌的標(biāo)本中均可找到人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)的足跡。進(jìn)一步研究顯示30歲以上的婦女持續(xù)感染HPV 8～24個(gè)月就有可能發(fā)生宮頸癌前病變-宮頸上皮內(nèi)瘤變，8～12年后可發(fā)展為浸潤(rùn)癌[3-4]。目前西方發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)在進(jìn)行疫苗的開(kāi)發(fā)及其臨床應(yīng)用的研究，但是有研究表明HPV的亞型分布具有明顯的年齡和地區(qū)特點(diǎn)，因此疫苗的臨床應(yīng)用需要考慮年齡和地區(qū)分布的異質(zhì)性。本研究回顧分析云南省大理地區(qū)到大理大學(xué)附屬醫(yī)院體檢中心和婦產(chǎn)科門(mén)診就診的3 292例女性患者的HPV感染情況，從而進(jìn)一步了解大理地區(qū)HPV的感染特點(diǎn)，包括各種亞型的分布、年齡分布，以便對(duì)相關(guān)感染及病變的防治提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2012年4月1日至2015年8月31日到大理大學(xué)附屬醫(yī)院體檢中心和婦產(chǎn)科門(mén)診就診的女性患者標(biāo)本共3 292例，年齡17～81歲。患者均知情同意。

1.2 標(biāo)本采集與處理 月經(jīng)第10～18天均由婦產(chǎn)科醫(yī)生以專(zhuān)用宮頸脫落細(xì)胞采集器采集細(xì)胞。

1.3 試劑儀器 PCR儀和雜交儀(熒光定量基因擴(kuò)增PCR檢測(cè)系統(tǒng)TL988型和PCR基因擴(kuò)增熱循環(huán)儀DTC型)均來(lái)自西安天隆科技有限公司(西安，中國(guó))，導(dǎo)流雜交技術(shù)及其配套試劑均購(gòu)自凱普生物科技有限公司(廣州市，中國(guó))，對(duì)21中常見(jiàn)的HPV基因型進(jìn)行分型檢測(cè)，包括15種高危型別：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68和6種低危型別：HPV6、11、42、43、44，CP8304(81)，其中中國(guó)人常見(jiàn)的基因型HPV53，16和CP8304(81)也在檢測(cè)范圍內(nèi)。

1.4 檢測(cè)流程 嚴(yán)格按照凱普生物科技有限公司“人乳頭瘤病毒核酸擴(kuò)增分型檢測(cè)試劑盒(雜交試劑)”的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，簡(jiǎn)單描述如下：樣本DNA提取，PCR擴(kuò)增(每次擴(kuò)增分別設(shè)置一個(gè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照)，導(dǎo)流雜交，酶標(biāo)顯色，結(jié)果判讀，根據(jù)芯片是HPV基因型分布相應(yīng)位點(diǎn)判斷檢測(cè)樣本的基因型。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，不同年齡段間的發(fā)生率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 一般情況 共檢測(cè)3 292例患者，其中HPV感染陽(yáng)性患者445例，陽(yáng)性率為13.52%。共檢測(cè)出20種HPV亞型，包括15種高危型HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68和5種低危型HPV 6、11、42、44，CP8304(81)，只有HPV43型亞型未檢出，感染高危型占92.36%；低危型占11.91%。

2.2 各個(gè)年齡段感染情況 在3 292例患者中，除9例患者年齡不清楚除外，以≥60歲感染率最高(22.95%)，其次為≤20歲的感染(18.18%)，最低陽(yáng)性率為30～40歲年齡段(12.18%)，各個(gè)年齡段陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.030)，見(jiàn)表1。

表1 各個(gè)年齡段HPV陽(yáng)性情況

2.3 單一感染與多重感染情況 單一感染占88.54%，兩型或者兩型以上混合感染占21.57%，其中僅僅高危兩型或者兩型以上混合感染占總感染數(shù)的16.40%，低危兩型或者兩型以上混合感染占總感染數(shù)的0.90%，高危和低危兩型或者兩型以上混合感染占總感染數(shù)的4.27%，見(jiàn)表2。

表2 單一和多重感染情況(n=445)

