西藏日喀則市豬鏈球菌病血清ELISA抗體檢測分析

四朗玉珍，劉忠艷，元振杰，拉巴次旦，吳金措姆，格桑卓嘎，班 旦

（1.西藏自治區農科院畜牧獸醫研究所，西藏 拉薩 850009；2.西藏大學農牧學院，西藏 林芝 860000）

西藏日喀則市豬鏈球菌病血清ELISA抗體檢測分析

四朗玉珍1，劉忠艷2，元振杰1，拉巴次旦1，吳金措姆1，格桑卓嘎1，班 旦1

（1.西藏自治區農科院畜牧獸醫研究所，西藏 拉薩 850009；2.西藏大學農牧學院，西藏 林芝 860000）

為監測日喀則市豬鏈球菌病的流行情況，采用ELISA方法對日喀則市的189份疑似發病豬血清進行了抗體水平檢測。結果表明，日喀則市豬鏈球菌病抗體總陽性率為42.86%，其中桑珠孜區為45.53%、吉隆縣為39.47%、亞東縣為38.46%。因此，在今后的豬病防控工作中，建議日喀則市以豬鏈球菌病為重點，采取綜合的防控措施加強防疫。

豬鏈球菌病；ELISA；抗體檢測

豬鏈球菌病（Swine streptococosis）是由多種致病性鏈球菌感染引起的一種人畜共患病，在世界范圍內其最主要的病原為豬鏈球菌2型[1-3]。豬鏈球菌病能引起豬的急性敗血癥和腦膜炎，慢性病例則表現為關節炎、心內膜炎及組織化膿性炎癥等[4-5]。

最近幾年，ELISA（酶聯免疫吸附試驗）方法被大量應用于豬鏈球菌2型的鑒定，對以菌體毒力因子作為包被抗原的間接ELISA方法的研究較多[6]。ELISA方法操作簡便、經濟、快速，且此方法在我國各級獸醫檢測部門已應用多年，適合推廣應用；同時，ELISA敏感性高、特異性好，在該病的診斷、檢疫及流行病學調查中具有一定的實用價值。通過ELISA抗體檢測試劑盒的使用，可以完成對日喀則市豬鏈球菌病的診斷和抗體水平的監測，對今后該病的防治及深入研究具有重要意義。

1 試驗材料

1.1 主要儀器

Thermo MK3酶標儀，HH.B11.420恒溫培養箱，微量振蕩器，雷杜RT-2100全自動洗板機，UPC-I-10T優普超純水制造儀，eppendorf微量移液器（單道0.1～2.5 μL、10～100 μL，12道30～300 μL），Thermo 1～100 mL電動移液器等。

1.2 主要試劑

豬鏈球菌抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯免疫法），購自深圳市綠詩源生物技術有限公司。

1.3 待檢血清

日喀則市共7個采樣點，無菌采集豬全血189份。

2 試驗方法

2.1 試驗時間與地點

2014年12月，分別在西藏自治區畜牧獸醫研究所和西藏大學農牧學院動物科學院開展本試驗。

2.2 樣品采集與處理

2.2.1 采樣地點與動物數量 在日喀則市桑珠孜區、亞東縣、吉隆縣3個縣（區）進行采樣。在采樣點，選擇疑似發病的家養豬進行樣品采集，具體采樣地區和數量見表1。

表1 日喀則地區豬血液采集情況

2.2.2 采樣方法 采用前腔靜脈采血，采血部位位于左右兩側的頸靜脈與腋靜脈至第1對肋骨間的胸骨柄匯合處。首先對豬采血部位進行剪毛，用5%碘酒消毒后再用75%的酒精消毒，待皮膚干燥后采血，整個采血過程均為無菌操作，采用未添加抗凝劑的普通采血管進行采集。

2.2.3 血清樣品制備 對于采集好的血液，在環境溫度較高的采樣地區，靜置于室溫6～8 h；在環境溫度較低的采樣地區，于37℃培養6～8 h。待血清析出后再于3 000 r/min離心5～10 min，無菌操作將血清分離分裝于1.5 mL已滅菌的離心管內，-20℃保存待檢。

2.3 血清ELISA抗體檢測

（1）試驗準備。分別將待檢血清和檢測試劑盒從冰箱內取出置于室溫預熱，待血清完全溶化后，用混樣儀將血清充分混合均勻。洗滌液和稀釋液按照檢測試劑盒說明書要求配好備用。

（2）加樣。根據樣本數量，取所需板條。每板設陰、陽性各2孔，分別加入陰、陽性對照血清100μL。其余孔加入99 μL樣本稀釋液，設2孔為空白對照，加入已滅菌的超純水；其它為樣品孔加入1 μL樣品。

