仔豬流行性腹瀉發病診斷及感染毒株S基因特點分析

馬坤

（普萊柯生物工程股份有限公司，河南 洛陽 471000）

仔豬流行性腹瀉發病診斷及感染毒株S基因特點分析

馬坤

（普萊柯生物工程股份有限公司，河南 洛陽 471000）

2016年2月，江蘇某豬場發生仔豬病毒性腹瀉，臨床表現為拉黃色、灰色水樣糞便，個別嘔吐，嚴重者脫水死亡。年齡越小，癥狀越重，以產房仔豬最為嚴重，發病率和死亡率最高。筆者對發病場進行了流行病學調查，臨床解剖，實驗室病原檢測，陽性抗原S基因測序及變異特點分析，最終診斷此次疫病為新流行變異豬流行性腹瀉病毒（PEDV）毒株感染引起的仔豬流行性腹瀉。

豬流行性腹瀉；發病診斷；基因變異分析

豬流行性腹瀉，英文縮寫為PED（Porcine Epidemic Diarrhea），是由豬流行性腹瀉病毒引起的一種接觸性急性腸道傳染病。1971年首發于英國，20世紀80年代初我國陸續發生本病。臨床變化和癥狀與豬傳染性胃腸炎極為相似。以嘔吐、水樣腹瀉、脫水為特征，糞便顏色有黃色、黃綠色、灰色等，在我國多發生在每年12月份至翌年2月份，夏季也有嚴重發病案例。各種年齡的豬均易感，在本病暴發的豬場，一般先感染肥育豬，然后到種豬最后到哺乳仔豬的感染過程，但以哺乳仔豬的致死率最高，其中7日齡內仔豬感染后迅速脫水死亡，損失慘重。尤其2010年以來以變異型豬流行性腹瀉病毒引起的仔豬流行性腹瀉，給我國養豬業造成嚴重的經濟損失。

1 臨床癥狀

2016年2月初江蘇某規模豬場發生病毒性腹瀉，臨床癥狀為黃色、灰色水樣腹瀉，脫水，個別有嘔吐。年齡越小，癥狀越重，以產房仔豬最為嚴重，發病率和死亡率最高。少數病豬出現體溫升高1～2℃，精神沉郁，食欲減退或不食。

2 剖檢病變

共剖檢10頭發病豬，剖檢變化主要為脫水、消瘦、腸管膨脹擴張，腸壁變薄、透明、腸黏膜出血脫落，小腸內充滿大量黃色、紅色帶泡沫水樣液體，腸系膜淋巴結出血腫大（圖1—圖10）。

圖1 腸管膨脹，腸系膜淋巴結出血

圖2 腸黏膜脫落、腸系膜淋巴結出血

圖3 腸道出血、充滿紅色水樣液體

圖4 腸腔充滿黃色水樣液體

圖5 胃腸脹氣、腸系膜淋巴結出血

圖6 腸黏膜脫落、腸壁變薄

圖7 腸黏膜脫落、腸壁透明

圖8 腸道充滿黃色帶泡沫液體

圖9 腸壁變薄、充滿黃色水樣液體

圖10 腸道出血、膨脹

3 實驗室診斷

采集剖檢豬的腸內容物及送檢的發病豬糞便，用國家獸用藥品工程技術研究中心診斷實驗室自建的PCR方法檢測豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）和豬輪狀病毒（PoRV）。

4 實驗室檢測結果

病料分8個待檢樣品，其中剖檢大箱-保育豬腸內容物編號16106-1，大箱-小豬腸內容物編號16106-2，大箱-糞便編號為16106-3和16106-4，小箱-2份腸內容物編號16106-5，小箱-3份腸內容物編號16106-6，大箱-腸內容物/糞便編號16106-7，小箱-5份腸內容物編號16106-8。PEDV的PCR檢測結果：除16106-1外，其余均為陽性，如圖11；TGEV和PoRV的PCR檢測結果均為陰性，如圖12、圖13。

圖11 PEDV PCR產物凝膠電泳

圖12 TGEV PCR產物凝膠電泳

圖13 PoRV PCR產物凝膠電泳

根據以上實驗室檢測結果，結合流行病學特征、臨床癥狀和剖檢變化確診為PEDV感染引起的仔豬流行性腹瀉。

5 陽性樣品16106-3測序結果及分析

5.1 PEDV陽性樣品測序結果

測序獲得PEDV陽性樣品16106-3的S基因的部分序列，長為543 bp。

5.2 測序結果與已知PEDV分離株之間S基因序列同源性分析

將PEDV陽性樣品16106-3與已分離的PEDV代表毒株S基因核苷酸序列進行同源性比較（圖14）。結果顯示，16106-3與31株PEDV代表株的基因序列同源性均高于77.1%，但各序列之間存在少量突變、插入或缺失，導致同源性也不盡相同。目前，PEDV的商品化弱毒疫苗主要有我國的CV777株、日本的83P-5株和韓國的DR13株，P16106-3與其同源性分別是77.8%、77.1%和77.5%，而與近幾年流行毒株USA_MN、CH_FJND-3、CH_GD-A、TW_Yun lin-91、TW_Chiayi-32等的同源性均高于93.1%，這說明與近些年流行的美洲株、中國大陸株和臺灣株親緣關系較近，而與我國以前的地方流行株，如CH_S、JS-2004、JS2008等親緣關系較遠，均不高于77.1%。

