gE抗體陽性仔豬免疫偽狂犬病活疫苗后的抗體變化規律

周遠成，王 翱，蔡雨函，李 碧，卓秀萍，牛 婷，鐘 穎

（1.畜禽生物制品四川省重點實驗室，四川 成都 610299；2.四川省畜牧科學研究院，四川 成都 610065；3.四川華神獸用生物制品有限公司四川省動物生物制品工程技術研究中心，四川 成都 610299）

gE抗體陽性仔豬免疫偽狂犬病活疫苗后的抗體變化規律

周遠成1，2，3，王 翱1，3，蔡雨函1，3，李 碧1，3，卓秀萍1，3，牛 婷1，3，鐘 穎1，3

（1.畜禽生物制品四川省重點實驗室，四川 成都 610299；2.四川省畜牧科學研究院，四川 成都 610065；3.四川華神獸用生物制品有限公司四川省動物生物制品工程技術研究中心，四川 成都 610299）

偽狂犬病（Pseudorabies）最早發生于1813年，1894年瑞士首次使用“偽狂犬病”這個詞命名該病。1902年Aujeszky通過研究發現該病病原為病毒，此后研究人員證實該病病原為皰疹病毒，將其命名為豬偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV），也稱豬皰疹病毒1型[1]。在我國，1947年時劉永純首次在上海分離到PRV，1956年國營寶泉嶺農場暴發豬偽狂犬病，1957年四川華陽出現此病，此后PRV一直在我國流行。近年來豬偽狂犬病呈現新的流行趨勢，新流行的PRV致病力強于經典流行毒株，通過分子流行病學對其主要致病力和免疫保護相關基因進行分析，結果發現新流行的PRV毒株具有多個新的變異位點[2-5]。變異偽狂犬病病毒的流行給我國生豬養殖業造成巨大的經濟損失。

疫苗免疫是防止傳染性疾病的最有效手段。目前國內廣泛使用的偽狂犬病疫苗主要有弱毒活疫苗SA215株、HB98株、HB2000株、Barha（或Barha K61株）、Bucharest株以及鄂A株和閩A株滅活疫苗。《國家中長期動物疫病防治規劃（2012—2020年）》將豬偽狂犬病列為重點疫病，2020年全國所有的種豬場需要達到凈化標準。在此背景下本試驗開展了相關研究工作，測試了gE抗體陽性仔豬免疫偽狂犬病活疫苗后的抗體變化趨勢，為偽狂犬病病毒免疫、凈化和gE陰性仔豬的培育提供了重要的試驗數據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

28日齡已斷奶仔豬（長白、大約克、杜洛克三元雜種仔豬）30頭購于四川某豬場，飼養于畜禽生物制品四川省重點實驗室試驗動物房（四川省成都市雙流區黃甲鎮），整個試驗期間維持圈舍溫度為25℃，自由采食、飲水。試驗時間為2016年6—9月。

1.2 抗體檢測試劑盒

PRV gE抗體檢測試劑盒和PRV gB抗體檢測試劑盒均購于IDEXX公司。

1.3 試驗用疫苗和稀釋液

豬偽狂犬病活疫苗（撲偽優）購于四川華神獸用生物制品有限公司，對照疫苗購于國內某廠商，IM101疫苗稀釋液由畜禽生物制品四川省重點實驗室制備提供。

1.4 試驗方法

1.4.1 試驗動物篩選 采集gE抗體陽性的種豬所產斷奶仔豬血清，使用gE抗體ELISA檢測試劑盒測試所有待檢血清的gE抗體，選擇gE抗體陽性的仔豬30頭，開展本試驗。

1.4.2 分組和免疫 將30頭仔豬隨機分為3組，每組10頭，分別標記為1、2、3組，其中第1組為撲偽優組，免疫豬偽狂犬病活疫苗SA215株（使用IM101稀釋液稀釋該疫苗）；第2組對照疫苗組，免疫對照國產疫苗（使用疫苗配套稀釋液稀釋該疫苗）；第3組為空白對照組，僅注射IM101稀釋液。免疫方式均為肌肉注射，免疫劑量均為2 mL/頭。

1.4.3 抗體檢測和數據分析 分別在免疫時（4周齡）、免疫后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周采集血清，按照偽狂犬病病毒gE抗體檢測試劑盒和gB抗體檢測試劑盒說明書進行gB和gE抗體的檢測并計算相應的S/N值。如果S/N≤0.6判定為陽性，0.6＜S/N≤0.7判定為可疑，應重新檢測，S/N＞0.7判定為陰性。根據判定結果計算不同采血時間點的抗體陽性率。

