氯丙嗪協(xié)同斑蝥酸鈉維生素B6對Hep-2細胞的增殖抑制作用

張　輝　王海濤　侯麗娜　郭惠玲

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林　長春　130041)

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氯丙嗪協(xié)同斑蝥酸鈉維生素B6對Hep-2細胞的增殖抑制作用

張輝王海濤侯麗娜1郭惠玲2

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林長春130041)

〔摘要〕目的探討鹽酸氯丙嗪聯(lián)合斑蝥酸鈉維生素B6對人喉癌Hep-2細胞株的增殖抑制作用及其對細胞周期進程的影響。方法應(yīng)用四甲基偶氮唑藍(MTT)比色法檢測單獨斑蝥酸鈉維生素B6制劑及鹽酸氯丙嗪聯(lián)合斑蝥酸鈉維生素B6制劑對Hep-2細胞的增殖抑制率，流式細胞術(shù)檢測細胞周期進程的變化。結(jié)果單獨斑蝥酸鈉維生素B6組對Hep-2細胞增殖有明顯的抑制作用，而斑蝥酸鈉維生素B6聯(lián)合氯丙嗪效果明顯高于單獨斑蝥酸鈉維生素B6組。流式細胞儀結(jié)果顯示，G1期細胞增多，S期細胞減少，G2/M期細胞相對增多，且細胞凋亡率升高。結(jié)論斑蝥酸鈉維生素B6對Hep-2細胞生長、增殖及其對細胞周期進程均有抑制作用，尤其是氯丙嗪聯(lián)合斑蝥酸鈉維生素B6組效果顯著。

〔關(guān)鍵詞〕氯丙嗪；斑蝥酸鈉維生素B6；人喉癌細胞株；細胞周期；凋亡

1空軍航空大學(xué)教官訓(xùn)練基地一團衛(wèi)生隊

2吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院

第一作者：張輝(1968-)，女，副主任護師，主要從事頭頸腫瘤治療研究。

喉癌在中國北方地區(qū)尤為高發(fā)，目前患者整體的生存率并無顯著提高〔1〕，腫瘤的局部復(fù)發(fā)、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠處轉(zhuǎn)移是影響患者預(yù)后的主要因素。斑蝥酸鈉是斑蝥素的半合成衍生物，其抗腫瘤作用確切〔2〕，對肝癌、食管癌、胃癌、肺癌等有良好療效。但用于頭頸部腫瘤的治療較少。本研究應(yīng)用人喉癌Hep-2細胞株為靶點，旨在探討斑蝥酸鈉對Hep-2細胞的增殖抑制作用。

1材料與方法

1.1細胞株及試劑Hep-2細胞由吉林省腫瘤研究所惠贈，四甲基偶氮唑藍試劑(MTT)、RPMI1640培養(yǎng)基及96孔培養(yǎng)板購于美國Sigma公司，斑蝥酸鈉維生素B6由我院藥劑科提供。

1.2檢測方法細胞增殖抑制實驗(MTT比色法)及細胞周期進程檢測(流式細胞術(shù)法)參照文獻〔3〕略加改進。

1.3給藥方法根據(jù)不同濃度斑蝥酸鈉維生素B6制劑分組，分別為0、1、2、4、8 μg/ml組；聯(lián)合組根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果取斑蝥酸鈉維生素B6 4 μg/ml，再加入4 μg/ml鹽酸氯丙嗪制劑。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS17.0軟件進行t檢驗。

2結(jié)果

2.1MTT結(jié)果斑蝥酸鈉維生素B6對Hep-2細胞增殖有明顯的劑量依賴性，抑制率分別為13.9%、18.2%、34.2%和46.6%，與對照組相比差異顯著，而聯(lián)合組對Hep-2細胞增殖抑制率為47.9%，抑制效果優(yōu)于8 μg/ml組，具有良好的增效作用。

2.2Hep-2細胞周期進程變化及凋亡率流式細胞儀結(jié)果顯示單獨斑蝥酸鈉維生素B6組對細胞周期進程有較強的阻滯作用，阻滯G1期細胞向S期轉(zhuǎn)化進程，細胞增殖變緩，從而使細胞凋亡率升高。聯(lián)合組對Hep-2細胞周期進程及凋亡率的影響優(yōu)于單獨斑蝥酸鈉維生素B6 4 μg/ml組。見表1。

