VEGF、CD44v6、MMP-2在食管癌中的表達及其與淋巴結轉移的相關性

洪英財，陳懷生，林少霖

(暨南大學第二臨床醫學院/深圳市人民醫院胸外科，廣東 深圳 518000)

VEGF、CD44v6、MMP-2在食管癌中的表達及其與淋巴結轉移的相關性

洪英財，陳懷生，林少霖

(暨南大學第二臨床醫學院/深圳市人民醫院胸外科，廣東 深圳 518000)

目的 研究食管癌患者的癌組織發生淋巴結轉移與病變組織中血管內皮生長因子(VEGF)、細胞的粘附因子C4D4的變異體v6(CD44v6)、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)水平的關系。方法選取2011年3月至2014年9月到我院腫瘤科進行治療的83例食管癌患者作為食管癌組，所有患者均經術后HE切片病理檢查證實，另選取21例術前診斷為食管癌但術后經組織學檢查結果為良性者的食管黏膜標本作為良性組，比較兩組患者中VEGF、CD44v6和MMP-2的陽性水平，并對不同表達食管癌患者的淋巴結是否發生轉移進行分析，探討他們的相關性。結果VEGF、CD44v6和MMP-2在食管癌組患者病變組織標本中的陽性表達率分別為77.11%(64/83)、73.49% (61/83)和59.04%(49/83)，而在良性組患者食管組織標本中的陽性表達率分別為14.29%(3/21)、23.81%(5/21)和14.29%(3/21)，三者在食管癌組患者病變組織標本中的陽性表達率均顯著高于良性組，經比較差異均有統計學意義(P＜0.05)；VEGF、CD44v6和MMP-2在發生了淋巴結轉移的食管癌患者中的陽性率依次為85.48%(53/62)、82.26% (51/62)和66.13%(41/62)，而在沒有發生淋巴結轉移的患者中的陽性率依次為52.38%(11/21)、47.62%(10/21)和38.10%(8/21)，發生淋巴結轉移的食管癌患者病變組織標本中三者的陽性表達率顯著高于沒有發生轉移者，經比較差異均具有統計學意義(P＜0.05)。結論VEGF、CD44v6和MMP-2在食管癌患者癌變組織中的表達水平與其淋巴結是否發生轉移具有一定的關系，其對食管癌患者的早期正確診斷、治療以及預后效果評估具有重要的意義。

淋巴結轉移；食管癌；血管內皮生長因子；細胞的粘附因子C4D4的變異體v6；基質金屬蛋白酶-2

食管癌是一種在全球范圍內發生率均較高的惡性腫瘤疾病，而且我國在食管癌高發以及高死亡率國家中都排在了前幾位[1]。食管癌患者在早期并沒有明顯癥狀，因此通常食管癌患者被確診后已經屬于晚期，對其預后極為不利。眾所周知，影響惡性腫瘤發生發展的因素多種多樣，但對其具體的影響機制卻沒有明確的認識[2]。腫瘤出現浸潤以及淋巴結發生轉移是與惡性腫瘤治療以及預后效果有直接關系的兩個主要生物行為特征，惡性腫瘤細胞在繁殖與擴散轉移的過程中與體內的粘附因子水平、基質降解酶含量以及血管的通透能力等都有緊密的聯系，并且已有研究表明惡性腫瘤病變組織中的各項因子，如血管內皮生長因子(VEGF)、細胞的粘附因子C4D4的變異體v6(CD44v6)以及基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)的陽性表達情況與癌組織中淋巴結是否發生轉移有一定的相關性[3]。筆者對我院治療的83例食管癌患者病變組織中的VEGF、CD44v6以及MMP-2的表達水平與淋巴結轉移的關系進行研究，以期為食管癌患者的早期診斷、治療以及對預后效果評估提供相應的指導和臨床依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2011年3月到2014年9月共有83例食管癌患者到我院腫瘤科治療，所有患者均手術后經HE切片病理檢查證實，將其作為本研究的食管癌組。83例患者中男性53例，女性30例；年齡41～71歲，平均(52.4.3±6.9)歲；淋巴結發生轉移者62例，未發生轉移者21例。所有患者在手術切除治療前均未采取任何化療和放療治療措施。選取21例術前診斷為食管癌但術后經組織學檢查結果為良性的患者的食管黏膜標本作為良性組。

1.2 試劑和方法 研究中所用的兔抗人VEGF抗體的生產廠家為美國Antibody Diagnosis公司，所使用的鼠抗人CD44v6以及MMP-2抗體的生產廠家均為美國的Chemicon公司。根據說明書的要求進行免疫組織的化學染色，首先將制作的切片標本進行脫蠟以及水化處理，然后使用濃度為3%的雙氧水進行處理，利用微波對抗原進行修復，并滴加一定量的抗體后、利用DAB顯色液進行顯色。實驗中所使用的陽性對照標本為VEGF、CD44v6以及MMP-2表達顯示結果為陽性的食管癌組織，陰性對照標本為使用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗染色的標本[4]。

