臍血腎上腺髓質素及胎盤滋養細胞凋亡與FGR的相關性分析

謝暉，劉紅艷，陳軍

(安康市婦幼保健醫院婦產科1、檢驗科2，陜西 安康 725000)

臍血腎上腺髓質素及胎盤滋養細胞凋亡與FGR的相關性分析

謝暉1，劉紅艷1，陳軍2

(安康市婦幼保健醫院婦產科1、檢驗科2，陜西 安康 725000)

目的研究臍血腎上腺髓質素(ADM)、胎盤滋養細胞凋亡與胎兒生長受限(FGR)的相關性。方法選擇2012年1月至2014年12月在我院分娩的生長受限的胎兒76例，記為觀察組，再選擇同期在我院分娩的適齡兒76例，記為對照組。對比兩組胎兒的一般情況，然后進行ADM、胎盤滋養細胞凋亡指數、Bc1-1蛋白以及Caspase-3蛋白水平的檢測對比，最后進行相關性分析。結果觀察組胎兒的體重、身長、坐高以及頭圍均明顯小于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)；觀察組ADM、凋亡指數分別為(64.27±17.32)pg/ml、(34.82±9.47)%，均明顯高于對照組的(48.93±12.11)pg/ml、(8.04±2.46)%，并且觀察組Bc1-1蛋白水平低于對照組，而Caspase-3蛋白水平高于對照組，以上各項指標比較差異均有統計學意義(P＜0.05)；ADM與Bc1-1表達水平呈明顯的負相關(r=-0.461，P=0.000)，與Caspase-3蛋白表達水平呈正相關(r=0.783，P=0.000)，而凋亡指數與ADM、Bc1-1蛋白均無顯著相關性(r=0.283，P=0.827；r=0.362，P=0.103)，與Caspase-3蛋白呈正相關(r=0.821，P=0.000)。結論臍血ADM與滋養細胞相關凋亡蛋白Bc1-1蛋白以及Caspase-3蛋白的共同作用下形成FGR。ADM與胎盤滋養細胞的凋亡水平與FGR的發生存在顯著的相關性。

胎兒生長受限；臍血；腎上腺髓質素；胎盤滋養細胞；凋亡；相關性

初生兒的生長發育受多種因素影響，其中胎兒期吸收的營養在很大程度上決定了后期的生長發育，尤其是相關激素的調節在一定程度上代表了代謝水平，因此影響身體質量。而激素等作用的效果受激素量的多少、作用時間長短的影響，因此，不同胎齡的初生兒在體格方面顯示出較大的差別，其中胎兒生長受限(FGR)就是在一定程度上無法達到適齡兒的生長情況的新生兒，對其深入研究顯得尤為重要[1-2]。臍血腎上腺髓質素(ADM)能擴張臍血管，同時具有氧氣及物質的供給，而胎盤滋養細胞提供主要的營養，兩者相關水平的波動對胎兒的生長影響深遠[3]。鑒于此，本文通過對我院FGR與適齡兒的ADM、胎盤滋養細胞水平進行對比并探究其中的相關性，現將結果報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月至2014年12月在我院分娩的生長受限的胎兒76例作為觀察組，其中男嬰41例，女嬰35例；胎齡36.4～40.4周，平均(38.6±2.18)周。選擇同期在我院分娩的適齡兒76例作為對照組，其中男嬰40例，女嬰36例；胎齡37.1～41.3周，平均(39.3±2.23)周。兩組胎兒的性別、胎齡等基本資料比較差異均無統計學意義(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法 (1)臍血在胎兒出生后斷臍取靜脈臍血4 ml，在分離后于-70℃的環境下保存。采用放射免疫法檢測ADM水平，其中試劑盒來自北京華埠力特生物技術研究所。(2)胎盤是在分娩后在胎盤母體面取得體積約為8 cm3的正方體組織塊，然后加用10%甲醛溶液固定并通過石蠟包埋后得到4 μm的切片。采用免疫組織化學法對胎盤組織中的 Bcl-1和Caspase-3蛋白水平進行測定，然后通過鏡檢得到相關水平。(3)最后是胎盤滋養細胞凋亡檢測：采用原位末端標記法檢測，試劑盒來自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 觀察指標[3-5](1)經染色后呈現為棕黃至棕褐色的滋養細胞為陽性細胞，以此計算Bc1-1和Caspase-3蛋白水平；(2)經染色為黑色的胎盤滋養細胞為凋亡細胞，然后計算凋亡指數。其中凋亡指數=凋亡細胞數/細胞總數×100%。

1.4 統計學方法 應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用t檢驗，相關分析采用Pearson相關分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組受檢者的體格發育情況比較 觀察組患者的體重、身長、坐高以及頭圍均明顯小于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 兩組受檢者的體格發育情況比較(±s)

表1 兩組受檢者的體格發育情況比較(±s)

例數組別 體重(g)身長(cm)坐高(cm)頭圍(cm) 76 76觀察組對照組t值P值3.09±0.17 3.27±0.21 5.809 0.000 50.12±2.12 50.93±2.20 2.311 0.022 33.68±1.29 34.12±1.34 2.062 0.041 33.47±1.17 33.98±1.29 2.553 0.012

