玉米醇溶蛋白檢測方法研究

劉振宇,徐佳璐

(哈爾濱國家糧油質量檢測中心，黑龍江 哈爾濱 150070 )

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玉米醇溶蛋白檢測方法研究

劉振宇,徐佳璐

(哈爾濱國家糧油質量檢測中心，黑龍江 哈爾濱 150070 )

摘要：玉米是我國北方主要的飼用糧品種之一，而玉米醇溶蛋白存在于玉米的胚乳中，是玉米蛋白中的主要成分之一，然而這種蛋白不能夠被動物吸收和利用，含量過高反而會使得家畜對其他營養成分的消化和吸收能力下降，現通過回收率試驗等研究比濁法對于醇溶蛋白的檢驗效果，為尋找出最佳的實驗方法提供了依據。

關鍵詞：玉米；醇溶蛋白；萃取

1方法原理

將樣品粉碎至所需細度后，經過脫脂，用有機溶劑萃取，之后測定其吸光度，與標準曲線比較的出醇溶蛋白含量。再通過回收率試驗等，評價其檢驗結果準確性。

2儀器與材料

主要儀器設備：磁力加熱攪拌器；紫外可見分光光度計；渦旋混合器。perten3100錘式旋風磨、數顯電熱恒溫干燥箱、JA-203N千分之一電子天平；可調速離心機、HY4調速多用振蕩器等。

試劑及配制：100%丙酮；玉米醇溶蛋白標準樣品；100%異丙醇；2-巰基乙醇；三氯乙酸(試驗中所有未特殊說明的試劑均為分析純)。含0.6%2-巰基乙醇55.0%異丙醇溶液配制：將2-巰基乙醇3mL及異丙醇275mL依次加入到500mL容量瓶中，用蒸餾水定容，充分混勻后靜置待用。三氯乙酸溶液(0.15mol/L)配制：將三氯乙酸12.5g加入到500mL容量瓶中，用蒸餾水定容，充分混勻后靜置待用。

樣品選擇：8個品種的玉米屬于馬齒型或半馬齒型，分別為：先玉335、龍丹48，樣品由哈爾濱市糧食研究所提供。玉米中的DM、CP含量測定依據《飼料分析及飼料質量檢測技術》[1]。

3實驗方法

樣品準備：將除雜后的玉米樣品分別置于數顯電熱鼓風干燥箱內，在50℃下干燥24h。接著將干燥并冷卻后的樣品分別用錘式旋風磨進行粉碎，最后通過60目篩，通過率90%以上。將粉碎后的樣品再次置于數顯電熱鼓風干燥箱內，設定溫度為105℃，繼續干燥3h，冷卻備用。

脫脂：準確稱取1.000g玉米樣品，移入150mL錐形瓶中，加入丙酮(分析純)20mL，在磁力攪拌器上進行混勻1h。稱量干燥過的Φ12.5cm定量濾紙的質量m1，記錄數據(精確至0.001g)，將已知質量的濾紙折疊后置于布氏漏斗上對丙酮與玉米粉混合物進行過濾，用少量丙酮反復沖洗3～4次直至洗凈。將濾紙置于烘箱中于50℃下烘干24h。冷卻后稱重記錄濾紙及干物質的質量m2，精確到0.001g。計算脫脂后干物質的質量(m0)：m0=m2-m1。

提取：用分析天平分別準確稱取0.200g脫脂后樣品。置于50mL離心管中，向其中加入配置好的醇溶液各20mL，置于磁力攪拌器上充分混勻后，置于離心機上離心15min，移取上層清液0.5mL，加入到配置好的三氯乙酸溶液5.5mL的10mL圓底玻璃試管內，混勻，靜置30min進行比色。

標準曲線繪制：分別吸取0.5mL濃度為0μg/mL，0μg/L、0.05μg/L、0.25μg/L、0.35μg/L、0.45μg/L、0.65μg/L、0.75μg/L、0.85μg/L玉米醇溶蛋白標準溶液，配置好的三氯乙酸溶液5.5mL的10mL比色皿內，旋渦混勻后靜置30min，在波長為440nm處測定吸光度。以玉米醇溶蛋白的標準含量(μg/L)為縱坐標，以吸光度數值為橫坐標繪制標準曲線。

穩定性實驗：準確移取醇溶蛋白標準樣品(0.650μg/L)和先玉335號樣品，測定吸光度，靜置20min、30min、40min、50min、60min后各測定一次吸光度。所測結果的相對標準偏差分別為2.056%和2.133%，說明該實驗在1h內穩定性良好。

回收試驗：準確稱取醇溶蛋白標準樣品，配制成濃度為1.00μg/L的標準儲備液。實驗時將其梯度稀釋至0.1μg/mL，0.2μg/mL，0.3μg/ mL，0.4μg/mL，0.5μg/mL，0.6μg/mL，0.7μg/mL，0.8μg/mL，0.9μg/mL 以及1.0μg/mL的標準溶液。分別測定其吸光度，將所有的結果進行線性回歸計算，縱坐標為峰面積，橫坐標為濃度，計算出線性關系，同時得到相關系數[2]。

向做好前處理好的十份龍丹48樣品A～J中依次加入0.5mL十個梯度濃度的標準溶液，添加水平從小到大依次為0.01～1μg/g。梯度為0.01μg/g。混勻后充分沉降30min，在同一條件下重復上述步驟進行吸光度的檢測。最后選取濃度為0.5μg/L和1.0μg/L的標準溶液進行回收率實驗，進行六次重復操作，計算分析方法的實用性。

經過計算所得，玉米醇溶蛋白的回歸線性方程為：Y=12683.12x-126.38，其線性范圍為0.0325～0.96μg/L，線性相關系數為0.9984，能夠滿足定量檢測的要求。

而十組不同添加水平的玉米醇溶蛋白加標回收率及相對標準偏差分別是：樣品A回收率是82.44%，相對標準偏差是2.26%；樣品B回收率是89.32%，相對標準偏差是3.36%；樣品C回收率是91.29%，相對標準偏差是4.22%；樣品D回收率是88.45%，相對標準偏差是2.93%；樣品E回收率是87.16%，相對標準偏差是3.13%；樣品F回收率是89.96%，相對標準偏差是8.73%；樣品G回收率是90.58%，相對標準偏差是6.24%；樣品H回收率是80.55%，相對標準偏差是6.17%；樣品I回收率是92.43%，相對標準偏差是2.32%；樣品J回收率是81.64%，相對標準偏差是5.12%。

經計算，十次梯度添加玉米醇溶蛋白標樣的實驗回收率為80.55%～92.43%，相對標準偏差為2.26%～8.73%，由此可以判定，該方法的精密度和準確性符合分析要求。

參考文獻：

[1] 楊勝.飼料分析及飼料質量檢測技術[M].北京:農業大學出版社,1993.

[2] L.F. Ferraretto,R.D. Shaver,M. Espineira,H. Gencoglu,S.J. Bertics. Influence of a reduced-starch diet with or without exogenous amylase on lactation performance by dairy cows[J]. Journal of Dairy Science,2011.

收稿日期:2016-02-22

作者簡介：劉振宇(1987-),男，山東萊蕪人，本科，助理工程師，主要從事糧油檢驗方面工作。

doi:10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.07.014

中圖分類號：S816.41

文獻標識碼：A

文章編號：2095-9737(2016)07-0021-01