1.3 評價方法 根據細胞染色的程度以及陽性細胞的總數量對實驗結果進行判定，首先根據細胞的著色程度進行評分，如果細胞未出現顯色情況則記錄為0分，細胞染色顯示為黃色時計1分，細胞染色后顯示為棕黃色時計2分，如果細胞染色后出現了明顯的綜褐色時計3分。根據觀察到VEGF、CD44v6以及MMP-2陽性細胞數目在同一類細胞總數目中所占比例的多少對其進行評分：其中陽性細胞數目所占比例未超過5%時計0分，未超過25%時計1分，尚未超過50%時計3分，超過75%后計4分。將兩種評分的分數進行相加，結果在3分以上判定為陽性，結果為3分或以下時為陰性[5]。

1.4 統計學方法 應用SPSS17.0統計軟件進行數據分析，計量資料以均數±標準差(±s)表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，計數資料以百分率(%)表示，采用χ2檢驗，VEGF與CD44v6、MMP-2的相關性采用Spearman相關性分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 VEGF、CD44v6和MMP-2在不同食管組織中的陽性表達率比較 圖1中顯示的A、B、C分別表示VEGF、CD44v6以及MMP-2在食管癌的病變組織標本中的染色圖片，VEGF以及MMP-2的陽性表達均發生于病變細胞的胞漿中，而CD44v6的陽性表達則均發生于病變細胞的胞膜中。VEGF、CD44v6和MMP-2在食管癌患者病變組織標本中的陽性表達率均高于良性組，其差異均有統計學意義(P＜0.05)，見表1。

圖1 VEGF、CD44v6以及MMP-2在食管癌患者的病變組織標本中染色顯示圖(×400)

表1 不同食管組織標本中VEGF、CD44v6和MMP-2的陽性表達率比較[例（%）]

2.2 淋巴結轉移與否與VEGF、CD44v6、MMP-2水平的關系 VEGF、CD44v6和MMP-2在發生淋巴結轉移的食管癌患者中的陽性率均顯著高于未發生轉移組織，其差異均具有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

2.3 VEGF與CD44v6、MMP-2的相關性 將VEGF與CD44v6進行Spearman相關性分析，r值為0.258，P值為0.004，食管癌病變組織標本中VEGF的水平與CD44v6的水平呈現正相關的關系，將VEGF與MMP-2的表達進行Spearman相關性分析，其中r值為0.598，P值為0.002，食管癌病變組織標本中VEGF水平與MMP-2水平也呈現正相關關系。

表2 淋巴結轉移與VEGF、CD44v6、MMP-2水平的相關性[例(%)]

3 討 論

惡性腫瘤病變的出現是一個極其復雜的過程，其包括了腫瘤的形成、繁殖、擴散以及轉移等，這些過程大都會伴隨著基因的突變、血管的產生、細胞的凋亡以及病灶的轉移等[6]。因此，在腫瘤的出現過程中必定大量的蛋白類物質以及細胞因子等參與到該過程中。其中VEGF、CD44v6以及MMP-2的表達水平是目前在研究腫瘤的發生以及是否轉移時關注的焦點。

本研究結果表明，VEGF、CD44v6以及MMP-2在食管癌患者黏膜組織中的陽性表達率分別為77.11%、73.49%和59.04%，而在良性食管組織標本中的陽性表達率依次為14.29%、23.81%、14.29%，三者在食管癌病變組織標本中的陽性表達率顯著的高于在良性標本的表達率。其中VEGF是最常見的并且具有較高特異性的一種血管通透性因子，它通常是在血管的通透能力提高后導致新血管的快速生長并產生腹水時產生的，VEGF在大腸癌、乳腺癌以及其他惡性腫瘤中都具有很高的表達情況，而且它的表達與腫瘤是否發生侵襲性轉移以及患者手術治療后的預后效果都有著緊密的聯系[7]。目前，已經有研究證實，VEGF的表達情況不僅可以評價病變處血管上皮細胞的增殖、轉移以及生長情況，還可以對病灶的生長速度以及轉移的方向進行評估[8]。本研究結果表明，VEGF在淋巴結發生和沒有發生轉移的食管癌病變組織標本中的陽性率依次為85.48%以及52.38%，因此可以認為食管癌患者病變黏膜組織VEGF的水平與淋巴結是否發生了轉移有一定關系[9]。