（3）溫育。加樣后，蓋板膜，豬鏈球菌病檢測反應板置于37℃溫育30 min。

（4）洗板。甩去孔內液體，按照說明書要求設定好程序進行洗滌。

（5）加酶。洗滌完成后，拍干凈孔內剩余液體，每孔加酶標記物100 μL。

（6）溫育。檢測反應板置于37℃溫育30 min。

（7）洗板。甩去孔內液體，按照說明書要求設定好程序進行洗滌。

（8）顯色。每孔加顯色劑A、B各50 μL，振蕩混勻，檢測反應板置于37℃避光反應15 min。

（9）終止。顯色完成后，每孔加終止液50 μL，充分振蕩混勻，終止后即讀數。

（10）讀數。豬鏈球菌病抗體檢測反應板于450 nm/630 nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。2.4 結果判定

根據試劑盒說明書判斷標準要求，當樣品OD值≥0.35時判為陽性，樣品OD值＜0.3時判為陰性，當0.3≤OD值＜0.35時為可疑。

3 結果

日喀則市共檢測豬血清樣品189份，所檢測的豬鏈球菌病抗體陽性率為42.86%，分布于桑珠孜區（45.53%）、吉隆縣（39.47%）、亞東縣（38.46%）。具體陽性數分布情況詳見表2。

表2 日喀則市豬鏈球菌病血清ELISA抗體檢測陽性數

4 討論

近年來，西藏自治區的養豬業在逐年發展，養殖量也在逐年穩步上升，所以做好豬病防控工作，是促進本地區養殖業健康快速發展的重中之重。通過這次對西藏日喀則市豬鏈球菌病血清ELISA抗體的檢測發現，豬鏈球菌病給養豬業造成了重大的經濟損失，今后在日喀則市要加強對豬鏈球菌病的防疫，并采取綜合防控措施。

[1]Arends J P,Zanen H C.Meningitis caused by Streptococcus suis in humans[J].Rev Infect Dis,1988,10(1):131-137.

[2]Clifton-hadley F A.Streptococcus suis type 2 infections[J].Br Vet J,1983,139(1):1-5.

[3]Vecht U,Van Leengoed L A,Verheijen E R.Streptococcus suis infection in pigs in the Netherlands(partΙΙ)[J].Vet Q,1985,7(4): 315-321.

[4]Tarradas C,Luque I,De ANDRS D,et al.Epidemiological relationship of human and swine Streptococcus suis isolates[J].J Vet Med B,2001,48(5):347-355.

[5]Staats J J,Feder I,Okwumabua O,et al.Streptococcus suis:past and pres[J].Vet Res Commun,1997,21(6):381-407.

[6]付建，王敏蘭.豬鏈球菌病的研究進展[J].畜牧與飼料科學，2012，33（4）：101-103.

（編輯：柳青）

維生素B2成為癌癥殺手

【《俄羅斯報》10月13日報道】題：維生素B2成為癌癥殺手

俄羅斯科學家用維生素B2輔助治療癌癥。這種創新療法的實驗室效果非常出色：腫瘤縮小90%。研究人員接下來打算與俄布洛欣腫瘤科研中心的醫學家合作，展開該維生素療法的臨床試驗。

人們早就知道，大劑量的維生素B2能消滅癌細胞。但該如何利用這一點的問題遲遲無法解決。

維生素B2生效的原理是進入機體后會產生活性氧和其他幾種能殺死癌細胞的化合物。但實現這一點并不簡單：維生素B2在發揮作用時需要紫外線或藍光的照射，而兩者都很難照進人體內部。

俄研究人員找到了一個巧妙的解決方法。他們與澳大利亞和法國同行合作，在移植了人體癌變組織的小白鼠身上進行試驗。首先將攜帶大量維生素B2的納米粒子放入小白鼠體內，然后用特殊的激光照射這些與眾不同的納米粒子。它們能將對人體無害且能深入人體內部的紅外線轉化成紫外線。有了紫外線，維生素B2被“激活”了，開始消滅癌細胞。

這次試驗為期50天，在此期間定時用激光照射受試小白鼠，取得了令人欣慰的成果。

俄羅斯科學院晶體學和光子學科研中心專家葉夫根尼·海杜科夫說：“目前試驗對象只是移植了人體癌變組織的小白鼠。放入納米粒子一次就能阻斷癌細胞增長，并將腫瘤體積縮小90%。”

俄科學家將上述研究成果發表在權威的英國《科學報告》雜志上。

（轉自參考消息[N]，2016-10-14）

S858.285.1

A

1002-1957(2016)06-0105-02

2016-06-30

四朗玉珍（1980-），女，藏族，西藏林芝人，助理研究員，碩士，主要從事動物疫病防治研究.E-mail：sonamyudren@aliyun.com