25型藍舌病病毒VP2蛋白原核表達及其單克隆抗體制備

李一經(jīng)，李佳璇，武嘯，臧明鑫，謝雙羽，姜艷平，崔文，唐麗杰

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030）

25型藍舌病病毒VP2蛋白原核表達及其單克隆抗體制備

李一經(jīng)，李佳璇，武嘯，臧明鑫，謝雙羽，姜艷平，崔文，唐麗杰

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，哈爾濱 150030）

藍舌病（Bluetongue，BT）為藍舌病毒（Bluetongue virus，BTV）引起，以高熱、白細胞減少、黏膜潰瘍性炎癥等為主要癥狀的反芻動物傳染病。試驗將25型BTV VP2蛋白分段基因分別克隆至pMAL-c5x載體，以終濃度1.0 mmol·L-1IPTG為誘導(dǎo)劑，在大腸桿菌中分別誘導(dǎo)表達帶麥芽糖結(jié)合蛋白（MBP）標簽的融合蛋白MBPVP2-A、MBPVP2-B、MBPVP2-C。分別以帶His標簽的重組VP2分段蛋白VP2-A、VP2-B、VP2-C為免疫原，以試驗表達VP2分段蛋白MBPVP2-A、MBPVP2-B、MBPVP2-C為抗原篩選雜交瘤細胞。通過細胞融合篩選出6株穩(wěn)定分泌單克隆抗體的交雜細瘤胞，其中4株McAb亞型鑒定為IgG；2株McAb亞型鑒定為IgM。試驗為建立25型BTV血清學(xué)鑒別診斷方法奠定基礎(chǔ)。

藍舌病病毒；VP2；原核表達；單克隆抗體

藍舌病（Bluetongue，BT）由藍舌病病毒（Bluetongue virus，BTV）引起，屬非接觸性傳染病，主要感染綿羊和牛等反芻動物，主要癥狀為高熱、白細胞減少、黏膜潰瘍性炎癥等[1-2]。BTV最早發(fā)現(xiàn)于1876年，呈世界性分布。目前已從非洲、歐洲、亞洲、北美、南美和大洋洲國家分離到BTV，分布范圍擴大，危害嚴重。反芻動物感染BTV后平均死亡率為35%，其中易感綿羊死亡率高達80%。世界動物衛(wèi)生組織將BT規(guī)定為需上報疾病，在我國為一類動物疾病。

BTV為呼腸病毒科（Reoviridae）、環(huán)狀病毒屬（Orbivirus）、藍舌病病毒亞群，是典型環(huán)狀病毒屬病毒。BTV粒子為圓形、無囊膜的二十面立體對稱結(jié)構(gòu)，核衣殼直徑為53～60 nm，其衣殼外存在一層細絨毛狀外層，使總直徑提高到70～80 nm。……