腹瀉患者艱難梭菌檢測及分析

嚴(yán)鳳娟

腹瀉患者艱難梭菌檢測及分析

嚴(yán)鳳娟

目的 觀察腹瀉患者艱難梭菌檢測情況。方法 收集我院348例腹瀉患者的糞便標(biāo)本，并選擇K-B法檢測艱難梭菌耐藥性，觀察檢測結(jié)果。結(jié)果 348例糞便標(biāo)本，18例（5．17%）細(xì)菌培養(yǎng)為陽性，其中77．78%（14/18）為住院患者；61．11%（11/18）為60歲以上患者；艱難梭菌對甲硝唑、阿莫西林/克拉維酸及哌拉西林等藥物敏感性較好。結(jié)論 艱難梭菌對常規(guī)抗菌藥物敏感性較好，其感染主要為院內(nèi)感染。

腹瀉；艱難梭菌；檢測

艱難梭菌又稱難辨梭菌、難辨棱狀芽孢桿菌。艱難梭菌（CD）是院內(nèi)感染性腹瀉、偽膜性腸炎等疾病的重要致病菌。近年來，艱難梭菌感染發(fā)病率呈升高趨勢［1］，艱難梭菌感染臨床癥狀無典型性，因此在臨床診斷、治療方面存在較大困難，如何準(zhǔn)確診斷艱難梭菌感染成為人們研究的熱點(diǎn)。本研究收集348例腹瀉患者的糞便標(biāo)本，觀察艱難梭菌檢測情況。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

回顧性總結(jié)我院2015年3月～2016年3月收集的348例腹瀉患者的糞便標(biāo)本。篩選標(biāo)準(zhǔn)：（1）每天腹瀉頻次至少3次者；（2）性狀為稀便或水樣便。將標(biāo)本置入4℃冰箱中保存待檢。

1.2 方法

（1）細(xì)菌分離培養(yǎng)及鑒定：量取0.5 ml糞便富集芽胞，然后接種于艱難梭菌選擇（CCFA）肉湯中，并于37℃有氧條件下孵育1周；將標(biāo)本與無水乙醇等比例混合搖勻，于20℃～25℃條件下靜置60 min，離心并去除上清，將下層沉渣接種于艱難梭菌選擇培養(yǎng)基（培養(yǎng)基等來源于英國Oxoid公司）中，并將其放入35℃厭氧罐中培養(yǎng)2 d；通過菌落形態(tài)、氣味等方面實(shí)施初步判斷。將可疑菌落同時(shí)接種艱難梭菌培養(yǎng)基，分離培養(yǎng)厭氧菌，并及時(shí)使用無菌棉簽將其洗脫至20%脫脂牛奶與無菌水中，然后置于-70℃條件下低溫保存待檢：將標(biāo)本取出并經(jīng)鏡檢、耐氧試驗(yàn)等步驟依次進(jìn)行鑒定，采用山東鑫科XK型全自動(dòng)微生物鑒定儀鑒定細(xì)菌；（2）藥物敏感性試驗(yàn)選擇K-B法測定菌株耐藥性，判斷結(jié)果以CLSI/NCCLS法為準(zhǔn)；（3）抗菌藥物紙片：萬古霉素、克林霉素、莫西沙星、阿莫西林/克拉維酸、青霉素及哌拉西林/他唑巴坦紙片等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

使用SPSS 13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 艱難梭菌檢測結(jié)果分析研究

348例糞便標(biāo)本，其中18例細(xì)菌培養(yǎng)為陽性；18例陽性病例，其中11例黏液便、7例水樣便。每天腹瀉次數(shù)4～6次，且伴有發(fā)熱情況。血常規(guī)檢查發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞數(shù)目有所上升，C-反應(yīng)蛋白水平基本不變；大便潛血試驗(yàn)檢查結(jié)果顯示陽性；大便涂片試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)球/桿菌比例失調(diào)。

2.2 艱難梭菌耐藥性分析研究

經(jīng)藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，除克林霉素耐藥率（88.89%，16/18）較高外，其它抗菌藥物耐藥率均較低：萬古霉素（16.67%，3/18）、甲硝唑（11.11%，2/18）、氨芐西林（16.67%，3/18）、莫西沙星（22.22%，4/18）、美羅培南（5.56%，1/18）、阿莫西林/克拉維酸（11.11%，2/18）、哌拉西林（5.56%，1/18）、哌拉西林/他唑巴坦（5.56%，1/18）等，上述結(jié)果提示臨床應(yīng)暫停使用克林霉素，其它藥物可作為治療艱難梭菌的首選藥物，尤其是哌拉西林與美羅培南，與其它藥物耐藥率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.3 艱難梭菌陽性病例其它情況分析

18例陽性病例，27.78%（5/18）為14歲以下兒童，61.11%（11/18）為60歲以上患者；77.78%（14/18）為住院患者，22.22%（4/18）為門診患者。18例陽性病例均伴有基礎(chǔ)疾病，其中16例伴抗生素服用史。