圖14 不同PEDV毒株之間S基因核苷酸序列同源性分析

5.3 測序結果與已知PEDV分離株之間S基因核苷酸序列的進化樹分析

PEDV不同毒株S基因核苷酸序列進化樹分析發現（圖15），PEDV陽性樣品16106-3與中國流行株CH_FJND-3處于同一個分支。

圖15 不同PEDV毒株之間S基因核苷酸序列的進化樹分析結果

5.4 16106-3核苷酸序列與已知PEDV毒株全基因序列比對分析

PEDV陽性樣品16106-3核苷酸序列與其它毒株相應序列的比對分析結果顯示，PEDV陽性樣品16106-3的核苷酸序列在180 bp和340 bp處，分別有3 bp、12 bp的堿基缺失。此外16106-3與中國近些年（2011年以后）流行株CH_FJND-3、CH_GD-A、TW_Yunlin-91、TW_Chiayi-32等一樣，在470 bp處有6 bp堿基缺失，而與中國早前流行的CH_S、JS-2004、JS2008等毒株在200 bp和240 bp處分別有數量不等的堿基突變不同。推測PEDV陽性樣品16106-3可能屬于中國近些年引起仔豬病毒性腹瀉的流行毒株。

6 討論與分析

我國自2010年年底開始至今，新流行變異株引起的仔豬流行性腹瀉給我國養豬業造成很大損失，尤其是造成了產房仔豬大批死亡。因為新流行變異株在基因序列上發生變異導致其抗原性也發生了一定的改變，所以以CV777疫苗株為代表的早期疫苗的免疫效果不是很理想，因此盡早研發出新變異株的有效疫苗尤為重要。當前形勢下針對該疫病的防控，不光要采取增加免疫次數和免疫劑量等強化免疫方式，還要做好飼養管理和豬場生物安全等綜合防控措施。針對發病豬場，隔離、消毒，及時準確的診斷，無其它病原基礎上的母豬返飼，高效自家苗免疫，補液增能和控制繼發感染治療，病死豬的無害化處理，以及完善的綜合防控措施的實施為該病的控制發揮了重要作用。

（編輯：郭玉翠）

全球高血壓患者激增至11億

發展中國家增幅大 中國占五分之一強

【法新社巴黎11月16日電】根據周三公布的一份研究報告，全球飽受高血壓之苦的人數近40年來增加一倍，高達10億多，其中大多數人生活在發展中國家。

早在1975年，高血壓主要影響富裕國家。時至今日，情況發生了根本性的轉變，中低收入國家患高血壓人數的增長令人瞠目。

研究報告主要作者、倫敦帝國理工學院教授馬吉德·伊扎蒂指出，高血壓是腦血管意外和心血管疾病的主要風險因素，每年可造成約750萬人死亡。

【法新社巴黎11月16日電】研究人員周三稱，過去40年全球高血壓患者人數幾乎翻了一番，南亞和非洲是高血壓患者人數增加最多的地區。

研究報告主要作者伊扎蒂說：“從全球看，高血壓不再是西方世界或富國才有的健康問題。對世界上最貧困國家及其民眾來說，高血壓也是嚴重問題。”

據醫學雜志《柳葉刀》公布的這份報告稱，1975至2015年，成年高血壓患者人數從5.94億增至11億。

研究發現，澳大利亞、加拿大、德國和日本等高收入國家同期的高血壓患病率“明顯下降”。撒哈拉以南非洲國家、南亞國家和一些太平洋島國等中低收入國家的高血壓患者人數增幅最大。

2015年，成年高血壓患者中有一多半（約5.9億人）生活在東亞、東南亞和南亞地區，其中有2.26億人生活在中國，1.99億人生活在印度。

高血壓患者罹患心臟病、中風、腎病和癡呆癥的風險更高。

據世界衛生組織稱，血壓值升至或超過140/90即可認定為高血壓。該機構設定了一個目標：到2025年高血壓患者人數要減少25%。

但伊扎蒂說，如果不推行“有效政策”讓最貧困群體改善飲食—特別是要減少鹽攝入量并吃得起水果蔬菜，世界衛生組織制定的目標將“不太可能實現”。

研究報告使用的數據來自生活在200個國家的1 910萬名18歲及以上年齡受訪者。

（轉自參考消息[N]，2016-11-17）

S858.28

A

1002-1957(2016)06-0113-03

2016-10-10

馬 坤（1983-），男，安徽毫州人，獸醫師，執業獸醫師，碩士，主要從事豬疫苗銷售技術服務工作.E-mail：abcmakun306@163.com