液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定酒中甜蜜素含量的研究

鐘偉球

博羅中等專業(yè)學(xué)校 廣東博羅 516100

液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定酒中甜蜜素含量的研究

鐘偉球

博羅中等專業(yè)學(xué)校 廣東博羅 516100

甜蜜素是我國(guó)廣泛使用的甜味劑，過多食用會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生不良影響，因此需要嚴(yán)格控制甜蜜素的含量。本文研究測(cè)定酒中甜蜜素的含量，通過對(duì)液相色譜－質(zhì)譜/質(zhì)譜法這一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行反復(fù)研究，并進(jìn)一步優(yōu)化，結(jié)果表明，優(yōu)化后的該方法測(cè)定甜蜜素的含量既簡(jiǎn)單易行，又大大減少假陽(yáng)性，提高分子結(jié)果的準(zhǔn)確性。

液相色譜-質(zhì)譜法;甜蜜素；測(cè)定

一、引言

甜蜜素（Sodium Cyclamate）學(xué)名環(huán)己基氨基磺酸鈉，是食品生產(chǎn)中常用的添加劑，其口感好、價(jià)格低廉，甜度是蔗糖的30～40倍，而價(jià)格僅為蔗糖的3倍，若經(jīng)常食用甜蜜素含量超標(biāo)的飲料或其他食品，就會(huì)因攝入過量對(duì)人體的肝臟和神經(jīng)系統(tǒng)造成危害。因此，許多國(guó)家禁止或限制使用甜蜜素，我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB2760-2011中對(duì)甜蜜素的使用范圍和最大使用量做了限制。除了在配制酒中可以使用甜蜜素，而且最大使用量為0.65g/ kg外，在蒸餾酒和發(fā)酵酒中均不得使用甜蜜素。為保障人們身體健康，研究能夠準(zhǔn)確、快速測(cè)定酒中甜蜜素的方法是十分必要和具有現(xiàn)實(shí)意義的。目前我國(guó)酒中甜蜜素含量的測(cè)定主要依據(jù)SN/ T1948-2007進(jìn)出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測(cè)方法∶液相色譜－質(zhì)譜/質(zhì)譜法，該方法中，兩對(duì)離子對(duì)通過兩種離子模式進(jìn)行采集，相對(duì)較繁瑣。本實(shí)驗(yàn)將對(duì)此方法進(jìn)行優(yōu)化，使得該方法測(cè)定酒中甜蜜素的含量更為簡(jiǎn)便、高效。

二、材料與方法

（一）材料與試劑

酒，監(jiān)督抽檢；乙酸、甲醇均為色譜純；甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥99.8%；試驗(yàn)用水為超純水。

（二）儀器與設(shè)備

Agilent-1260高效液相色譜-4500QTRAP質(zhì)譜儀，美國(guó)AB公司；S205DU分析天平。

（三）方法

1、對(duì)照品儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確稱取甜蜜素501.08mg，置50mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，搖勻，即得甜蜜素對(duì)照品儲(chǔ)備液，濃度為10.00mg/mL。

2、對(duì)照品工作液。精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液0.1ml，置10ml量瓶中，加水至刻度，搖勻(濃度為100.0μg/ml)，精密量取該溶液1ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得對(duì)照品工作液(濃度為1.000μg/ml)。

3、標(biāo)準(zhǔn)曲線。取5個(gè)10mL容量瓶，分別加入對(duì)照品工作液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0mL，加水定容至刻度，搖勻，即得曲線L1、L2、L3、L4、L5，甜蜜素濃度分別為10.00、20.00、50.01、100.0、200.0ng/mL。

4、色譜條件。色譜柱∶AgilentSB-Aq4.6mm×100mm，2.7μm；流動(dòng)相組成為∶A-0.1%乙酸水溶液，B-甲醇，流速∶0.7mL/min；柱溫30℃；進(jìn)樣量∶5μL。等度洗脫，比例為50∶50。

表1 甜蜜素檢測(cè)的質(zhì)譜條件

5、質(zhì)譜條件。離子源∶電噴霧離子源；檢測(cè)方式∶MRM；氣簾氣流速∶35L/min；離子源溫度∶550℃；碰撞氣流速∶6L/min；噴霧電壓∶-4500V；輔助氣流速∶50L/min；其余質(zhì)譜條件見表1。

6、供試品溶液制備。取10mL量瓶，精密加入供試品10mL，用水浴加熱氮吹儀除去乙醇，冷卻后，用水定容至刻度，搖勻，然后用0.22μm濾膜過濾，濾液待上機(jī)分析。

7、加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。取10mL比色管，精密加入供試品10mL，并稱其重量，共9份，在氮吹儀上吹至無乙醇味。于1-3份中精密加入對(duì)照工作液0.2mL,作為加樣回收1，于4-9份中精密加入對(duì)照工作液1.0mL,作為加樣回收2，用水定容至刻度，混勻，用0.45μm微孔濾膜過濾，濾液上機(jī)分析。

8、檢出限溶液制備。取10mL量瓶，精密加入空白供試品10mL，用水浴加熱氮吹儀除去乙醇，冷卻后，加入0.1mL對(duì)照品工作液，并用水定容至刻度，搖勻，然后用0.22μm濾膜過濾，濾液待上機(jī)分析。

