豬乙型腦炎痘苗和檢測技術研究進展

王家濤　崔克

摘要：豬乙型腦炎是一種人獸共患的病毒性傳染病，嚴重威脅養豬業發展和公共衛生安全。文章對豬乙型腦炎疫苗和檢測技術的研究現狀進行綜述，為預防和檢測該病提供參考。

關鍵詞：豬乙型腦炎；疫苗；檢測技術

豬乙型腦炎又稱日本乙型腦炎，由黃病毒科黃病毒屬乙型腦炎病毒引起，是一種急性中樞神經系統人獸共患傳染病，國際獸醫局將該病列為B類傳染病。該病不僅危害集約化養豬業，造成巨大的經濟損失，也影響人類健康，嚴重威脅公共衛生安全。目前尚無有效的治療方法，強化檢測技術和疫苗質量的提高是控制該病的有效手段，現將豬乙型腦炎疫苗和檢測技術的研究進展情況進行綜述。

1 疫苗研究進展

1.1 常規疫苗

目前，在畜牧業生產中用于預防豬乙型腦炎的常規疫苗有滅活苗和減毒活疫苗，其中滅活苗由北農科院畜牧獸醫研究所采用豬乙型腦炎強毒株WH-1株研制成功，并于1996年獲準投入市場，該疫苗接種各類豬群后無應激反應、胎內感染及病毒血癥，安全性好，保護率高，但是存在免疫保護期短、免疫劑量大等不足之處。減毒活疫苗也由湖北農業院畜牧獸醫研究所研發，其使用SA14-14-2毒株，經接種地鼠腎原代細胞增殖，將病毒液凍干制成。研究表明，病毒活疫苗安全性高、免疫原性好，特別是對后備母豬及初產母豬可產生高效的細胞免疫和體液免疫。缺點在于可能出現毒力返強，存在潛在的致病危險，同時地鼠腎原代細胞未通過WHO認證，這嚴重影響了疫苗的應用范圍。

1.2 基因工程疫苗

隨著分子生物學、分子免疫學、基因工程學等生物技術的發展，科研人員對豬乙型腦炎基因工程疫苗進行了大量的研究，取得一系列成果。

近年來，科研人員采用反向遺傳學基因工程技術構建嵌合病毒作為防治豬乙型腦炎的新型疫苗，即：重組嵌合病毒疫苗。如將豬乙型腦炎病毒的E基因替換豬瘟病毒的E基因，構建豬乙型腦炎-豬瘟嵌合病毒，免疫小鼠及豬后，均產生了乙型腦炎病毒特異性抗體。將豬乙型腦炎病毒的prM和E基因代替黃熱病毒的同種基因，構建乙型腦炎-黃熱嵌合病毒，實驗證明，具有較高的安全性和特異性抗體水平，免疫抗體轉陽率達99.1%，并且已在澳大利亞注冊成功。同時，構建成功的含有豬乙型腦炎病毒prM或E基因的重組痘苗病毒，免疫小鼠和豬后也可防護豬乙型病毒的攻擊。

核酸疫苗作為另一類基因工程疫苗也取得了大量的研究成果。目前的研究主要集中在豬乙型腦炎病毒的prM、E和NS1基因上，Ashok NS等證實了含有E基因的核酸疫苗保護作用有限，僅刺激抗體產生低水平的細胞免疫，而含部分E基因的核酸疫苗則在小鼠體內產生了較高的中和抗體水平和細胞免疫反應，對其保護率可達71%。Konishi等證實采用含有豬乙型腦炎前膜信號肽（s）prM、E基因的核酸疫苗免疫小鼠后，保護率可達100%，免疫持續期為6個月。隨后其又證實了含有prM和E基因的核酸疫苗免疫動物后，不僅刺激抗體產生特異性CTL細胞參與細胞免疫，還產生B細胞參與體液免疫。對于含有NS1基因的核酸疫苗，Lin等證明了雖在小鼠體內未檢測到中和抗體，但存在很強的補體反應，可促小鼠獲得90%的保護，但是含NS1基因的核酸疫苗的免疫效果與采用的表達系統和其序列有關。雖然豬乙型腦炎病毒核酸疫苗的研究取得了顯著的成果，但是其安全性、免疫途徑等因素仍需進一步論證，現仍處在實驗室研究階段。

