Fas信號通路在誘導的胃癌細胞EMT過程中的侵襲及轉移

陳輯 易學華 羅瑞升 勞碧蘭 陳連清

·臨床醫學·

Fas信號通路在誘導的胃癌細胞EMT過程中的侵襲及轉移

陳輯 易學華 羅瑞升 勞碧蘭 陳連清

目的對Fas信號通路在誘導胃癌細胞EMT過程的侵襲以及轉移情況進行分析,從而為相關治療措施提供依據。方法35例胃癌患者,利用相關技術對患者胃癌細胞EMT過程中Fas信號的通路的侵襲和轉移情況進行分析。結果Fas在誘導胃癌細胞EMT過程中扮演重要的角色,ERK1/2信號通路能夠促進Fas誘導胃癌細胞EMT的成功率。結論Fas信號通路能夠誘導胃癌細胞出現EMT現象,相關人員必須加強對其的重視。

Fas信號通路；EMT；胃癌細胞

Fas信號通路在誘導的胃癌細胞EMT過程中有著極為重要的作用［1,2］,相關的研究人員必須加強對其的重視,加強對其的研究水平的提升,這對于胃癌細胞增殖與分化原理的掌握極為重要。本文對其進行研究,現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2014年1月～2015年12月收治35例胃癌患者為研究對象,其中男20例,女15例,所有患者納入前均被確診為胃癌,且進行了不同程度的化療。

1.2 方法 對35例胃癌組織進行標本取樣,所取組織均距癌組織＜2cm,采集組織后進行固定處理,在固定后在對其進行包埋,為下一步試驗的進行創造條件。本次研究中研究的核心是對CAC1基因對于胃癌EMT的誘導作用進行分析,因此在獲得胃癌組織后,研究人員需對兩者的相關數據進行測定。在對CAC1以及EMT的蛋白表達進行測定時還會運用到免疫組化法,這種方法作用的發揮需要應用到SP方法,其要以相關試劑說明為依據對DAB顯色狀況進行確定。在對EMT、CAC1相關基因mRNA水平進行測定時所使用的方法為原位雜交法,在測定時要先根據基因特性對探針的合成,在對CAC1基因序列進行設計時要以CAC1編碼框序列為依據,所設計的探針的長度要保持在46 bp。在對玻片進行處理過程中所采用的處理試劑為多聚賴氨酸。在對切片進行研究時,需要對切片進行脫蠟至水處理,在脫蠟過程完成后,用3%H2O2在室溫的狀態下對標本進行10 min的處理,從而達到內源性過氧化物酶滅活的目的。在對核酸片段進行暴露時需要在切片上加稀釋的胃蛋白酶,稀釋溶液一般選擇3%檸檬酸,在反應30 min后,選擇洗滌液0.5 M 磷酸鹽緩沖液(PB)以及蒸餾水,對其進行洗滌處理。在對相關因素進行雜交之前要對其進行預雜交處理,雜交完成后要對其雜交標本進行洗滌。

在對胃癌細胞株AGA培養時,所使用的培養基要含有10%的小牛血清,在培養基中加100 g/ml青霉素以及100 g/ml的鏈霉素,把培養基放在37℃的環境下進行培養,然后將其放入濕度保持在5%CO2的培養箱中。在試驗進行之前用無血清培養基替換含10%胎牛血清(FBS)的培養基,FasT實驗濃度應該控制在12.5 ng/ml。在進行免疫印跡進行探尋的過程中,所選取的AGS細胞應該處于生長期,對細胞總蛋白進行提取,從而使得蛋白濃度可以測量。對蛋白進行電泳處理,電泳時采取的凝膠類型為10%SDS不連續聚丙烯酞胺凝膠。電泳完成之后對其進行轉膜、封閉處理。在濾膜洗膜后,對其進行增強化學發光法(ECL)以及X片顯影處理,并對結果進行處理。

1.3 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件進行統計分析。計量資料以均數±標準差(±s)表示,采用方差分析；計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

Fas在誘導胃癌細胞EMT過程中扮演著重要的角色,此外ERK1/2信號通路能夠促進Fas誘導胃癌細胞EMT的成功率。消化系統腫瘤細胞株流式細胞儀檢測結果見表1,結果顯示： CAC1在胃癌細胞的表達水平高于其他細胞中的表達水平,其所存在的主要位置為細胞的細胞漿中,其在癌周圍正常的組織中表達水平不高,通過檢測發現其在正常組織中僅存在于間質中。不同TNM分期及組織類型CAC1陽性率比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。不同梯度濃度sFasL和不同時間的AGS細胞數量比較差異有統計學意義(P＜0.05)。見表3。

