復方片仔癀肝寶對乙醇代謝的影響*

林珊 陳達鑫 趙錦燕 曾建偉 洪振豐#

（1福建中醫藥大學中西醫結合研究院福州 350122；2福建省中西醫結合老年性疾病重點實驗室福州 350122）

●論著●

復方片仔癀肝寶對乙醇代謝的影響*

林珊1,2陳達鑫1,2趙錦燕1,2曾建偉1,2洪振豐1,2#

（1福建中醫藥大學中西醫結合研究院福州 350122；2福建省中西醫結合老年性疾病重點實驗室福州 350122）

目的：探討復方片仔癀肝寶對乙醇代謝的影響。方法：SD雄性大鼠隨機分為正常對照組、模型組、海王金樽組（陽性對照）和復方片仔癀肝寶高、中、低劑量組，每組8只。給藥后0.5 h除了正常對照組，其余各組灌胃白酒。采用頂空氣質聯用法（HS-GC-MS）測定給酒后0.5、1、2、3、5 h大鼠血液中的乙醇濃度，運用ELISA法檢測乙醇達到峰值時乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的含量。結果：復方片仔癀肝寶組在不同時間點大鼠血液中的乙醇、乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的濃度均低于模型組（P＜0.05）。結論：復方片仔癀肝寶促進乙醇代謝，達到解酒的目的。

復方片仔癀肝寶；乙醇代謝；頂空氣質聯用儀

醉酒是指一次飲酒過量導致血液中乙醇濃度過高，最易誘發肝及神經系統的損傷。含有不同乙醇濃度的酒精進入人體內后，經消化道吸收入血，首先經門靜脈入肝臟，肝臟是乙醇的主要代謝場所，因為只有肝臟才具有乙醇代謝所特有的酶類，所以乙醇代謝具有器官特異性。除肝臟外肌肉組織亦可進行少量代謝[1]。解酒的關鍵是降低血中乙醇以及代謝產物的濃度，減輕其對各器官的毒性作用[2]。目前解酒主要采用利尿及對癥處理方法，缺乏特效和特異性的解酒藥，尤其降低過度飲酒引起的肝損傷。復方片仔癀肝寶是一種由多種中草藥混合而成的中成藥制劑，含有牛黃、田七、蛇膽、茵陳、龍膽、梔子、白芍等藥材，具有較好的保肝護肝作用。課題組已研究表明，復方片仔癀對四氯化碳誘導急性肝損傷具有保護作用[3]。本實驗采用頂空氣相質譜法和ELISA法觀察復方片仔癀對乙醇代謝的影響，探討復方片仔癀肝寶的保肝解酒作用，為臨床應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 實驗動物SD大鼠購自上海斯萊克實驗動物有限公司，SPF級，體重（200±20）g，雄性，許可證號：SCXK(滬)2008-0016。動物實驗室溫度20～24℃，濕度40%～70%[（50±5）%]，風速0.1～0.2 m/s，氣流≥28次/min。

1.2 實驗藥物及試劑復方片仔癀肝寶由福建省片仔癀藥業有限公司提供（批號：1412061）；北京紅星二鍋頭（56度，北京紅星股份有限公司）；乙醇脫氫酶試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）；乙醛脫氫酶試劑盒（上海西唐生物科技有限公司）；乙醇色譜純（SIGMA）。

1.3 實驗儀器頂空氣質聯用儀5977 MSD，7890B GC system（安捷倫，美國）、微量天平（德國賽多利斯公司）、酶標儀EXL800（寶特，美國）；低溫離心機（TDZ4A-WS，湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司）。

2 實驗方法

2.1 動物分組及給藥SD雄性大鼠48只，隨機分為6組，每組8只，分別為正常對照組、模型組、復方片仔癀肝寶高劑量組（600 mg/kg）、復方片仔癀肝寶中劑量組（300 mg/kg）、復方片仔癀肝寶低劑量組（150 mg/kg）、海王金樽組（300 mg/kg）。正常對照組和模型組給予生理鹽水，其它各實驗組按照不同劑量灌胃給藥，5 ml/kg。0.5 h后除正常對照組以外，其余各組紅星二鍋頭5 ml/kg灌胃。在給酒后0.5、1、2、3、5 h眼球后靜脈叢取血，4℃保存，備用。

