基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜快速鑒定蠟樣芽胞桿菌研究與應(yīng)用

江連洲，曹飛揚(yáng)，陳穎，王娉，趙曉美

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，哈爾濱150030；2.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院農(nóng)產(chǎn)品安全研究中心，北京 100176）

基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜快速鑒定蠟樣芽胞桿菌研究與應(yīng)用

江連洲1，曹飛揚(yáng)1，陳穎2，王娉2，趙曉美2

（1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，哈爾濱150030；2.中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院農(nóng)產(chǎn)品安全研究中心，北京 100176）

建立基于基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）技術(shù)針對食源性蠟樣芽胞桿菌快速鑒定方法。以蠟樣芽胞桿菌模式菌株為研究對象，優(yōu)化該菌樣品處理方法，并選取17株蠟樣芽胞桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株補(bǔ)充MALDI-TOF-MS數(shù)據(jù)庫，探討方法靈敏度、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。結(jié)果表明，蠟樣芽胞桿菌最佳樣品處理方法是甲酸提取法，數(shù)據(jù)庫補(bǔ)充可提高該菌鑒定可信度，MALDI-TOF-MS鑒定方法準(zhǔn)確度高、穩(wěn)定性好，靈敏度為104cfu并通過聚類分析分型。研究確定的MALDI-TOF-MS鑒定方法準(zhǔn)確快速，可為食源性蠟樣芽胞桿菌快速鑒定和分型提供技術(shù)支持。

蠟樣芽胞桿菌；MALDI-TOF-MS；鑒定；快速；準(zhǔn)確

蠟樣芽胞桿菌（Bacillus cereus）是革蘭氏陽性菌，為芽胞桿菌屬，兼性需氧。蠟樣芽胞桿菌在水、空氣、土壤中廣泛存在，食品中易檢出[1-4]。感染該菌后可導(dǎo)致胃腸功能紊亂、各種局部或全身性感染，如壞死性腸炎、肝功能衰竭、菌血癥和腦膜炎[5-8]。

目前，蠟樣芽胞桿菌鑒定以傳統(tǒng)生化鑒定為主，該方法操作繁瑣、耗時(shí)長、鑒定結(jié)果滯后[9]，分子鑒定方法有PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增、16S rRNA測序技術(shù)等[10-13]。但PCR鑒定方法無統(tǒng)一目的基因，不易實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化[14]；環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)靈敏度較高，易被污染，產(chǎn)生假陽性結(jié)果；……