膝關節(jié)類風濕性關節(jié)炎患者關節(jié)液中脂聯素水平與病情嚴重程度的關系

溫錦益 廖子鴻 戴冠東 黃健

膝關節(jié)類風濕性關節(jié)炎患者關節(jié)液中脂聯素水平與病情嚴重程度的關系

溫錦益 廖子鴻 戴冠東 黃健

目的探究膝關節(jié)類風濕性關節(jié)炎(RA)患者關節(jié)液中脂聯素水平與病情嚴重程度的關系。方法120例關節(jié)炎患者,其中經臨床確診為膝關節(jié)RA患者60例(觀察組),普通骨性關節(jié)炎患者60例 (對照組)。給予患者相同的非對照處理方式包括護理等手段,通過同位素標記相對和絕對定量(iTRAQ) 技術檢測患者體內脂聯素的含量,分析病情嚴重程度與脂聯素含量的關系。結果經過iTRAQ技術發(fā)現,2個月后觀察組脂聯素濃度明顯高于對照組(P＜0.05),且隨著患者RA的病情程度加重患者體內的脂聯素含量呈增加趨勢(P＜0.05),相關分析發(fā)現,關節(jié)液脂聯素水平與RA分級呈正相關(rs=0.525,P＜0.05)。結論脂聯素在膝關節(jié)RA患者中高度表達,脂聯素與患者的病情嚴重程度呈正相關關系。

類風濕性關節(jié)炎；脂聯素；病情嚴重程度

RA在大多數情況下是指人體中的一種自身免疫性疾病,是一種由于具有相同過敏原而引起的慢性綜合征,是一種常發(fā)生在外周關節(jié)處的非特殊免疫性疾病。疾病多引起患者的病變關節(jié)處及其周圍的組織發(fā)生進行性破壞,從而引起關節(jié)的功能障礙,嚴重者會累及鄰近部位病變,如肌肉、韌帶、滑液等的病變［1］。目前有研究表明,脂聯素的濃度與RA病變程度有著密切的聯系［2,3］。但是近年來有學者研究發(fā)現［2］,脂聯素可以在很多情況下拮抗炎癥介質,并且提出了脂聯素參與了骨的代謝以及關節(jié)病的發(fā)生,但仍然存在很多的爭議,為了驗證這一說法的正確性以及脂聯素與RA病變程度的關系,為以后疾病治療提供準確的方向,現就本院2013年5月～2015年5月的120例患者進行調查分析,具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2013年5月～2015年5月的120例關節(jié)炎患者,其中臨床確診為膝關節(jié)RA患者60例(觀察組),普通骨性關節(jié)炎患者60例(對照組)。觀察組中女32例,男28例,年齡35～63歲,平均年齡(43.5±9.2)歲；對照組中女31例,男29例,年齡39～61歲,平均年齡(42.8±8.6)歲。觀察組患者分為RA 2級9例、RA 3級28例、RA 4級23例。觀察組與對照組患者均只因患相應單一疾病而入院,患者所在的家族中遺傳因素對疾病的發(fā)生無明顯影響。兩組一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),具有可比性。120例患者均已簽署手術知情同意書。

1.2 納入標準 納入標準按照西醫(yī)的診斷,參照美國風濕病學會(ARA)1987年修訂的診斷標準［4,5］：在具備下面7項中4項及以上的患者診斷為RA,符合3項的判斷為有可能患有RA。其中第2項和第5項必須得到醫(yī)生的觀察確診。①清晨起床時身體僵硬時間持續(xù)＞1 h(患者病程＞6周)；②有≥3個的關節(jié)發(fā)生腫大(病程持續(xù)時間≥6周)；③腕關節(jié)、掌指關節(jié)以及近指關節(jié)出現腫大時間＞6周；④對稱性關節(jié)腫大＞6周；⑤在皮膚下面發(fā)現結節(jié)樣硬性物,判斷為風濕樣結節(jié)；⑥對手進行X光照射時發(fā)現有骨質疏松和關節(jié)間隙狹窄；⑦類風濕性因子的滴度＞1∶32(檢測呈陽性)。如未滿足上述7項條件,而符合下面的2項及以上標準的患者可判斷為可疑的RA。①晨僵(時長與頻數不確定)；②持續(xù)反復的關節(jié)壓痛或活動時疼痛≥6周；③現在或過去有關節(jié)腫大出現過；④發(fā)現皮下硬性結節(jié)；⑤血沉速度加快或C反應蛋白試驗陽性。