表1　不同濃度的斑蝥酸鈉維生素B6制劑對Hep-2細胞周期

與0 μg/ml組比較：1)P<0.01；與4 μg/ml組比較：2)P<0.01

3討論

目前喉癌治療仍面臨諸多困難，手術(shù)、放療對局部病灶尚可控制，但對淋巴及遠處轉(zhuǎn)移臨床治療時相對比較棘手〔4〕，只能進行化療。但多藥耐藥的產(chǎn)生是腫瘤化療失敗的主要原因〔5〕。本研究中聯(lián)合組斑蝥酸鈉用藥量減少50%，既減輕了病人經(jīng)濟負擔(dān)，又減輕了藥物的副作用，同時增強了治療效果。

流式細胞儀結(jié)果顯示，不同濃度的斑蝥酸鈉維生素B6制劑對Hep-2細胞周期各時相均有影響，阻滯細胞周期進程，阻滯G1期向S期發(fā)展，從而降低基因組的不穩(wěn)定性，腫瘤細胞微環(huán)境改變，繼而細胞發(fā)生自噬或凋亡。斑蝥酸鈉維生素B6制劑可誘導(dǎo)Hep-2細胞凋亡，改變細胞周期的分布，抑制細胞增殖，尤其是鹽酸氯丙嗪作為斑蝥酸鈉維生素B6的增敏劑有望成為喉癌綜合治療的有效藥物。文獻報道〔6〕，斑蝥酸鈉是從斑蝥中提取的一種活性成分。研究證明斑蝥素首先抑制癌細胞RNA、DNA的合成，繼而影響蛋白質(zhì)合成，最終抑制癌細胞分裂，細胞增殖阻滯，誘導(dǎo)細胞凋亡。

鹽酸氯丙嗪協(xié)同斑蝥酸鈉維生素B6對Hep-2細胞有顯著的化療增敏作用。化療增敏劑是指沒有抗腫瘤作用的藥物，但能夠起到干擾腫瘤細胞與組織微環(huán)境間耐藥信號傳導(dǎo)、提高已知抗腫瘤藥物化療效果的作用。氯丙嗪屬于酚塞嗪類化合物，為中樞多巴胺受體的阻斷劑，作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，具有催眠麻醉等多種藥理作用。動物實驗表明，氯丙嗪可致動物出現(xiàn)子宮重量降低，卵泡成熟受抑制〔7〕，與化療藥物作用后可顯著改變化療藥物的藥代動力學(xué)機制。

4參考文獻

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2劉展華，曹洋，陳銳源，等.斑蝥酸鈉對人肺癌LAC細胞增殖的抑制作用〔J〕.中藥新藥與臨床藥理，2008；19(1)：32-3.

3馮青杰，徐艷萍，辛丁，等.氯丙嗪協(xié)同紫衫醇對Hep-2細胞的增殖抑制作用〔J〕.吉林大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2008；34(1)：124-6.

4潘新良.強化喉癌的規(guī)范化治療，不斷提高喉癌治療水平〔J〕.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2014；49(8)：617-9.

5Wang XB，Wang SS，Zhang QF，etal.Inhibition of tetramethylpyrazine on P-gp，MPP2,MRP3 and MRP5 in multidrug resistant human hepatocellular carcinoma cells〔J〕.Oncol Rep，2010；23(1)：211-5.

6劉中虎，陳艾江，馬新剛，等.斑蝥酸鈉維生素B6注射液輔以胸腔鏡內(nèi)臟神經(jīng)切斷術(shù)治療癌性腹痛〔J〕，國際腫瘤學(xué)雜志，2013；40(5)：398-9.

7鄔靜，袁慧，彭雙清.氯丙嗪對大鼠卵巢顆粒細胞損傷及其作用機理〔J〕.毒理學(xué)雜志，2011；25(2)：79-83.

〔2015-10-25修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

通訊作者：郭惠玲(1972-)，女，副主任護師，主要從事造口、傷口、失禁治療研究。

〔中圖分類號〕R979.12

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)04-0803-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.014