表1 35例患者實驗室消化系統腫瘤細胞株流式細胞儀檢測結果

表2 35例患者CAC1在胃癌組織和胃正常組織中的表達比較(n,%)

表3 35例患者不同梯度濃度sFasL和時間AGS細胞數量(±s)

表3 35例患者不同梯度濃度sFasL和時間AGS細胞數量(±s)

注：不同梯度濃度sFasL和時間的AGS細胞數量比較,P＜0.05

sFasL濃度(ng/ml) 1 d 2 d 3 d 合計 F P對照 2.84±0.24 3.38±0.43 10.12±1.32 5.42±3.57 40.958 ＜0.05 12.5 3.12±0.31 3.17±0.04 10.50±0.52 5.51±3.87 635.185 ＜0.01 24.0 3.64±0.21 2.96±0.32 6.98±0.51 4.52±1.78 137.123 ＜0.01 50.0 3.78±0.31 7.52±0.27 4.53±2.34 924.354 ＜0.01合計 3.26±0.38 2.98±0.54 7.32±0.32 4.97±2.95 598.345 ＜0.01F13.657 7.812 17.365 14.214 18.645P＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.01

3 討論

Fas信號通路在胃癌細胞的生長過程中扮演著極為重要的角色,這是因為Fas信號通路的形成可以在一定程度上使得細胞凋亡得以實現［3,4］。本文研究發現,胃癌心腫瘤的分化與轉移的實現也和Fas信號通路有著較為密切的聯系,通過試驗發現Fas信號通路可以促進細胞活性的提升,但是具體作用發揮的原理還待探究。為了能夠明確Fas信號通路在胃癌細胞的轉移以及增殖方面所起的作用,羅柏花［5］研究建立了EMT和MET模型,這兩種模型的建立可以對胃癌原發病灶如何實現對轉移灶進行擴散的原理進行明。

本研究發現,CAC1在胃癌中表達較為突出,在整個胃癌細胞系中,CAC1 mRNA的水平均高于其他細胞系,此外胃癌細胞系中的CAC1 mRNA含量水平遠高于胃黏膜細胞系中。CAC1的表達并不是一成不變的,其在細胞周期變化的過程中也會以動態的形式所存在。相關研究發現,CAC1出現的時期為細胞的G0時期,并隨著細胞周期的不斷推進而以上升的狀態所存在,其水平表達最高的時期為細胞的S期。其開始第一次降低的時期為S中期,在此升高的時期為S/G2期,整個過程中CAC1表達水平最低時期為G0時期［6,7］。上述研究表明CAC1在胃癌細胞系中表達水平呈現較高的狀態,并且其參與細胞增殖過程,通過其表達的實現也能夠使得細胞周期調控得以實現。此外CAC1也能夠對細胞從G1期向S期轉換過程進行調節。CAC1對于胃癌細胞EMT的誘導也存在一定的作用,相關研究者發現在胃癌細胞系中以及胃黏膜細胞系中均能夠檢測出CAC1 mRNA的表達,且胃癌細胞中所含有此項蛋白表達水平處于較高水平,因此可以推斷CAC1在胃癌細胞AGS細胞系細胞周期的促進上有著一定的積極意義。

［1］劉寧,孫黎光,于卉影,等.細胞外信號調節蛋白激酶在人胃癌細胞Fas介導的凋亡信號通路中的作用.中華腫瘤雜志,2005,27(4):201-203.

［2］王峰.胃癌治療討論.癌癥治療,2015,1(9):3214-3215.

［3］石萌,南興建,李文靜,等.Fas信號通路通過誘導EMT促進胃癌細胞的侵襲轉移.現代消化及介入診療,2014(2):71-75.

［4］李文靜,劉濤,謝婷婷,等.GSK-3β通過調節 Snail 參與 Fas誘導的EMT過程.現代消化及介入診療,2013(5):267-272.

［5］羅柏花.EGFL7誘導EMT促進胃癌細胞侵襲和轉移機制的研究.中南大學,2014.

［6］徐志遠,程向東,杜義安,等.化療后殘余胃癌細胞發生上皮間質轉化的體外研究.中國腫瘤臨床,2013,40(18):1085-1088.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.12.010

2016-03-29］

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