1.3 方法 對120例患者進行膝關節(jié)置換取出時,所有軟骨組織均從脛骨平面取出,包括負重區(qū)域的內側和外側。所有患者的脂聯素提取均采取同樣的方法從病變部位的關節(jié)液中提取,避光減少脂聯素變質。兩組患者均采用iTRAQ對患者的脂聯素進行分析,具體方法如下：在病變關節(jié)抽取出關節(jié)液后,放置于離心機中離心棄掉細胞殘渣和關節(jié)液內其他的殘余物后,迅速放置于-70℃的冷藏箱中存儲直到需要檢測,保藏時注意密封以及避光,避免離心液變質。用酶標板操作,做雙孔重復,每孔加入顯色工作液200 μl。具體步驟如下：稀釋標準品,配制0～2000 μg/ml濃度梯度的標準品溶液。根據待用離心液數量,配制適量顯色液,充分混勻。稀釋待測離心液至合適濃度(5～10倍的稀釋度)并加入酶標孔中,每孔加入20 μl待檢樣本及200 μl BCA顯色液。37℃溫育30 min,選擇酶標儀波長為562 nm,測定各孔的吸光值。以蛋白標準品濃度(ng/ml)為橫坐標,吸光值為縱坐標,繪制出標準曲線。以標準曲線作為對照,Excel做出擬合曲線,根據所測樣品的吸光值,即可得到相應的待檢樣本的蛋白濃度(C待測液×稀釋倍數=實際濃度)。

1.4 觀察指標 iTRAQ技術得到關節(jié)液中脂聯素的濃度,比較各級程度患者關節(jié)液內的脂聯素濃度差異,觀察膝關節(jié)RA患者的病情嚴重程度與脂聯素濃度的關系。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差(±s)表示,采用t檢驗；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗 ；應用Spearman法對脂聯素濃度與膝關節(jié)RA病情嚴重程度的相關性進行分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 經過iTRAQ技術發(fā)現,2個月后觀察組脂聯素濃度明顯高于對照組(P＜0.05)。見表1。

表1 兩組脂聯素濃度比較(±s,ng/ml)

表1 兩組脂聯素濃度比較(±s,ng/ml)

注：與對照組比較,aP＜0.05

組別 例數 關節(jié)液脂聯素濃度觀察組 60 4287.36±1578.52a對照組 60 1195.64±355.64t14.800P＜0.05

2.2 經過iTRAQ技術發(fā)現,觀察組RA 2級患者的關節(jié)液脂聯素濃度為(3604.33±801.45)ng/ml,RA 3級患者的關節(jié)液脂聯素濃度為(4752.54±585.48)ng/ml,RA 4級患者的關節(jié)液脂聯素濃度為(6343.28±696.68)ng/ml。RA 4級患者的關節(jié)液脂聯素水平明顯高于RA 3級和RA 2級患者(P＜0.05),RA 3級患者的脂聯素水平高于RA 2級患者(P＜0.05)。

2.3 應用iTRAQ技術對脂聯素濃度與膝關節(jié)RA病情嚴重程度的相關分析時發(fā)現,關節(jié)液脂聯素水平與RA分級呈正相關(rs=0.525,P＜0.05)。見表2。

表2 關節(jié)液脂聯素水平和病情嚴重程度的相關性

3 討論

有研究者認為炎癥因子引發(fā)RA相關骨質改變的機制可能是通過NF-κB途徑使炎癥細胞產生相應的炎癥因子以及基質降解酶,同時也能使細胞核因子κB受體活化以及子配體(RANKL)活化,從而引起骨質代謝失調,發(fā)生RA［6］。然而,有學者近期研究認為,脂聯素能下調軟骨細胞白細胞介素-1,誘導基質金屬蛋白酶-13的表達,上調基質金屬蛋白酶抑制劑-2的表達,提示脂聯素作為抗炎介質,對關節(jié)軟骨可能有保護作用［7］。故此,在脂聯素聯系患者的病情嚴重程度上存在著較大的爭論。

為了驗證脂聯素與RA患者的病情嚴重程度是否存在關系,本次試驗選取120例關節(jié)炎患者。研究發(fā)現,RA患者關節(jié)液中的脂聯素水平明顯增高,提示在患者體內脂聯素高度表達,說明脂聯素的水平影響到RA發(fā)病。同時對于分級結果顯示,RA 2級和RA 3級患者體內的脂聯素水平明顯低于RA 4級患者,RA 2級患者的脂聯素水平相比于RA 3級患者明顯降低,提示脂聯素的濃度能反映RA的病情嚴重程度。

綜上所述,脂聯素在RA患者中的高度表達以及與RA患者病情嚴重程度的密切關系提示降低脂聯素水平對于治療RA可能是一個較好的突破口。

［1］王維新.脂聯素和脂聯素抗體通過殼聚糖水凝膠對骨關節(jié)炎的影響研究.北京協(xié)和醫(yī)學院,2012.

［2］駱家偉,方斌.透明質酸對膝骨關節(jié)炎患者關節(jié)液中脂聯素和瘦素水平的影響.中華關節(jié)外科雜志(電子版),2015,9(1):55-59.

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［4］鄭潔,郭海英,潘思京,等.脂肪細胞因子與骨關節(jié)炎研究進展.基礎醫(yī)學與臨床,2014,34(4):562-565.

［5］鄭雙,徐建華,丁長海,等.血清脂聯素水平與膝骨關節(jié)炎嚴重程度相關性研究.安徽醫(yī)科大學學報,2014,49(12):1792-1795.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.12.027

2016-04-07］

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