半枝蓮多糖抗肝癌作用的研究

王 瑩

通遼市職業(yè)學院藥學系 內蒙古自治區(qū)通遼市 028000

半枝蓮多糖抗肝癌作用的研究

王 瑩

通遼市職業(yè)學院藥學系 內蒙古自治區(qū)通遼市 028000

目的：探討半枝蓮多糖抗肝癌作用,觀察其對H22荷瘤小鼠的增效減毒作用及對肝癌細胞Hep G2增殖的抑制作用。方法：將肝癌H22荷瘤小鼠，24h后隨機分組，連續(xù)給藥8天，剝離腫瘤，計算抑瘤率,并檢測半枝蓮多糖對人肝癌細胞Hep G2增殖的影響。結果：半枝蓮多糖與環(huán)磷酰胺聯(lián)用對H22荷瘤小鼠有增效減毒的作用，其對肝癌細胞Hep G2增殖的抑制作用顯著。結論：初步表明半枝蓮多糖具有抗肝癌的作用。

半枝蓮多糖；抑瘤率；增效減毒

半枝蓮(Scutellaria barbata D. Don)屬于唇形科植物干燥全草，性寒。近年來半枝蓮的研究多集中在抗腫瘤方面,臨床上常用于肝癌、肺癌、胃癌等多種癌癥防治，但具體的抗癌機制尚不明確[1]。本研究觀察了半枝蓮多糖對H22荷瘤小鼠增效減毒作用和對肝癌細胞Hep G2抑瘤率的影響，以探討半枝蓮多糖抗肝癌作用初步機制，為臨床應用提供實驗依據(jù)。

1 材料

隨著藥物劑量的增加抑制腫瘤作用越明顯。

1.1 實驗動物

健康昆明種小鼠，購自內蒙古民族大學實驗動物中心；肝癌細胞株H22、肝癌細胞Hep G2由中科院上海細胞生物研究所細胞庫提供。

1.2 儀器與試劑

半枝蓮飲片由北京同仁堂藥店提供；胎牛血清(FBS)、RPMI 1640培養(yǎng)基(美國GIBCO公司),細胞培養(yǎng)板(美國Costar公司),血球基數(shù)儀(上海精密儀器廠)。

2 實驗方法與結果

2.1 半枝蓮多糖對腫瘤小鼠的腫瘤抑制作用

取正常小鼠30只，皮下接種H22腫瘤細胞，48h后隨機分成5組，分別為高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性對照組和陰性對照，高、中、低劑量組給不同劑量的半枝蓮多糖（分別為85.84 mg.kg-1、28.32 mg.kg-1、10.54 mg.kg-1）和環(huán)磷酰胺（15 mg.kg-1），陽性對照組給環(huán)磷酰胺（15 mg.kg-1），陰性對照組給等容量的生理鹽水，給藥第7天，稱重后，頸椎脫臼處死小鼠，剝離腫瘤計算抑瘤率。

2.2 半枝蓮多糖對肝腫瘤細胞增殖的抑制作用

將培養(yǎng)2-3天生長狀態(tài)良好的人肝癌HepG2細胞，清洗、消化，計數(shù)，調整細胞濃度為5×104個/mL，制成單細胞混懸液，調整細胞濃度，均勻接種細胞于96孔細胞培養(yǎng)板，每孔加細胞懸液100μL。將培養(yǎng)板放入CO2培養(yǎng)箱內培養(yǎng)12h。高、中、低劑量組分別加入不同濃度的半枝蓮多糖100μL，陰性對照組加入等量培養(yǎng)基，每個濃度平行接種5個復孔，繼續(xù)培養(yǎng)48h。每孔加入20μL MTT溶液，繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)。棄去上清液，每孔加入150μL DMSO，震蕩15 min，用酶聯(lián)檢測免疫儀于492nm檢測各孔的吸光值（OD值），取5孔的平均值，計算抑瘤率[2]。

細胞生長抑制率(IR%)=(1-OD實驗組/ OD對照組)×100%

3 實驗結果

3.1 半枝蓮多糖對H22荷瘤小鼠增效減毒作用

由表1可知，與陰性對照組比較，高、中、低劑量組和陽性對照組均能明顯減小H22荷瘤小鼠的瘤重。高、中、低劑量組的腫瘤抑制率均比陽性對照組有所升高，且高劑量組效果尤為明顯。結果表明半枝蓮多糖對H22荷瘤小鼠的腫瘤有抑制作用，與環(huán)磷酰胺合用有增效減毒作用。

表1：H22荷瘤小鼠抑瘤作用（）

表1：H22荷瘤小鼠抑瘤作用（）

組別 瘤重 抑瘤率陰性對照組0.94±0.12 CTX組0.51±0.10**45.74高劑量組0.31±0.54**67.02中劑量組0.37±0.07**60.64低劑量組0.43±0.12**54.26

3.2 半枝蓮多糖對Hep G2肝癌細胞抑制作用

表2顯示，半枝蓮多糖高、中、低劑量組抑瘤率分別為45.96%、33.36%、30.03%，與陰性對照組比較，半枝蓮多糖低、中劑量組抗肝腫瘤作用明顯，而高劑量組具有非常顯著性差異。由此表明，高、中、低劑量半枝蓮多糖對人肝癌Hep G2細胞的生長增值具有顯著的抑制作用，且

表2：Hep G2肝癌細胞增殖的影響（）

表2：Hep G2肝癌細胞增殖的影響（）

組別 濃度（ug.mL-1）OD492抑制率（%）陰性對照組01.175±0.171 2000.635±0.20445.96半枝蓮多糖組1000.783±0.15233.36 500.838±0.06930.03

4 討論與小結

半枝蓮在臨床應用比較廣泛，主要化學成分的研究比較充分，但對半枝蓮單味藥的抗腫瘤作用有效成分及作用機制的研究尚不明確。本文對半枝蓮多糖的抗肝癌作用進行了研究，實驗表明半枝蓮多糖在50-200μg.mL-1濃度下對肝癌Hep G2細胞增殖有明顯的抑制作用，而且隨著藥物濃度的增加對腫瘤抑制率增大。半枝蓮多糖對H22荷瘤小鼠也有較好的抗腫瘤作用，與環(huán)磷酰胺合用抑制腫瘤作用明顯增強，且高劑量組的抑瘤率較好，與陰性對照組平均瘤重比較有明顯統(tǒng)計學意義。因此，半枝蓮多糖對抗肝癌藥物有增效減毒的作用。以上實驗初步表明，半枝蓮多糖具有抗肝癌的作用,為今后半枝蓮抗腫瘤機制研究提供了理論依據(jù)和應用價值。

[1]顧琳娜,顧昊.天然抗腫瘤藥物篩選方法的研究進展.醫(yī)藥導報[J].2009,28(04):496-497.

[2]王萍.半枝蓮抗癌成分研究.山東師范大學[J].2010,28(04):496-497.

王瑩，現(xiàn)為內蒙古通遼職業(yè)學院講師，藥物分析，遼寧中醫(yī)藥大學碩士畢業(yè)。

●文章為省級課題的內容。