高效液相色譜法測(cè)定玉米赤霉烯酮的方法

◎ 林有裕

（福建省糧油科學(xué)技術(shù)研究所，福建 福州 350002）

高效液相色譜法測(cè)定玉米赤霉烯酮的方法

◎ 林有裕

（福建省糧油科學(xué)技術(shù)研究所，福建 福州 350002）

當(dāng)前，食品安全問(wèn)題異常突出，在谷物中常常會(huì)檢測(cè)出玉米赤霉烯酮，此類物質(zhì)會(huì)對(duì)人、動(dòng)物的身體健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。為降低惡性事件的發(fā)生概率，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)玉米赤霉烯酮的檢測(cè)，本文采用高效液相色譜法，控制好各項(xiàng)指標(biāo)，進(jìn)而達(dá)到檢測(cè)要求。本文就高效液相色譜法測(cè)定玉米赤霉烯酮的方法予以分析。

高效液相色譜法；玉米赤霉烯酮；檢測(cè)方法

高效液相色譜法（HPLC）是當(dāng)前最為常用的物質(zhì)檢測(cè)與分離技術(shù)[1]，該種檢測(cè)方法隸屬于色譜法，流動(dòng)相為液體，借助高壓輸液體系，將極性不同、比例不同的混合劑、緩沖劑等這些流動(dòng)相裝入到固定相色譜柱之中，處在柱內(nèi)環(huán)境中的各成分分離后，利用檢測(cè)器來(lái)開(kāi)展檢測(cè)活動(dòng)，旨在實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的科學(xué)性分析。為了提升谷物的質(zhì)量與安全性，可借助HPLC方法來(lái)對(duì)構(gòu)成健康威脅的玉米赤霉烯酮進(jìn)行檢測(cè)，以保證人、動(dòng)物食用的安全性。

玉米赤霉烯酮（ZEN）又稱F-2毒素，是隸屬于鐮刀菌的霉菌霉素[2]。該種霉素具有一定的污染性，且主要的污染對(duì)象為玉米、大米、小麥等。ZEN具有免疫毒性與生殖發(fā)育毒性，會(huì)對(duì)人、動(dòng)物造成腫瘤疾病，對(duì)人、動(dòng)物的生命健康產(chǎn)生極大威脅。ZEN屬于一種生殖系統(tǒng)霉素，易導(dǎo)致畸形問(wèn)題的發(fā)生，且會(huì)大大降低家畜的生長(zhǎng)速度、繁殖性障礙與免疫性抑制，對(duì)于畜牧業(yè)會(huì)造成嚴(yán)重的威脅。為提升谷物的安全性，保證人、動(dòng)物食用的安全性，國(guó)家對(duì)ZEN的含量進(jìn)行限定，要求玉米、小麥中ZEN的限量標(biāo)準(zhǔn)是不高于60 μg/kg。若空氣濕度高于85%，此時(shí)禾谷鐮刀菌就會(huì)產(chǎn)生大量的霉菌，且這些霉菌已經(jīng)逐漸得到繁殖，最終產(chǎn)生玉米赤霉烯酮毒素[3]。

HPLC是色譜法中的一種重要方法，將流動(dòng)相設(shè)定為液體，借助高壓輸液系統(tǒng)把極性不同的單一性溶劑、比例不同的緩沖液與混合劑等泵入到色譜柱內(nèi)，處在柱內(nèi)環(huán)境中的各成分分離后，利用檢測(cè)器來(lái)檢測(cè)樣品含量，旨在實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的科學(xué)性分析。通過(guò)對(duì)比多種檢測(cè)方法，HPLC最具資格，也最為合適，盡管使用HPLC檢測(cè)方法前期所耗費(fèi)的成本較高，但該方法操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性強(qiáng)、靈敏度，值得在谷物檢測(cè)ZEN中應(yīng)用。

1 高效液相色譜法測(cè)定玉米赤霉烯酮的操作方法

（1）試驗(yàn)儀器與試劑。型號(hào)為HP1100的液相色譜儀（美國(guó)惠普）；ZEN標(biāo)準(zhǔn)液；質(zhì)量為1.0 mg、濃度為99%的ZEN（美國(guó)西格馬公司），加入足量的乙腈溶解，將溶液稀釋到10.0 mL，濃度為100.0 μg/mL，儲(chǔ)存于冰箱；0.02 mo1/L的乙酸銨溶液：稱量乙酸銨（分析純）1.54 g，并加入一定的水溶解，將該溶液稀釋到1 000 mL，并經(jīng)濾膜過(guò)濾；甲醇、乙腈，為色譜純。

