溫郁金根腐病生物藥劑的篩選

陳旭玉，鐘錦玲，黃 嫻，甘炳春

(1.中國醫學科學院﹠北京協和醫學院，藥用植物研究所海南分所(海南省南藥資源保護與開發重點實驗室),海南萬寧 571533；2.中國醫學科學院﹠北京協和醫學院，藥用植物研究所，北京 100193；3.嶺南師范學院，廣東湛江 524048；4.海南碧凱醫藥研究所，海南海口 570216)

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溫郁金根腐病生物藥劑的篩選

陳旭玉1,2，鐘錦玲3，黃 嫻4，甘炳春1*

(1.中國醫學科學院﹠北京協和醫學院，藥用植物研究所海南分所(海南省南藥資源保護與開發重點實驗室),海南萬寧 571533；2.中國醫學科學院﹠北京協和醫學院，藥用植物研究所，北京 100193；3.嶺南師范學院，廣東湛江 524048；4.海南碧凱醫藥研究所，海南海口 570216)

摘要[目的]篩選溫郁金根腐病有效的生物藥劑。[方法]采用生長速率法測定7種生物藥劑對溫郁金根腐病病原菌的室內毒力。[結果] 0.5%施特靈氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP對根腐病菌抑制作用較好，其EC50值分別為1.14和 3.61 mg/L；其次為3%中生菌素、3%氨基寡糖素和熒光假單胞桿菌，EC50分別為11.64、13.52和16.61 mg/L。[結論] 0.5%施特靈氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP對溫郁金根腐病菌具有較好的抑制作用，可進一步用于大田試驗。

關鍵詞溫郁金；根腐病；生物藥劑；篩選

溫郁金(CurcumawenyujinY. H. Chen et C. Ling)是姜科姜黃屬多年生草本植物, 其根莖可作為莪術入藥[1]，是保婦康栓的主要原料。溫郁金引入海南種植多年，隨著種植面積擴大，病蟲害發生越嚴重[2]。根腐病是溫郁金主要病害之一，主要發生在根莖部，發病初期側根呈水漬狀，后黑褐腐爛，并向上蔓延導致地上部分發黃，最后全株枯死[3]。溫郁金根腐病6月開始被發現，7月達到高峰，連作嚴重的地塊發病率達50%，溫郁金根腐病問題日益突出。目前，對溫郁金根腐病的報道和防治措施有限，造成產量降低及品質下降，因此，對其的防治任務十分緊迫。為此，筆者研究了幾種生物藥劑對溫郁金根腐病菌的抑制作用，旨在為該病害的大田防治提供理論依據。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌。 溫郁金根腐病病原菌由中國醫學科學院藥用植物研究所海南分所分離并置于4 ℃冰箱保存。

1.1.2供試生物藥劑。生物藥劑種類、廠家及使用濃度見表1。

表1　供試生物藥劑及使用濃度

1.2方法

1.2.1培養基配制。含藥平板培養基：將表1中不同藥劑分別用無菌水配制成所需各濃度的50倍，用移液槍取2 mL注入冷卻至約50 ℃的48 mL PDA培養基，輕輕搖勻。每個濃度3次重復，另設清水對照。

1.2.2室內毒力測定。采用生長速率法[4]測定抑制效果。

1.2.3公式計算。將抑制率換算成機率值，藥劑濃度換算成濃度對數，以設定的藥劑濃度的對數為橫坐標，抑制機率值為縱坐標，采用Excel軟件求出各藥劑毒力回歸方程、EC50值和相關系數。

2結果與分析

2.1供試生物藥劑對溫郁金根腐病病原菌生長的影響由表2可知，7種生物藥劑在設定的質量濃度范圍內對菌絲的生長均有不同程度的抑制。隨著濃度增加，菌落直徑減小，藥劑對病菌的抑制增大，藥劑濃度與抑制率呈正相關。在7種生物藥劑中，當相同的質量濃度范圍為6.25~100.00 mg/L時，3%氨基寡糖素表現出較高的抑菌率,為80.4%；3%中生菌素次之，抑菌率為76.4%。在質量濃度為1 000.00 mg/L時，蠟質芽孢桿菌和99%惡霉靈的抑菌率均為100%，病菌生長完全受到限制。

表27種生物藥劑對溫郁金根腐病病原菌生長的影響

Table 2Effects of seven biological agents on pathogenic bacteria growth in root rot disease ofC.wenyujin

生物藥劑Biologicalagents處理劑量Treatmentdosagemg/L菌落直徑Colonydiametermm抑菌率Bacteriostasisrate%清水對照Blankcontrol73.803%中生菌素100.0017.4076.43%Zhongshengmycin50.0023.2868.525.0026.0864.712.5034.2353.66.2545.9837.7蠟質芽孢桿菌1000.000100Bacilluscereus500.0018.4075.1250.0029.5560.0125.0047.8335.262.5049.2833.23%氨基寡糖素100.0014.5080.43%amino-oligosaccharins50.0022.5569.425.0022.8369.112.5026.5064.16.2556.9022.9哈茨木霉菌WP1000.009.1887.6TrichodermaharzianumWP500.0010.1086.3250.0010.8585.3125.0011.8883.962.5024.5066.8熒光假單胞桿菌1000.0016.0378.3Pseudomonasfluorescens500.0019.6373.4250.0020.7571.9125.0026.0864.762.5029.8859.599%惡霉靈1000.00010099%hymexazol500.0013.8881.2250.0013.9581.1125.0018.2875.262.5018.3375.10.5%施特靈氨基寡糖素AS100.0018.7374.60.5%Shitelingamino-50.0020.2072.6oligosaccharinsAS25.0023.5068.212.5028.7061.16.2534.9852.6