2.4 HPV亞型感染分布 高危亞型感染最多的是HPV16亞型，陽(yáng)性率為(26.29%)，其次為HPV52亞型(23.15%)；低危亞型感染中以HPV81亞型最高(5.84%)，各種亞型的感染情況，見(jiàn)表3。

表3 HPV亞型感染分布(n=445)

2.5 各個(gè)年齡段感染亞型情況 在3 292例患者中，有9例患者年齡不清楚除外，其余3 283例患者中，受檢患者的年齡以30～50歲居多，占所有檢測(cè)對(duì)象的73.80%。在各個(gè)年齡段各種感染亞型的分布具有異質(zhì)性，見(jiàn)表4。

表4 各個(gè)年齡段HPV亞型感染分布(例)

3 討 論

宮頸癌一般由HPV，尤其是高危亞型持續(xù)感染而形成，由宮頸上皮內(nèi)瘤變發(fā)展為浸潤(rùn)癌可長(zhǎng)達(dá)8～12年[4]。要預(yù)防宮頸癌的發(fā)生，及早發(fā)現(xiàn)、診斷和治療就顯得尤其重要。因此，了解本地區(qū)HPV感染情況、亞型分布及其年齡特點(diǎn)對(duì)于有效地開(kāi)展宮頸癌的篩查和以后相關(guān)疫苗的使用具有重要的意義[5]。

有研究報(bào)道子宮頸癌在兩個(gè)年齡段(35～39歲和60～64歲)為發(fā)病高峰[6-7]，而在我們的研究中顯示以≥60歲年齡段感染率最高(22.95%)，其次為≤20歲年齡段的感染率(18.18%)，但是該研究中對(duì)女性HPV感染的檢測(cè)主要集中在30～50歲的人群(73.80%)，而20歲以下病例數(shù)較少，無(wú)法真實(shí)地反應(yīng)該年齡段的HPV實(shí)際感染率。因此需要加強(qiáng)針對(duì)所有女性，尤其是年齡在20歲以下的女性的宣傳、篩查和防治力度。HPV感染以單一型為主(79.10%)，但是多重感染是否更容易促發(fā)宮頸癌仍存在爭(zhēng)議，需要加大對(duì)HPV感染陽(yáng)性的隨訪和研究。

在我們針對(duì)大理地區(qū)人群的研究中，高危亞型感染最多的是HPV16亞型(26.29%)，其次為HPV52亞型(23.15%)；低危亞型感染中以HPV81亞型最高(5.84%)，其感染亞型與中國(guó)人常見(jiàn)的基因型HPV 53、16和CP8304不完全相符，也與國(guó)內(nèi)的有報(bào)道的地區(qū)，以及與日本、泰國(guó)、南非等地的優(yōu)勢(shì)感染亞型均不相同[4，6-9]。因此可以說(shuō)明HPV感染率的高低、不同種族和地區(qū)HPV感染的亞型具有一定的異質(zhì)性，主要取決于病毒因素、宿主因素和環(huán)境因素[10-12]。在臨床治療和疫苗開(kāi)發(fā)上，需要考慮不同地區(qū)感染亞型的分布。

綜上所述，云南省大理地區(qū)HPV的感染亞型以及年齡段的感染率和感染亞型均具有異質(zhì)性，感染人群以年輕育齡階段的女性居多，但是也呈現(xiàn)了年輕化的特點(diǎn)，因此應(yīng)該加大對(duì)年輕女性群體HPV感染的宣傳和篩查力度。

[1]Parkin DM,Bray F,Ferlay J,et al.Estimating the world cancer burden:Globocan[J].Int J Cancer,2001,94(2):153-156.

[2]李崢嶸,李沛隆.宮頸癌發(fā)病情況及細(xì)胞DNA定量分析技術(shù)應(yīng)用于宮頸癌篩查的臨床研究[J].臨床醫(yī)學(xué),2014,33(6):94-96.

[3]Sherman,SM,Minshall C,Coombes R,et al.Awareness and knowledge of HPV and cervical cancer in female students:A survey(with a cautionary note)[J].J Obstet Gynaecol,2015,Sep 25:(1-5):1-5.