2.2 頂空氣質聯用儀（HS-GC-MS）檢測血液中乙醇的濃度

2.2.1 儀器條件自動頂空條件：樣品瓶80℃加熱，平衡5 min。氣相色譜條件：Agilent DB-WAX色譜柱（30 m×250 μm，0.25 μm）；進樣口溫度250℃；載氣為He，流量1 ml/min。程序升溫條件：初始溫度40℃，以30℃/min升至130℃，保持2 min。質譜條件：電離方式EI，電子能量70 eV；離子源溫度230℃；數據采集掃描模式為SIM掃描。掃描質量范圍25～150 amu。

2.2.2 標準曲線分別吸取乙醇溶液適量置于容量瓶中，加水配成0.3、0.15、0.075、0.037 5、0.018 75 mg/ml溶液，然后各取1 ml置于頂空瓶中，待測。

2.2.3 樣品處理方法取各組血液400 μl放入20 ml的頂空瓶，80℃加熱5 min，然后自動吸取頂空瓶中氣體300 μl進行氣相色譜-質譜檢測。

2.3 ELISA檢測血液中乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶的含量按照試劑盒操作說明，檢測血液中乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶的含量。

2.4 統計學分析采用SPSS18.0統計軟件分析，實驗數據處理以（±s）表示，多組均數間比較采用單因素方差分析檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3 結果

3.1 建立測定乙醇的標準曲線以復方片仔癀肝寶的濃度為橫坐標，乙醇峰面積為縱坐標，回歸方程為Y=340.42X+6 825.5，回歸系數為0.992 5，線性良好。

3.2 復方片仔癀肝寶對乙醇代謝的影響模型組在乙醇灌胃后1 h，乙醇在大鼠血液中的濃度達到最高，而其余實驗組血液中乙醇濃度有不同程度的降低，尤其復方片仔癀肝寶組的乙醇濃度顯著低于模型組，差異有統計學意義（P＜0.05）。雖然復方片仔癀肝寶對乙醇代謝的影響沒有呈明顯的劑量依賴，但高劑量組能明顯降低血液中乙醇的濃度。見表1。

表1 復方片仔癀肝寶對乙醇代謝的影響（μg/ml，±s）

表1 復方片仔癀肝寶對乙醇代謝的影響（μg/ml，±s）

注：與正常對照組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

3.3 復方片仔癀肝寶對乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶含量的影響結果表明，在1 h血清中乙醇濃度顯著升高，乙醇脫氫酶含量升高，乙醛脫氫酶含量降低。復方片仔癀肝寶組乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶含量明顯低于模型組（P＜0.05），復方片仔癀肝寶未提高血清中乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的含量。見表2。

表2 復方片仔癀肝寶對乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶含量的影響（mmol/L，±s）

表2 復方片仔癀肝寶對乙醇脫氫酶及乙醛脫氫酶含量的影響（mmol/L，±s）

注：與正常對照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

4 討論

乙醇對人體生理上有不利影響，已經多方面被深入研究過，包括神經功能、新陳代謝、心血管機能、溫度調節和骨骼肌疾病等[4]。過量飲酒引起的相關疾病包括口腔、食道、咽喉、乳腺和肝臟等部分的腫瘤、神經系統性疾病、肝硬化和酒精成癮等[5]。因此，研究能夠加快乙醇在體內代謝的藥物有十分重要的意義。乙醇在體內代謝有三條途徑，即乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶的轉化作用、滑面內質網上的微粒體乙醇氧化系統（MEOS）-有賴于細胞色素P450參與的代謝作用和過氧化小體上觸媒的代謝作用[9]。乙醇被生物體吸收入血之后進行代謝，在肝臟中代謝，血液中的含量隨時間推移不斷減少。通過檢測不同時間點血液中乙醇及其代謝酶的濃度，可以觀察到乙醇在大鼠體內的代謝過程，其變化過程可反映藥物對酒精代謝的影響[6]。本實驗通過優化周鳳枝等氣質聯用儀方法檢測血液中乙醇濃度和ELISA法檢測血液中乙醇脫氫酶、乙醛脫氫酶的濃度[7～8]，結果表明，復方片仔癀肝寶能降低血液中乙醇的濃度，具有解酒作用。其雖然影響了血液中乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶濃度變化，但未提高血液中兩種酶的活性。因此，復方片仔癀肝寶加快乙醇在體內代謝有可能是通過其他的代謝途徑實現或者是乙醇在肝臟中代謝后復方片仔癀肝寶直接影響肝臟中的乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶釋放到血液中。因此，其解酒作用的機制還有待進一步實驗研究。