2.2供試生物藥劑對溫郁金根腐病菌菌絲的室內毒力由表3可知，0.5%施特靈氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP的EC50值較小，分別為1.14和3.61 mg/L；其次為 3%中生菌素、3%氨基寡糖素和熒光假單胞桿菌，其EC50值分別為11.64、13.52、16.61 mg/L，表現均較敏感。99%惡霉靈和蠟質芽孢桿菌對溫郁金根腐病菌的毒力相對較弱，其EC50值分別為70.00和145.65 mg/L。

表3 7種生物藥劑對溫郁金根腐病菌的室內毒力

Table 3Effects of seven biological agents on indoor toxicity of root rot disease ofC.wenyujin

生物藥劑Biologicalagents毒力回歸方程Toxicityregressionequation相關系數Correlationcoefficient(r2)EC50mg/L3%中生菌素3%Zhongshengmyciny=0.8160x+4.13030.956811.64蠟質芽孢桿菌Bacilluscereusy=2.5521x-0.52090.8034145.653%氨基寡糖素3%amino-oligos-accharinsy=1.1103x+3.74410.754213.52哈茨木霉菌WPTrichodermaharzianumWPy=0.5133x+4.71390.70213.61熒光假單胞桿菌Pseudomonasfluorescensy=0.4424x+4.46010.974416.6199%惡霉靈99%hymexazoly=2.9397x-0.42410.548470.000.5%施特靈氨基寡糖素AS0.5%shitelingamino-oligosaccharinsASy=4.9998x+4.71960.95551.14

3結論

試驗結果表明，7種生物藥劑對溫郁金根腐病菌的毒力測定有差異。從EC50來看，各藥劑的毒力大小依次為0.5%施特靈氨基寡糖素AS、哈茨木霉菌WP、3%中生菌素、3%氨基寡糖素、熒光假單胞桿菌、99%惡霉靈、蠟質芽孢桿菌， 其中0.5%施特靈氨基寡糖素AS和哈茨木霉菌WP對病菌菌絲的抑制效果最好，其次是3%中生菌素。因此，哈茨木霉菌WP和0.5%施特靈氨基寡糖素AS對溫郁金根腐病菌具有較好的抑制作用，可進一步用于大田試驗。

參考文獻

[1] 中華人民共和國衛生部藥典委員會. 中華人民共和國藥典: 一部[S]. 北京: 化學工業出版社, 2000：230.

[2] 黃嫻,陳旭玉. 溫郁金彎孢霉葉枯病病原菌的藥劑篩選[J].安徽農業科學,2014,42(8):2345-2346.

[3] 楊三豹，盧啟強.溫郁金優質高產栽培技術[J].溫州農業科技,2004(2):24-25.

[4] 方中達.植病研究方法[M].北京:中國農業出版社, 1998:62-344.

Screening for Biological Pesticides against Root Rot Disease onCurcumawenyujin

CHEN Xu-yu1,2, ZHONG Jin-ling3, HUANG Xian4, GAN Bing-chun1*(1. Hainan Branch Institute of Medicinal Plant (Hainan Provincial Key Laboratory of Resources Conservation and Development of Southern Medicine), Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Wanning, Hainan 571533; 2. Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing 100193; 3. Lingnan Normal University, Zhanjiang, Guangdong 524048; 4. Hainan Bikai Pharmaceutical Research Institute Co., Ltd, Haikou, Hainan 570216)

Abstract[Objective] To screen out effective biological pesticides against root rot disease onCurcumawenyujin. [Method] We determined the indoor toxicity of seven kinds of biological pesticides against root rot disease onCurcumawenyujinby mycelium growth rate method. [Result] The toxicological tests showed that 0.5% shiteling amino-oligosaccharin AS andTrichodermaharzianumWP had strong activity against mycelia growth, and theirEC50values were 1.14 and 3.61 mg/L, respectively. Secondly, 3% Zhongsheng mycin WP, 3% amino-oligosaccharin AS andP.fluorescensWP also had activity against the mycelia growth, and theirEC50values were 11.64, 13.52 and 16.61 mg/L, respectively. [Conclusion] The 0.5% shiteling amino-oligosaccharin AS andTrichodermaharzianumWP have good inhibition to the pathogen of root rot, so they can be used in field trials.

Key wordsCurcumawenyujinChen et C. Ling; Root rot; Biological pesticides；Screening

收稿日期2015-12-25

作者簡介陳旭玉(1981- )，女，海南臨高人，副研究員，碩士，從事藥用植物保護及微生物資源開發研究。*通訊作者，研究員，從事病蟲害防治研究。

基金項目國家科技重大專項 (2012ZX09304006)；海南省重大專項 (ZDZX2013008)；國家基本藥物所需中藥原料資源調查和監測項目[國中醫藥科技中藥便函(2012)157、158號]。

中圖分類號S 482.2+92

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2016)02-192-02