新加糖腎康對高糖環境下人腎小管上皮細胞α—平滑肌肌動蛋白和E—鈣黏蛋白的影響

朱苗蕊　權卓　楊麗霞　程濤　張定華　高漢媛　孫文

摘要：目的 觀察新加糖腎康對高糖環境培養下人腎小管上皮細胞（HK-2）α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和E-鈣黏蛋白（E-cadherin）的影響，探討其防治糖尿病腎間質纖維化的作用機制。方法 含10%胎牛血清1640培養基體外培養HK-2細胞。實驗分為空白對照組、高糖組、空白血清組和新加糖腎康低、中、高劑量組。藥物干預后，MTT法檢測細胞增殖，ELISA檢測α-SMA和E-cadherin的含量。結果 與空白對照組比較，HK-2細胞經高糖培養后細胞數量和α-SMA含量顯著增加、E-cadherin含量明顯降低（P<0.05）；與高糖組比較，新加糖腎康組α-SMA含量降低、E-cadherin含量增加、細胞增殖受到抑制。結論 新加糖腎康能夠抑制腎小管上皮細胞表型轉化及細胞增殖，具有防治糖尿病腎間質纖維化的作用。

關鍵詞：新加糖腎康；高糖；人腎小管上皮細胞；表型轉化；細胞增殖

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.03.015

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）03-0054-04

Abstract： Objective To observe he effects of new Tangshenkang on α-SMA and E-cadherin of human renal tubular epithelial cell HK-2 in high concentrations of glucose； To explore the mechanism of new Tangshenkang on the prevention and treatment of diabetic renal fibrosis. Methods The HK-2 cells were cultured and divided into control group， high glucose group， animal serum control group， new Tangshenkang low-， medium-， and high-dosage group. After medicine intervention， cell proliferation was tested by MTT assay， and contents of α-SMA and E-cadherin were observed by ELISA assay. Results Compared with control group， α-SMA of HK-2 cultured with high glucose was much notable， but the content of E-cadherin significantly decreased， with statistical significance （P<0.05）. The content of α-SMA of HK-2 cultured with new Tangshenkang decreased， and the content of E-cadherin increased； cell proliferation was markedly inhibited in culture medium supernatant of HK-2 cells cultured with high glucose plus new Tangshenkang compared with only high glucose， with statistical significance. Conclusion New Tangshenkang can inhibit cell proliferation and epithelial-myofibroblast transdifferentiation of HK-2 cell induced by high glucose， and prevent the development of diabetic renal fibrosis to a certain extent.

Key words： new Tangshenkang； high glucose； human renal tubular epithelial cell HK-2； epithelial-myofibroblast transdifferentiation； cell proliferation

糖尿病腎病（DN）是糖尿病常見的慢性微血管并發癥之一，其發病率高、危害大，在糖尿病所有并發癥中占主要地位。但其發病機制尚未完全闡明。既往研究認為，早期DN病變在腎小球部位，而近年來研究發現，腎小管上皮細胞表型轉化引起的腎間質纖維化與其關系更為密切[1]。中藥復方新加糖腎康是在甘肅省中醫院劉國安和張定華研究的基礎上，結合北京中醫藥大學劉銅華教授治療DN的學術思想，經組方優化，最終確立的臨床經驗方，具有益氣養陰、清熱祛濕、活血化瘀的功效。本課題組前期研究發現，新加糖腎康能夠減少高糖環境培養下人腎小管上皮細胞細胞外基質成分Ⅰ型膠原（ColⅠ）、Ⅲ型膠原（Col Ⅲ）和纖連蛋白（FN）的分泌與沉積，并能調控纖維化因子基質金屬蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制劑-1（TIMP-1）的分泌與釋放[2-3]。本實驗在此基礎上，觀察其對高糖環境下培養人腎小管上皮細胞標志蛋白α-平滑肌肌動蛋白（α-SMA）和E-鈣黏蛋白（E-cadherin）的影響，進一步探討其對DN腎間質纖維化的作用機制。

1 實驗材料

1.1 動物與細胞株

SPF級雄性Wistar大鼠20只，甘肅中醫藥大學動物中心，許可證號SCXK（甘）2004-0006，飼養于甘肅省中醫藥研究院中藥研究所動物室。人腎小管上皮細胞（HK-2），上海斯信生物科技有限公司，甘肅省中醫藥研究院中心實驗室細胞培養室培養。