[4]Xu XX,Zhou JS,Yuan SH,et al.Distribution of HPV genotype in invasive cervical carcinoma and cervical intraepithelial neoplasia in Zhejiang province,Southeast China:Establishing the baseline for surveillance[J].Int J Environ Res Public Health,2015,12(9): 10794-10805.

[5]Saraiya M,Unger ER,Thompson TD,et al.US assessment of HPV types in cancers:implications for current and 9-valent HPV vaccines [J].J Natl Cancer Inst,2015,107(6):dvj086

[6]Laowahutanont P,Karalak A,wongsena M,et al.Prevalence of high risk human papillomavirus infection with different cervical cytological features among women undergoing health examination at the National Cancer Institute,Thailand[J].Asian Pac J Cancer Prev,2014, 15(14):5879-5882.

[7]Zhang WY,Xue YZ,Chen M,et al.Prevalence of high-risk human papillomavirus infection in different cervical lesion among organized health-examination women in Shanghai,China[J].Chin Med J (Engl),2008,121(16):1578-1582.

[8]Lebelo RL,Bogers JJ,Thys S,et al.Detection,genotyping and quantitation of multiple HPV infections in south African women with cervical squamous cell carcinoma[J].J Med Virol,2015,87(9): 1594-1600.

[9]張繼業(yè),李曉娟,徐衛(wèi)華,等.海南地區(qū)人乳頭瘤病毒感染情況與亞型分析[J].海南醫(yī)學(xué),2015,26(10):1460-1462.

[10]Garrido JL.30 years of preventive studies of uterine cervical cancer 1982-2012[J].Eur J Gynaecol Oncol,2015,36(3):252-254.

[11]Lee B,Suh DH,Kim K,et al.Utility of human papillomavirus genotyping for triage of patients with atypical squamous cells of undetermined significance by cervical cytology[J].Anticancer Res,2015,35 (7):4197-4202.

[12]Miller RA,Waters LL,Mody DR,et al.Squamous cell carcinoma of the cervix:a cytology-histology-human papillomavirus correlation in clinical practice[J].Arch Pathol Lab Med,2015,139(6):776-781.

Research on the genotype distribution of human papillomavirus infection among female in Dali area.

LI Zheng-jin, YANG Xi-tong,BI Lei,WANG Guang-ming.Department of Pathology,the Affiliated Hospital of Dali University,Dali 671000,Yunnan,CHINA

ObjectiveTo investigate the genotype distribution,infection rate and age characters of human papillomavirus(HPV)infection among females in Dali area of Yunnan Province.MethodsThe genotype analysis was carried out by molecular hybridization in 3 292 female patients with HPV infection,who admitted to Medical Examination Center and Department of Gynecology&Obstetrics in our hospital from 1 April 2012 to 31 August 2015,and the infection situation of different age groups were also analyzed.ResultsOf 3 292 cases,445 cases were infected by HPV, with the positive rate of 13.25%.All the subtypes of HPV except HPV43 were detected.411(92.36%)positive cases belonged to high-risk type HPV infection and 53(11.91%)positive cases belonged to low-risk type HPV.Multi-HPV-genotype infection including high-risk type and low-risk type was observed in 19(4.27%)cases.Of 411 cases of high-risk type,70(17.03%)cases had two or more than two types.In 53 cases of low-risk type,4(7.55%)cases had two or more than two types.In 445 cases infected with HPV,the most common HPV genotypes were HPV-16(26.29%)and HPV-52 (23.15%).The highest positive rate was＞60 years old category(22.95%),followed by＜20 years old category(18.18%). There were significant differences in the positive rate among the various age groups(P=0.03).ConclusionInfection distribution of HPV in Dali region of Yunnan Province has heterogeneity.The highest positive rate was＞60 years old category,followed by＜20 years old category.We should enhance the publicity and the screening of HPV in young women.

Dali area;Human papillomavirus(HPV);High-risk type;Low-risk type;Molecular hybridization

R730.261

A

1003—6350（2016）11—1815—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.11.030

2015-12-11)

王光明。E-mail：gmwang1991@hotmail.com