3 討論

艱難梭菌又稱難辨棱狀芽孢桿菌（c-diff），屬厭氧性細(xì)菌，一般寄生在人的腸道內(nèi)，是一種條件致病菌［2］。當(dāng)腸道正常環(huán)境出現(xiàn)菌群失調(diào)，艱難梭菌的菌群生長速度加快，影響腸道中其他細(xì)菌，引發(fā)炎癥，導(dǎo)致腹瀉，甚至遷延為偽膜性腸炎［3］。據(jù)臨床觀察，因艱難梭菌造成醫(yī)院感染的發(fā)生率及死亡率逐年增加，流行菌株的毒性也逐年，在美國曾造成暴發(fā)流行［4］。

艱難梭菌引起的感染短期內(nèi)很難控制，治療時(shí)間相對較長。所以，提高艱難梭菌的檢測水平，對積極有效的預(yù)防控制艱難梭菌感染有著重大意義［5］。目前，產(chǎn)毒培養(yǎng)試驗(yàn)是檢驗(yàn)艱難梭菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”，它具有準(zhǔn)確度高及特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，然而該方法對技術(shù)條件要求高、操作較為復(fù)雜，因此限制了其臨床的廣泛應(yīng)用［6］。本次研究運(yùn)用的方式是糞便細(xì)菌法，它具有靈敏度高，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，此種方式既可檢測出艱難梭菌，成本低，且一般實(shí)驗(yàn)室即可進(jìn)行，是一種有效、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的實(shí)驗(yàn)室檢測手段。有關(guān)研究資料發(fā)現(xiàn)［7］，過度應(yīng)用抗生素是造成艱難梭菌感染的主要原因。如果過度服用某些抗生素，艱難梭菌的菌群生長速度加快。艱難梭菌產(chǎn)生大量的外毒素A和B，外毒素A與黏膜細(xì)胞，造成初級的破壞，外毒素B進(jìn)而造成更大的破壞，導(dǎo)致腹瀉，且癥狀較重［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，除克林霉素耐藥率較高外，艱難梭菌對其它抗菌藥物均具有良好的敏感性。為預(yù)防控制出現(xiàn)艱難梭菌感染，首先醫(yī)院通過采用手部衛(wèi)生護(hù)理、接觸防護(hù)、環(huán)境清潔和消毒等措施進(jìn)行有效預(yù)防，其次臨床中嚴(yán)格規(guī)范應(yīng)用抗生素，對預(yù)防控制艱難梭菌感染也有著重要意義。綜上所述，隨著艱難梭菌造成醫(yī)院感染的發(fā)生率及死亡率逐年增加，我們必須積極預(yù)防控制艱難梭菌感染，嚴(yán)格規(guī)范應(yīng)用抗生素，防止菌群失調(diào)；并對已患感染患者進(jìn)行隨訪。

［1］ 李文革，靳會(huì)娟，岑瑞琦，等．鄉(xiāng)村醫(yī)療機(jī)構(gòu)與城市醫(yī)院來源的艱難梭菌MLST分型對比研究［J］． 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2012，22（12）: 2699-2701．

［2］ 嚴(yán)其容，李文革，許文榮，等．25株艱難梭菌多位點(diǎn)序列分型［J］．臨床檢驗(yàn)雜志，2012，30（3）: 183-186．

［3］ 馮云，王傳清，金嘉琳，等． 上海部分地區(qū)兒童艱難梭菌相關(guān)性腹瀉的臨床分析［J］． 微生物與感染，2010，5（3）: 151-155．

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［7］ 郭威．偽膜性腸炎的相關(guān)危險(xiǎn)因素研究［J］． 中國全科醫(yī)學(xué)，2012，15（4）: 397-399．

［8］ 唐海先，肖洪廣，楊玉靜，等． 腹瀉患者艱難梭菌的檢測及分析［J］． 中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（17）：3328-3331．

Detection and Analysis of Clostridium Difficile in Diarrhea Patients

YAN Fengjuan Department of Clinical Laboratory，Shuangyashan People's Hospital，Shuangyashan Heilongjiang 155100，China

Objective To observe the detection of clostridium with diarrhea patients． Methods Stool samples from 348 patients with diarrhea in our hospital were collected and their drug resistance was detected by K-B method． Results 348 cases samples，including 18（5．17%）bacterial culture positive cases，77．78%（14/18）was hospitalized patients，and 61．11%（11/18）patients were over 60 years old． The susceptibility of Clostridium botulinum for metronidazole，amoxicillin/clavulanic acid and piperacillin is better． Conclusion Clostridium is sensitive to conventional antimicrobial agents，and the infection is mainly nosocomial infection．

Diarrhea，Clostridium，Detection

R446

A

1674-9316（2016）23-0156-02

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．23．086

黑龍江省雙鴨山市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，黑龍江 雙鴨山 155100