丹參注射液對疊氮化鈉誘導的心肌細胞損傷的保護作用

胡 君丁玉娟熊存全周紅成

1鹽城衛生職業技術學院 江蘇省鹽城市 224005 2鹽城市第三人民醫院 江蘇省鹽城市 224001

丹參注射液對疊氮化鈉誘導的心肌細胞損傷的保護作用

胡 君1丁玉娟2熊存全1周紅成1

1鹽城衛生職業技術學院 江蘇省鹽城市 224005 2鹽城市第三人民醫院 江蘇省鹽城市 224001

目的：研究丹參注射液對疊氮化鈉損傷心肌細胞H9C2的保護作用。方法：建立疊氮化鈉誘導心肌細胞H9C2氧化損傷的模型。將H9C2細胞分為空白對照組、疊氮化鈉模型組，疊氮化鈉+丹參酮ⅡA低劑量組（50μg/ml），疊氮化鈉+丹參酮ⅡA高劑量組（200μg/ml），CCK8法檢測心肌細胞活性的變化。結果：丹參注射液能顯著減輕由疊氮化鈉誘導的H9C2細胞損傷，提高心肌細胞的活性。結論：丹參注射液可保護心肌細胞H9C2免受氧化損傷。

丹參注射液；疊氮化鈉；心肌細胞；細胞活性

在缺血性心臟病的治療過程中，冠狀動脈內溶栓及冠脈搭橋手術等被廣泛使用，但同時心肌缺血再灌注損傷引起的問題也日益突出[1-2]。研究發現，缺血再灌注時產生大量的氧自由基（活性氧），誘導心肌細胞發生氧化損傷[3]。傳統中藥丹參是一種天然抗氧化劑，具有擴張血管、改善微循環、調節內分泌等作用[4]。本實驗用疊氮化鈉制作心肌細胞的氧化損傷模型，觀察不同濃度的丹參注射液對疊氮化鈉誘導的心肌氧化損傷的保護作用，為研究丹參的臨床藥理作用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 主要試劑

L-DMEM、胎牛血清、胰蛋白酶、疊氮化鈉、注射用丹參、CCK8試劑盒。

1.2 實驗方法

1.2.1 H9C2細胞培養

37℃、5%CO2條件下，H9C2心肌細胞培養在含10%胎牛血清的L-DMEM培養基中，每2d換液一次。當細胞生長至融合度達90%時，0.25%胰酶消化傳代，調整細胞密度為5×104/ml，接種到96孔細胞培養板上。

1.2.2 丹參注射液處理

將接種至96孔板上的H9C2心肌細胞隨機分為4組：空白對照組、疊氮化鈉模型組（50μmol/L疊氮化鈉）、丹參注射液低劑量組、高劑量組（分別加入50μg/ ml、200μg/ml的丹參注射液預處理細胞1 h，再加入50μmol/L疊氮化鈉孵育6h）。

1.2.3 CCK8檢測細胞的存活率

向處理后的H9C2細胞，每孔加入10 μl CCK8溶液，放置到培養箱中培養2h，酶標儀測定450 nm處的吸光度值。細胞活性的計算公式：細胞活性=[（實驗孔OD值-空白孔OD值）/（對照孔OD值-空白孔OD值）]×100%。

1.2.4 統計分析

應用SPSS16.0進行數據分析，p<0.05具有統計學差異。

2 結果

與對照組相比，疊氮化鈉模型組細胞活性明顯下降，具有統計學意義；與模型組相比，200μg/ml丹參注射液處理后，細胞活性顯著增加，但50μg/ml丹參注射液對H9C2的保護作用不明顯，與模型組相比沒有統計學意義。

3 討論

氧化應激介導的心肌細胞凋亡是缺血再灌注損傷的主要機制[5]。疊氮化鈉，線粒體有氧呼吸鏈中細胞色素c氧化酶的特異性抑制劑，可誘導氧化磷酸化和細胞呼吸異常，常被用做氧化應激下心肌細胞損傷模型的建立。丹參是傳統中藥，具有活血通脈、消炎止痛之功效，包含脂溶性和水溶性兩部分。有文獻報導丹參制劑能顯著提高心肌細胞中超氧化物歧化酶活性，降低乳酸脫氫酶和丙二醛含量，降低細胞中脂質過氧化物濃度，達到清除氧自由基的作用[6]。本實驗用不同濃度的丹參注射液對心肌細胞進行預處理發現，200μg/ml丹參注射液可顯著改善由疊氮化鈉誘導的心肌細胞損傷，提高受損心肌細胞的活性，提示丹參注射液可減少氧化應激誘導的細胞死亡，維持心肌細胞活力，從而最終改善心功能狀態。

[1]侯少科,郝麗娜,李建輝等.聯合應用貝那普利與丙泊酚對體外循環下冠脈搭橋術患者心肌缺血再灌注損傷的影響[J].中國老年學雜志.2015;35:5508-5510.

[2]Yao T,Ying X,Zhao Y,et al. Vitamin D receptor activation protects against myocardial reperfusion injury through inhibition of apoptosis and modulation of autophagy[J].Antioxid Redox Signal.2015;22(08):633-50.

[3]Bagheri F,Khori V,Alizadeh AM, et al.Reactive oxygen speciesmediated cardiac-reperfusion injury:Mechanisms and therapies [J].Life Sci.2016;165:43-55.

[4]Liu Y,Huang Y,Zhao C,et al. Salvia miltiorrhiza injection on pulmonary heart disease:a systematic review and metaanalysis [J].Am J Chin Med.2014; 42(06):1315-31.