CD44v6是一種在腫瘤組織中大量存在的跨膜糖蛋白類物質，它具有良好的分子粘附的作用，能夠是腫瘤細胞與周圍的基質中存在的各類結構性蛋白進行反應，當CD44v6在體內的表達水平過量后會導致周圍基質發生構型上的改變，進而導致腫瘤細胞的位置發生轉移，進一步增加了腫瘤細胞生長以及遷移，因此目前大部分的研究都認為CD44v6作為一種反應蛋白參與了病灶處細胞的生長以及遷移[10]。并且研究已經證實，CD44v6蛋白在大腸癌以及胃癌患者的病變組織中都有較高的表達，并且與惡性腫瘤的浸潤以及轉移都有密不可分的關系[11]。本研究中CD44v6在淋巴結發生和沒有發生轉移的食管癌病變組織中的陽性表達率依次為82.26%以及47.62%，差異有統計學意義。因此，食管癌患者病變黏膜組織中CD44v6表達與淋巴結是否發生轉移有一定關系，這一結果與目前已有的研究結果是一致的。

MMP-2是一種沒有被糖化的明膠酶，它作為一種關鍵酶參與了腫瘤細胞外基質和基底膜中存在的Ⅳ型膠原的降解過程，從而能對細胞外基質造成損傷，在一定程度上加快了惡性腫瘤細胞向其他組織的侵潤以及擴散情況[12]。由于其在Ⅳ型膠原的降解過程中的特異性，MMP-2已經成為了評價腫瘤侵襲程度以及是否轉移的主要的一種基質金屬蛋白酶指標。研究也已經發現，MMP-2在消化道腫瘤、泌尿系統中流以及乳腺癌中具有較高的表達，并且與病灶的轉移、浸潤有密切的關系[13]。本研究中，MMP-2在淋巴結發生和沒有發生轉移的食管癌病變組織標本中的陽性表達率依次為66.13%以及38.10%，結果具有明顯的差異。因此，食管癌患者病變組織中MMP-2的表達也與淋巴結是否發生轉移有一定關系，可以認為，如果食管癌組織中的MMP-2的分泌量越多，那么腫瘤細胞以及淋巴結的轉移發生的概率就會越高。

通過上述分析，筆者認為VEGF、CD44v6以及MMP-2三者對血管的血管的形成和生長、病灶的生長、遷移等不良的生物學行為起到了一定的促進作用[14]，并且都與腫瘤中的淋巴結是否發生了轉移有著一定關系。本文進一步對三者之間關系進行研究后發現，食管癌病變組織標本中VEGF的水平與CD44v6以及MMP-2的水平呈現正相關關系，這也更加說明了三者同時與淋巴結是否發生了轉移具有相關性。

綜上所述，VEGF、CD44v6以及MMP-2在食管癌患者癌變組織中的水平與其淋巴結是否發生轉移具有一定的關系，其對食管癌患者的早期正確診斷、治療以及預后效果評估具有重要的意義。

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Expression of VEGF,CD44v6,MMP-2 in esophageal cancer and the relationship with lymph node metastasis.

HONG Ying-cai,CHEN Huai-sheng,LIN Shao-lin.Department of Thoracic Surgery,the Second Clinical Medical College of Jinan University,People's Hospital of Shenzhen,Shenzhen 518000,Guangdong,CHINA

Objective To study the correlation between vascular endothelial growth factor(VEGF),CD44 variant 6(CD44v6),matrix metalloproteinase-2(MMP-2)level and lymph node metastasis in patients with esophagus cancer.MethodsFrom March 2011 to September 2014,83 patients of esophageal cancer treated in our hospital and confirmed by postoperative pathological examination were selected as esophageal cancer group,and 21 patients diagnosed as esophageal cancer preoperatively but confirmed as benign by postoperative pathological examination were enrolled as the benign group.The positive expression levels of VEGF,CD44v6 and MMP-2 were compared between the two groups,and the lymph node metastasis in patients with different expression levels was analyzed to explore their correlation.ResultsThe positive expression rate of VEGF,CD44v6 and MMP-2 in esophageal cancer group were 77.11% (64/83),73.49%(61/83)and 59.04%(49/83),respectively,which were significantly higher than those in the benign group of 14.29%(3/21),23.81%(5/21)and 14.29%(3/21)(P＜0.05).The positive expression rate of VEGF,CD44v6 and MMP-2 in patients with lymph node metastasis were 85.48%(53/62),82.26%(51/62)and 66.13%(41/62),which were significantly higher than those in the patients without lymph node metastasis of 52.38%(11/21),47.62%(10/21)and 38.10%(8/21)(P＜0.05).ConclusionThe expression levels of VEGF,CD44v6 and MMP-2 in esophageal cancer are correlated to lymph node or metastasis,which has important significance in the early diagnosis,treatment,and prognosis assessment of esophageal cancer.

Lymph node metastasis;Esophageal cancer;Vascular endothelial growth factor(VEGF);CD44 variant 6(CD44v6);Matrix metalloproteinase-2(MMP-2)

R735.1

A

1003—6350（2016）06—0888—04

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.06.010

2015-06-29)

洪英財。E-mail：hyc55@126.com