2.2 兩組受檢者的ADM及凋亡指數比較 觀察組患者的ADM及凋亡指數均明顯高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表2 兩組受檢者的ADM及凋亡指數比較(±s)

表2 兩組受檢者的ADM及凋亡指數比較(±s)

組別 例數ADM（pg/ml） 凋亡指數(%)觀察組對照組t值P值76 76 64.27±17.32 48.93±12.11 6.328 0.000 34.82±9.47 8.04±2.46 23.861 0.000

2.3 兩組受檢者的胎盤滋養細胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比較 觀察組受檢者的Bcl-1蛋白水平低于對照組，而Caspase-3蛋白水平高于對照組，差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表3。

表3 兩組受檢者的胎盤滋養細胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比較(±s)

表3 兩組受檢者的胎盤滋養細胞Bcl-1和Caspase-3蛋白水平比較(±s)

組別 例數Bcl-1蛋白(U/ml)Caspase-3蛋白(U/L)觀察組對照組t值P值76 76 3.68±1.02 4.73±1.34 5.436 0.000 18.94±3.47 8.34±1.23 25.100 0.000

2.4 ADM、凋亡指數與滋養細胞 Bc1-1、Caspase-3蛋白的相關性 ADM與Bc1-1表達水平呈明顯的負相關，與Caspase-3蛋白表達水平呈正相關。而凋亡指數與ADM、Bc1-1蛋白均無顯著相關性，與Caspase-3蛋白呈正相關，見表4。

表4 ADM、凋亡指數與滋養細胞Bc1-2、Caspase-3蛋白相關性

3 討 論

臨床上，FGR是指胎兒生長情況弱于適齡兒的新生兒，可能會受到遺傳因素以及胎盤情況影響[6-7]。FGR是一種嚴重危害胎兒健康的主要并發癥之一，對圍產兒死亡率的影響也較大，在胎兒逐漸成長的過程中還會對其心智及體能造成不同程度的影響，并且使成年人具有較高的合并冠心病、糖尿病的概率。本研究通過對FGR與適齡兒出生情況進行統計對比發現，觀察組體重、身長、坐高以及頭圍均顯著小于對照組，在ilhan等[8]和劉亞軍等[9]的報道中也有類似結論。說明一般情況下FGR生長發育小于適齡兒，在體格上存在明顯的表現差異。原因可能是因為FGR的發病機制相對復雜，但也可能與ADM、胎盤細胞的凋亡存在較大的關系。

本文結果發現，觀察組ADM、凋亡指數以及Caspase-3蛋白水平均顯著高于對照組，而Bc1-1蛋白水平低于對照組。通過相關性分析得到ADM與Bc1-1表達水平呈明顯的負相關，與Caspase-3蛋白表達水平呈正相關，而凋亡指數與Caspase-3蛋白也呈正相關，與文獻報道一致[10-12]。ADM是主要在相關生殖系統中表達的多肽，尤其在卵巢、胎盤以及臍靜脈等有高水平表達。處于妊娠期時母體及胎盤均會合成ADM，并在妊娠的較早期開始分泌參與受精卵著床直到分娩的整個過程。ADM通過相關酶的作用使得血管舒張，從而對胎兒中相關激素起到一定的調節作用。而FGR出現ADM水平上升主要可能因為胎兒的整個循環過程出現了損傷，進而需要更多的氧氣及營養物質需要供應。ADM出現代償反應，盡可能使得臍血管出現擴張以保證最大程度的氧氣及營養物質的供應。而胎兒的正常發育在一定程度上主要取決于胎盤，尤其是為胎兒提供充足氧氣及營養的滋養細胞。出現特殊情況時，如孕婦吸煙、貧血等導致其處于缺氧狀態，進而對滋養細胞造成一定的損傷。在此種情況下可能引起胎盤功能異常，從而引發FGR。

正常情況下細胞的凋亡是僅僅是一種生理現象，對機體的維持作用很明顯，其中Bc1-1蛋白是最主要的抗凋亡因子，通過激活Caspase-3蛋白來共同作用于細胞凋亡的控制過程，在FGR中Bc1-1蛋白開始低水平表達，這就直接抑制了Caspase-3蛋白的轉化[13]。兩者之間的表達存在顯著的負相關，這就導致正常的凋亡過程無法實現，從而出現不正常凋亡或者過度凋亡，在極大程度上抑制胎兒的正常發育。當胎盤出現供應不足的時候導致缺氧、營養缺乏等主要現象，這就對ADM mRNA相關轉錄的水平及蛋白水平有明顯增加的趨勢，進而加大了ADM水平，從而提示兩者可能共同作用參與了FGR的發生。

綜上所述，FGR的發生與ADM水平升高、胎盤滋養細胞凋亡以及相關凋亡蛋白的水平波動存在明顯的相關性，這為臨床對FGR的診斷及治療提供更多的指導依據，具有較高的臨床應用價值。

[1]韓露艷,黎明,余欣庭,等.早產母乳中脂聯素、瘦素、真胰島素和胃生長素水平測定及其與嬰兒生長關系的研究[J].中華兒科雜志, 2014,52(7):510-515.