（2）試驗(yàn)方法。①色譜條件。HPLC的應(yīng)用必須具備足夠的色譜條件。基本色譜條件包括：將Hypersi1 ODS-C18設(shè)定為色譜柱，規(guī)格為（250.0 mm×4.6 mm，5.0 μm）；將甲醇、乙酸銨作為為流動(dòng)相，甲醇為0.02 mo1/L，乙酸銨為（70∶30，V/V）；檢測(cè)波長(zhǎng)為236.0 nm；柱溫設(shè)定為24 ℃；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為20 μL。②樣品檢測(cè)。應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行科學(xué)性地處理，操作者及時(shí)將谷物、糧食樣品搗碎，并攪拌均勻，提取樣品量為10 mg，并加入20.0 mL乙腈，并準(zhǔn)備好振搖器，振搖3 min后，過(guò)濾，在50 ℃氮的條件下取出濾液10.0 mL并吹干，此時(shí)，應(yīng)加入乙腈1.0 mL，并及時(shí)將殘?jiān)芙猓瑢?duì)其進(jìn)行直接性的測(cè)定。③檢測(cè)波長(zhǎng)。通過(guò)試驗(yàn)研究，ZEN在乙腈溶液中的最大吸收波長(zhǎng)為236.0 nm，因此，在波長(zhǎng)為236.0 nm的條件下測(cè)定ZEN含量。④設(shè)定線性范圍。在1.0～9.0 μg/mL條件下，得出峰面積（y）與濃度（x）的相關(guān)關(guān)系，列出關(guān)于ZEN的回歸方程。依照儀器噪音的3倍計(jì)算濃度，樣品規(guī)格設(shè)定為10.0 g，并提取乙腈20.0 mL，檢出限為5.0 μg/kg。⑤方法的精確度。樣品中的ZEN濃度分別為27.6、196.0、728.0 μg/kg時(shí)，測(cè)定6次，且標(biāo)準(zhǔn)差變化范圍控制在3.0%～6.8%。

2 結(jié)果

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，應(yīng)用高效液相色譜法來(lái)檢測(cè)玉米赤霉烯酮，無(wú)須使用免疫親和柱，可大大降低成本，其提取過(guò)程更加簡(jiǎn)單，檢測(cè)效率高，最低檢出限要明顯低于國(guó)家的限量標(biāo)準(zhǔn)，且成本低、穩(wěn)定性高、靈敏度強(qiáng)，值得在ZEN檢測(cè)中應(yīng)用。

3 結(jié)語(yǔ)

谷物是人、動(dòng)物日常生活中不可缺少的食物，其存在價(jià)值不容忽視。為保證谷物的安全性，必須加強(qiáng)對(duì)谷物成分的檢測(cè)，強(qiáng)化對(duì)高效液相色譜法的應(yīng)用，科學(xué)選擇流動(dòng)相，控制各項(xiàng)檢測(cè)參數(shù)與指標(biāo)，能大大提高檢測(cè)效果。借助高效液相色譜法來(lái)檢測(cè)玉米赤霉烯酮，該試驗(yàn)方法操作起來(lái)相對(duì)簡(jiǎn)單，且成本低、穩(wěn)定性高、靈敏度也強(qiáng)，值得在玉米等谷物中玉米赤霉烯酮檢測(cè)系統(tǒng)中應(yīng)用。

[1]姚秀娟，王書舟，王志強(qiáng).免疫親和柱-高效液相色譜法測(cè)定食用油中玉米赤霉烯酮[J].河南預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2016（9）：661-663.

[2]崔曉娜，李 舫，王洪濤，等.高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定糧谷及飼料中玉米赤霉烯酮及其代謝物和伏馬毒素B1、B2[J].中國(guó)畜牧雜志，2015（4）：62-66.

[3]任丹丹，李少暉，謝云峰，等.高效液相色譜法測(cè)定原糧中玉米赤霉烯酮的改進(jìn)研究[J].食品安全質(zhì)量檢測(cè)學(xué)報(bào)，2015（4）：1162-1166.

HPLC Method for the Determination of Corn Gibberellic Ketene Profiling

Lin Youyu
(Fujian Province Grain and Oil Science and Technology Research Institute, Fuzhou 350002, China)

At present, food safety issues is highlighted, the corn gibberellic ketene is often detected in grain which would pose serious health threat to people and animals. To reduce the probability of occurrence of malignant events, the detection of corn gibberellic ketene should strengthen. This paper using high performance liquid chromatography (HPLC) method, good control indicators, to meet the testing requirements. In this paper, the high performance liquid chromatography (HPLC) method was developed for the determination of corn gibberellic ketene analysis.

High performance liquid chromatography; Corn gibberellic ketene; Detection method

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.20.036

S435.131

林有裕（1984-），男，本科，助理工程師；專業(yè)方向?yàn)椋菏称窓z測(cè)。