2 試驗結果

2.1 免疫后gB抗體變化規律

本次試驗選擇的均為gE陽性仔豬，免疫前測定所有試驗豬gB抗體也均為陽性。4周齡時免疫，然后每周采集血清使用ELISA檢測試劑盒測定所有仔豬的血清抗體。結果發現，在免疫后1～4周對照疫苗組和空白對照組S/N輕微升高，免疫4周以后迅速升高，在免疫后7周時全部升高至0.7以上，此時對照疫苗組和空白對照組所有豬gB抗體均變為陰性。隨著S/N的升高，對照疫苗組和空白對照組gB抗體陽性率持續下降，在免疫后7周（10周齡）時，對照疫苗組gB抗體陽性率下降至60%，空白對照組下降至50%。對照疫苗組于免疫后8周gB抗體陽性率變為0，而空白對照組則在免疫后9周時降至0。而撲偽優組gB抗體S/N值在整個免疫后10周內無較大波動，S/N值平均值均＜0.2，一直維持在較低水平，gB抗體陽性率一直維持為100%陽性。gB抗體測定結果見圖1、圖2。

圖1 仔豬免疫后gB ELISA S/N值變化趨勢

圖2 仔豬免疫后gB抗體陽性率變化趨勢

2.2 免疫后gE抗體變化規律

本試驗中所選擇的gE抗體陽性仔豬在4周齡時免疫偽狂犬病病毒活疫苗，免疫后不同時間點測定gE抗體，結果發現，所有試驗組免疫后gE抗體的S/N值均隨著時間的增加逐漸增大。撲偽優組和空白對照組在免疫后3周時S/N值平均值上升至0.6以上，而對照疫苗組則在免疫后5周上升至0.6以上。gE抗體陽性率隨著仔豬日齡的增加逐漸下降，對照疫苗組在免疫后5周gE陽性率變為0，所有仔豬gE抗體轉陰，而撲偽優組和空白對照組則在免疫后6周全部轉陰。3個試驗組中gE抗體S/N值和gE抗體陽性率雖然在轉陰時間點上有細微差異，但是其變化趨勢一致。gE抗體測定分析結果見圖3、圖4。

圖3 仔豬免疫后gE抗體S/N值變化趨勢

圖4 仔豬免疫后gE抗體陽性率變化趨勢

3 討論

2011年前后全國各地均有偽狂犬病暴發的報道，不同豬場由于豬群群體免疫力的差異，呈現不同的臨床癥狀，但所有豬場均出現種豬群或肥育豬群gE抗體陽性率突然升高。基于當前我國偽狂犬病病毒的流行特征和流行趨勢，為了解豬狂犬病病毒gE抗體陽性母豬所產仔豬的免疫情況，本試驗使用gE抗體陽性種豬所產仔豬進行疫苗免疫試驗，測定了gE抗體陽性仔豬免疫偽狂犬病活疫苗后的抗體變化趨勢。結果表明，偽狂犬病病毒gE抗體陽性母豬分娩的仔豬可以通過初乳獲得母源的gE抗體，但隨著日齡的增加gE抗體陽性率會逐步下降，在一定條件下gE抗體可以完全轉陰。該試驗同時也間接證實，gE抗體陽性母豬在分娩期和哺乳期不會排毒感染初生仔豬（不同豬群的不同感染狀態下可能存在差異），初生仔豬的gE抗體完全來源于母乳。

在本試驗中，除了測定gE抗體的變化趨勢外，還進行了gB抗體的測定。已有數據表明，gE抗體陽性豬群中種豬的中和抗體效價顯著高于gE陰性仔豬，因此在哺乳期，gE抗體陽性母豬所產仔豬的母源抗體會高于gE陰性仔豬。如果免疫時間選擇不合理或者選擇的疫苗不能避免母源抗體的干擾，使用肌肉注射免疫后進入仔豬體內的病毒會完全被母源抗體中和而不能發揮作用。本試驗測試結果表明，該豬場仔豬首次肌肉注射免疫應在10周齡時進行。但不同豬場由于種豬的免疫差異存在著不同的規律，養豬從業者需要根據豬場的實際情況調整具體的免疫程序方能達到有效免疫，防止偽狂犬病的暴發。

[1]Barbara E Straw,Jeffery J Zimmerman,Sylvie D'Allaire,等主編.豬病學[M].第9版.趙德明，張仲秋，沈建忠，譯.北京：中國農業大學出版社，2008：465-476.

[2]An T Q,Peng J M,Tian Z J,et al.EmergInfectDis[J],2013,19(11): 1749-1755.

[3]Yu X,Zhou Z,Hu D,et al.Emerg Infect Dis[J],2013,19(11): 1749-1755.

[4]Luo Y,Li N,Cong X,et al.Vet Microbiol[J],2014,174(1-2): 107-115.

[5]Wang Y,Qiao S,Li X,et al.Virus Genes[J],2015,50(3):401-409.

[6]陳陸，郭萬柱，徐志文，等.動物醫學進展[J],2005（5）：52-56.

（編輯：郭玉翠）

S858.28

A

1002-1957(2016)06-0093-02

2016-09-20收稿，2016-10-08修回

四川省科技支撐計劃（2015NZ0105，2016RZ0081）；科技成果轉化項目（專項）（2014CC0056）

周遠成（1984-），男，四川金堂人，博士，主要從事動物傳染病和動物生物制品研究工作.E-mail：abtczyc＠163.com