[2]賀晶,溫弘.胎兒宮內生長遲緩值得關注[J/CD].中華婦幼臨床醫學雜志(電子版),2012,8(1):5-9.

[3]Oben J,Tomsin K,Staelens A,et al.Maternal cardiovascular profiling in the first trimester ofpregnancies complicated with gestation induced hypertension or fetal growth restriction[J].Pregnancy Hypertens,2103,3(2):92-93.

[4]鄧紅珠,杜敏聯,李燕虹,等.小于胎齡兒青春前期線性生長方式與血清胰島素水平關系的研究[J].中華內分泌代謝雜志,2011,27 (4):296-300.

[5]呂學敏,郭源,邊臻,等.嬰兒發育性髖關節發育不良自然發育過程研究[J].中華小兒外科雜志,2014,35(11):848-852.

[6]程艷紅,錢敏.多普勒超聲評估胎兒生長受限的研究進展[J/CD].中華臨床醫師雜志(電子版),2013,1(13):6007-6009.

[7]唐慧霞,李勝利.超聲估測胎兒體重的研究進展[J/CD].中華醫學超聲雜志(電子版),2014,1(5):369-374.

[8]ilhan G,iyibozkurt AC,Kalelio?lu H?,et al.Effects of fetal cardiac anomalies on ductus venosus and aortic isthmus doppler profiles[J]. Arch Gynecol Obstet,2105,6(1):25-26.

[9]劉亞軍,陳維萍,彭偉,等.胎盤組織中胰島素樣生長因子1受體及胰島素受體底物1的表達與胎兒生長受限發病的關系[J].中華婦產科雜志,2011,46(7):5440-5442.

[10]張亞京,王鑫,郝錦麗,等.臍血腎上腺髓質素水平和胎盤滋養細胞凋亡與胎兒生長受限的關系[J].中華圍產醫學雜志,2014,17(11): 770-772.

[11]宋富珍,程英升.胎兒宮內發育遲緩胎盤的MRI研究進展[J].中華放射學雜志,2014,48(12):1058-1059.

[12]孫曉樂,楊孜,王伽略,等.游離脂肪酸對滋養細胞線粒體脂肪酸氧化功能的影響及其與p38MAPK信號通路的相關性[J].中華醫學雜志,2013,93(47):3786-3790.

[13]黃玲玲.細胞凋亡抑制因子在自然早產胎盤的表達及其臨床意義[J].海南醫學,2011,22(13):3-5.

Correlation analysis of the relationship between adrenomedullin,apoptosis of placental trophoblast cells and fetal growth restriction.

XIE Hui1,LIU Hong-yan1,CHEN Jun2.Department of Gynaecology and Obstetrics1,Department of Clinical Laboratory2,Maternal and Child Health Hospital of Ankang City,Ankang 725000,Shaanxi,CHINA

Objective To explore the relationship between adrenomedullin(ADM)of umbilical cord blood,the apoptosis of placental trophoblast cells and fetal growth restriction(FGR).MethodsSeventy-six fetuses of fetal growth restriction in our hospital from January 2012 to December 2014 were selected as the observation group,and 76 fetuses delivered in our hospital in the same period were enrolled as the control group.The general conditions,ADM, apoptosis index of placental trophoblast cells,Bc1-1 protein and Caspase-3 protein levels were compared between the two groups.Finally,correlation analysis was performed.ResultsThe weight,height,sitting height and head circumference of the fetuses in the observation group were significantly lower than those in the control group(P＜0.05).The ADM and apoptosis index of the observation group were(64.27±17.32)pg/ml,(34.82±9.47)%,respectively,which were significantly higher than those in the control group of(48.93±12.11)pg/ml,(8.04±2.46)%.The level of Bc1-1 protein in the observation group was significantly lower than that in the control group,while the level of Caspase-3 protein was significantly higher than that in the control group.The differences were all statistically significant(P＜0.05).Correlation analysis showed that the expression level of ADM was negatively correlated with the expression level of Bc1-1(r=-0.461,P= 0.000),and positively correlated with the expression level of Caspase-3 protein(r=0.783,P=0.000).The apoptotic index and ADM,Bc1-1 protein expression showed no significant correlation(r=0.283,P=0.827;r=0.362,P=0.103),whileapoptotic index showed positive correlation with Caspase-3 protein(r=0.821,P=0.000).ConclusionADM of umbilical cord blood and apoptosis proteins of placental trophoblast cells(Bcl-1 and Caspase-3)jointly result in the formation of FGR,andADM,apoptosis of placental trophoblastic cells are significantly correlated with FGR.

Fetal growth restriction(FGR);Umbilical cord blood;Adrenomedullin(ADM);Placental trophoblast cells;Apoptosis;Correlation

R714.51

A

1003—6350（2016）05—0703—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.05.005

2015-07-21)

謝暉。E-mail：1093853804@qq.com