復方片仔癀肝寶解酒作用的發現對減少酒精對人體的傷害以及中成藥的創新應用有重要意義。到底其何種成分起解酒作用以及解酒機制如何，值得進一步深入研究，為臨床應用提供實驗數據。

[1]韓桂玲,楊海英.酒精的代謝與飲酒對人體的影響[J].山西醫藥雜志,2012,41(22):1150-1151

[2]徐燕琴,時昭紅,馮云霞,等.單味鮮葛花汁對急性酒精中毒大鼠乙醇代謝的影響[J].中西醫結合肝病雜志,2012,22(1):38-40

[3]黃進明,趙錦燕,萬蕓,等.復方片仔癀肝寶對急性肝損傷的保護作用研究[J].世界中西醫結合雜志,2015,10(9):1216-1218

[4]田禎祥.酒精的代謝及與相關疾病的特殊劑量關系[J].棗莊學院學報,2014,31(2):140-144

[5]Sridhar D.Health policy:Regulate alcohol for global health[J].Nature, 2012,482(7385):302

[6]任發政,羅云波,蔣菁莉.枳椇子影響乙醇代謝機理研究[J].食品工業科技,2002,23(12):58-60

[7]周枝鳳,陳凌云,沈梅,等.自動頂空-氣相色譜-質譜法測定血液中乙醇含量[J].理化檢驗(化學分冊),2010,46(1):22-24

[8]宋莎莎,路景濤,袁平凡,等.復方枳椇子制劑對小鼠酒精中毒的解救作用[J].中國新藥雜志,2013,22(21):2524-2528

[9]張行海.乙醇的代謝及毒性機理[J].湖北省衛生職工醫學院學報, 1998(2):50-52

Effects of Complex Prescription Pianzaihuang Ganbao on Alcohol Metabolism

LIN Shan1,2,CHEN Da-xin1,2,ZHAO Jin-yan1,2,ZENG Jian-wei1,2,HONG Zhen-feng1,2#
(1The Institute of Traditional Chinese and Western Medicine,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou350122; 2Fujian Provincial Laboratory of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine,Fuzhou350122)

Objective:To observed the anti-alcoholism effect of complex prescription Pianzaihuang Ganbao(GB).Methods:Male SD rats were divided into six groups randomly as follows:control group,model group,GB low dose group,GB middle dose group,GB high dose group and Haiwangjinzun group(HWJZ,as positive control).After oral medication,the rats were orally administration with alcohol,except for the rats in the control group.Blood was collected after 0.5,1,2,3,5 hours drinking alcohol separately.The content of alcohol in blood were determined by HS-GC-MS,the content of ethanol dehydrogenase and acetaldehyde dehydrogenase were determined by ELISA.Results:The content of alcohol,ethanol dehydrogenase and acetaldehyde dehydrogenase in blood of the GB groups were decreased(P＜0.05).Concusion:The GB can promote the metabolism of alcohol to accelerate the climination of ethanol.

Complex prescription Pianzaihuang Ganbao;Alcohol metabolism;Headspace gas chromatography-mass spectrometry

R285.5

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2016.11.001

2016-10-13）

2013年度陳可冀中西醫結合發展基金（編號：CJK2013015）；福建省教育廳A類科技項目（編號：JA14163）#通訊作者：洪振豐，E-mail：zfhong1953@163.com