9、樣品測(cè)定方法。將處理好的待測(cè)液放入自動(dòng)進(jìn)樣器的樣品盤上，進(jìn)樣器自動(dòng)進(jìn)樣1μL，數(shù)據(jù)采集采用Analyst Software工作站進(jìn)行采集處理，采用Quantitative Analysis軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，使用外標(biāo)法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得出樣品溶液中甜蜜素的質(zhì)量濃度。再根據(jù)以下公式得出檢測(cè)結(jié)果。

結(jié)果計(jì)算用公式(1)，回收率計(jì)算用公式(2)，檢出限計(jì)算用公式(3)∶

W=C×V/M (1)

回收率(%)=測(cè)得濃度×稀釋倍數(shù)×100/加標(biāo)量 (2)

檢出限(μg/kg)=進(jìn)樣濃度×稀釋倍數(shù)×3/取樣量/信噪比 (3)

式中，W為樣品中甜蜜素的含量(μg/kg)；C為測(cè)得濃度/(ng/ mL)；V為稀釋倍數(shù)；M為樣品取樣量(g)。

三、結(jié)果與分析

表1 甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

（一）質(zhì)譜與色譜條件的選擇

將含有1μg/mL的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液分別在正離子和負(fù)離子模式下進(jìn)行全掃描，找到最佳的電離模式。結(jié)果表明在正負(fù)離子模式下，各有兩對(duì)離子響應(yīng)相對(duì)較強(qiáng)，不過正離子模式下，基線響應(yīng)較高，綜合離子對(duì)響應(yīng)及離子對(duì)之間的豐度比等因素，選擇負(fù)離子模式作為掃描模式，選擇[M-Na]作為母離子，進(jìn)行碰撞能量的優(yōu)化。以178/79.8離子對(duì)作為定量離子，178/96離子對(duì)作為定性離子。質(zhì)譜條件見表1。

（二）線性關(guān)系

把標(biāo)準(zhǔn)品曲線注入液相質(zhì)譜聯(lián)用儀，以峰面積為(Y)軸，相對(duì)質(zhì)量濃度為(X)軸建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出回歸方程，結(jié)果見圖1。結(jié)果顯示

，該方法的線性范圍為∶10ng/mL～200ng/mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，其回歸方程及相關(guān)系數(shù)R分別為∶Y=87602X+62876，R=0.9999。

（三）回收率及精密度結(jié)果

圖2 負(fù)離子模式下甜蜜素質(zhì)譜圖及信噪比

表2 回收率及精密度結(jié)果

回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，低濃度回收率為103，RD值為3.8%，高濃度回收率為99.1%，RD值為2.1%。結(jié)果見表2。從表中結(jié)果可看出，改方法對(duì)酒中甜蜜素的檢測(cè)回收率較高，精密度好，能滿足酒中甜蜜素的測(cè)定。

（四）樣品檢測(cè)結(jié)果

按照(1.3.6)對(duì)樣品進(jìn)行前處理，然后進(jìn)樣分析，外標(biāo)法進(jìn)行定量，并通過定性定量離子風(fēng)度比對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定，結(jié)果見表3。

表3 酒中甜蜜素的測(cè)定結(jié)果

（五）方法檢出限

在本實(shí)驗(yàn)條件下，在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，以質(zhì)譜儀3倍信噪比計(jì)算目標(biāo)物組分的檢出限為4.2μg/kg。結(jié)果見圖2及表4。

表4 酒中甜蜜素檢出限結(jié)果

四、結(jié)論

綜上所述，在食品安全形勢(shì)嚴(yán)峻的大局下，把好食品安全檢測(cè)關(guān)非常重要，為了做好酒中甜蜜素的測(cè)定工作，通過優(yōu)化檢測(cè)手段，研究快速、高效和靈敏度高的檢測(cè)方法，將成為甜蜜素檢測(cè)的發(fā)展方向。本文主要針對(duì)SN/T1948-2007進(jìn)出口食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法中的測(cè)定方法進(jìn)行了研究，把其中的正負(fù)離子模式各對(duì)一組離子對(duì)進(jìn)行掃描，優(yōu)化成只通過負(fù)離子模式對(duì)兩組離子對(duì)進(jìn)行掃描，并通過豐度比對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。結(jié)果表明，該方法在測(cè)定酒中甜蜜素時(shí)，準(zhǔn)確度高，回收率高，檢出限低，而且該方法便于操作、重現(xiàn)性良好，大大減少假陽(yáng)性，提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性。

[1]章海平．食品中甜蜜素含量測(cè)定方法探討與改進(jìn)[J]．中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè),2015．12(34):191-192．

[2]石敏,呂世玲,李彩霞．利用氣相色譜儀進(jìn)行白酒中甜蜜素的檢測(cè)方法的研究[J]．釀酒,2016．43(3):77-79．

[3]張衛(wèi)軍,毛周平．高效液相色譜法對(duì)白酒中甜蜜素含量的測(cè)定[J]．釀酒,2016(05)．