另一類豬乙型腦炎病毒新型疫苗為亞單位疫苗，XuXG等利用桿狀病毒表達系統表達的豬乙型腦炎E蛋白，免疫小鼠和豬，在動物體內檢測到特異性中和抗體。我國的曹瑞兵等構建了表達豬乙型腦炎病毒多表位抗原的病毒樣顆粒疫苗，證實疫苗在小鼠身上與豬乙型腦炎弱毒疫苗的免疫效果相近。但是目前為止，亞單位疫苗也是仍處于實驗階段。

2 檢測技術研究進展

隨著對豬乙型腦炎研究的深入，其檢測技術有了很大的進展。

2.1 血清學檢測技術

目前常用的有酶聯免疫吸附試驗、免疫熒光試驗、補體結合試驗、血凝抑制試驗、乳膠凝集試驗、協同凝集試驗。其中酶聯免疫吸附試驗作為一種敏感、特異、穩定的檢測技術在豬乙型腦炎的檢測中得到了廣泛的應用。沈婷等建立的間接酶聯免疫吸附試驗方法，用于檢測豬乙型腦炎病毒抗體，與同類方法比較，吻合率達95.6%，且具有較高的敏感性與特異性，并對江蘇等4省開展了1089份樣的血清流行病毒調查，獲得了較好的效果。補體結合試驗對診斷豬乙型腦炎有較高的特異性，但因補體結合抗體在動物發病后兩周才出現，故該法也只能作為回顧診斷用。血凝抑制試驗可以檢測豬乙型腦炎病毒IgM和IgG抗體，敏感性強，操作簡單，是常用的豬乙型腦炎流行病學和臨床診斷方法。而賈杏林等建立的豬乙型腦炎乳膠凝集試驗，與血凝抑制試驗相比，對同一組樣品的檢測結果差異不顯著（P>0.05），且具有快速、易于判斷、不需特殊儀器的優點，適合基層單位推廣使用。宋大偉等建立的豬乙型腦炎協同凝集試驗，產生的凝集現象肉眼可以判斷，與酶聯免疫吸附試驗相比，簡單、快捷、敏感性高、特異性強，也適合基層單位推廣使用。王吉等建立的免疫熒光試驗，結果表明，靈敏度是乳膠凝集試驗的8倍，可用于豬乙型腦炎的確診，但是由于其操作繁瑣，血清中的非特異性吸附等因素，限制了診斷方法的應用。

2.2 病原學檢測技術

最常用的豬乙型腦炎病原學檢測技術有病毒分離鑒定和分子生物學檢測技術，病毒分離鑒定結果準確，可以獲得病毒株，但操作繁瑣，費時費力，不適合豬乙型腦炎的快速檢測。隨著生物技術的發展，豬乙型腦炎病毒分子生物學檢測技術取得了很多研究成果，高正琴根據豬乙型腦炎病毒C基因序列，建立了反轉錄——聚合酶鏈式反應（RT-PCR）方法，崔奕杰等根據豬乙型腦炎病毒E基因序列也建立了RT-PCR方法，結果表明，敏感性高、特異性強，均得到很好的檢測效果。蔡緒禹等根據Gen-Bank公布的豬乙型腦炎病毒等5種人獸共患腦炎病毒的基因序列，建立了可同時檢測5種病毒的多重RT-PCR方法，而何玢等建立了與豬乙型腦炎病毒相關的8種蟲媒病毒的多重RT-PCR方法，結果表明，這些方法具高通量、簡便、快速、靈敏、特異，對豬乙型腦炎等病毒性腦炎的分子診斷有重要意義。近年來出現的實時熒光PCR方法是對PCR方法的發展與延伸，比PCR方法更加敏感、特異，同時可定量檢測，該方法又可分為TaqMan熒光探針法和SYBR熒光染料法。黃福新等根據豬乙型腦炎病毒NS3基因序列，建立了TaqMan熒光探針法RT-PCR，研究表明，可檢測100μg/μL的病毒，且時間僅需3h，可用于豬乙型腦炎的實驗室快速檢測。同時，陳志永等建立了SYBR熒光染料法RT-PCR，結果表明，是一種敏感、特異、快速的豬乙型腦炎檢測方法。

3 結語與展望

豬乙型腦炎作為重要的人獸共患病，對養殖業和公共衛生安全有巨大的威脅。隨著現代科學技術的發展，對豬乙型腦炎疫苗生產工藝、純化工藝不斷完善，積極開發基因工程新型疫苗，同時對各種檢測方法不斷優化，相信一定會出現安全、有效、實用、經濟的疫苗和快速、準確、靈敏、特異的檢測技術，建立完善豬乙型腦炎的預防和檢測體系及策略，為該病的防治提供科學支持，確保畜牧業生產和公共衛生的安全。

（編輯：趙曉松）