結直腸癌中肝癌衍生生長因子與p53蛋白的表達相關性分析

甄時建

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結直腸癌中肝癌衍生生長因子與p53蛋白的表達相關性分析

甄時建

【摘要】目的 探究結直腸癌（CRC）中肝癌衍生生長因子和p53蛋白的表達相關性。方法 應用免疫組化染色法檢測80例CRC和10例正常結直腸黏膜組織者中的肝癌衍生生長因子（HDGF）的表達，取30例CRC組織檢測p53蛋白的表達水平。結果 80例CRC中HDGF陽性率為66.7%，而正常人群的結直腸黏膜組織均為陰性；30例CRC組織中p53蛋白的陽性率為70.0%，而正常結直腸黏膜者呈陰性。結論HDGF和P53蛋白在結直腸癌組織中的表達高于正常結直腸癌組織。

【關鍵詞】結直腸癌；肝癌衍生生長因子

作者單位：412000株洲，湖南中醫藥高等專科學校附屬第一醫院病理科

結直腸癌（CRC）是一種危害性較大的惡性腫瘤，隨著我國老齡人口數量的增加和環境的污染，使得CRC人數逐漸增加［1-2］。在臨床尋找準確反映結直腸癌患者預后的預測指標，針對具高復發風險的患者進行個體化治療，從而降低局部的復發和轉移［3-4］。目前肝癌衍生生長因子和p53蛋白在結直腸癌中的表達和相關性未見報道，筆者為探測結直腸癌中肝癌衍生因子和p53蛋白表達的相關性，進行以下研究。

1　資料與方法

1.1一般資料

我院收治的80例CRC，手術后存檔的石蠟標本作為本次的標本。其中女性32例，男性48例，年齡22～85歲，結腸癌41例，直腸癌39例。另取10例正常結直腸黏膜組織者，男性5例，女性5例，年齡23～84歲。

1.2方法

1.2.1儀器及試劑 HDGF單克隆抗體、免疫組化試劑盒、鼠抗人p53單克隆抗體、0.01 PBS，石蠟切片、顯微鏡日本Olympus公司、免疫組化用24片帶蓋反應保濕盒。

1.2.2檢測方法 試劑盒由深圳深達公司提供，并嚴格按照SABC免疫組化檢測試劑盒操作說明：（1）將石蠟連續切成厚為4μm的切片，貼片用多聚賴氨酸玻片， 60℃烤箱烘烤過夜。（2）將石蠟進行脫蠟和水化。（3）滴加3%的過氧化氫-甲醇溶液，室溫進行孵化20 min，用PBS進行洗滌。（4）將切片用0.01 M的枸櫞酸鹽緩沖液進行沖洗，在微波中加熱煮沸10 min，室溫放置冷卻后，用 PBS洗滌3×2 min。（5）滴加山羊血清進行封閉，室溫孵化時間為20 min。（6）滴加HDGF抗體或者p35抗體， 4℃進行過夜。（7）60 min復溫，用PBS沖洗，時間為3×3 min。（8）將生物素標記二抗工作液滴入，于常溫中孵化至少15～20 min，再應用PBS沖洗，時間3×3 min。（9）將經過氧化物酶標記過的鏈霉素親和素滴入后于常溫下孵育至少15～20 min，再于PBS沖洗，時間3×3 min。（10）將現配現用的DAB溶液滴入后于鏡下觀察其顯色情況，然后采用自來水沖洗以便終止其反應；之后采取蘇木素復染，于1%鹽酸酒精反藍，待梯度酒精脫水與二甲苯透明后利用中性樹脂進行封片。

陽性對照為用已知的HDGF陽性切片；陰性對照為無關的IgG代替抗體進行陰性對照；空白對照：PBS替代。

1.3判定標準

所有的切片經病理診斷資質資深的專家進行盲法閱讀。HDGF判定：光鏡下隨機觀察10個高倍鏡視野，記錄10×100個陽性細胞的百分比。陽性結果用Yamamoto等進行免疫組化評分，＞90%的腫瘤細胞質和細胞核均陽性染色，為高表達組；＜90%則為低表達組。

p53蛋白定位于細胞核，并呈黃色的顆粒，觀察陽性百分數，陽性細胞數＜10%記為0，10%～25%為1，25%～50%為2，＞50%為3；因此，0～1分為陰性，2為陽性，3為強陽性。

1.4統計分析

用統計軟件SPSS 22.0進行分析比較，用Spearman和χ2檢驗進行相關性分析。P＜0.05，差異有統計學意義。

2　結果

2.1不同生理下HDGF、p35的表達

所有正常結直腸黏膜組織中HDGF表達為陰性，在80例結直腸癌中HDGF的陽性率為66.7%，而10例正常結直腸黏膜中HDGF為陰性，差異有統計學意義（P＜0.05）；80例患者中取30例CRC組織檢測p53蛋白的表達水平，30例結直腸癌組織中p53蛋白的陽性率為70.0%，而10例正常結直腸黏膜中p53蛋白呈陰性，差異有統計學意義（P＜0.05）。

2.2結直腸癌組織中HDGF與p53蛋白表達的相關性

結直腸癌組織中p53蛋白陽性率為70.0%，對結直腸癌組織中HDGF和p53進程蛋白表達的Spearman進行相關性分析，兩者的相關系數為rs=0.33，P=0.001，表明HDGF表達與p53蛋白表達呈正相關。

3　討論

最初是在人的肝癌細胞系HUH-7進行分離純化得到HDGF［5-6］。目前臨床已經表明HDGF廣泛存在于多種腫瘤組織和惡性癌細胞中，對細胞的增生、血管生成和創傷修復等具有深遠的影響［7-8］。在本次的研究結果中，HDGF在結直腸癌中的陽性表達高于正常的組織，這也提示了HDGF可能參與某些細胞的生物學行為，并在結直腸癌的發展中扮演重要角色。

本次30例結直腸癌組織中p53蛋白的陽性率為70.0%，而正常組織為陰性，提示結直腸癌組織與正常的組織的p53存在差異。此外HDGF表達與p53蛋白表達呈正相關，提示在HDGF的高表達中可能存在p53的突變，對于癌變細胞兩者均具有促進作用。

HDGF和p53蛋白在結直腸癌組織中的表達高于正常結直腸黏膜組織，在結直腸癌組織HDGF與p53蛋白表達具有正相關。

參考文獻

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［3］王志宇，楊渤彥，高健，等.直腸癌中MIC-1， VEGF和P53表達的臨床意義［J］.世界華人消化雜志，2010，15（19）：2171-2172.

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Expression and Correlation Analysis of Liver Cancer Derived Growth Factor and p53 Protein in Colorectal Cancer

ZHEN Shijian Department of Pathology，First Affiliated Hospital of Hunan Traditional Chinese Medical College，Zhuzhou 412000，China

【Abstract】

Objective Exploration of colorectal cancer（CRC） in hepatoma-derived growth factor and p53 protein expression correlation.Methods CRC 80 cases and 10 cases of normal colorectal mucosa organizer of hepatoma-derived growth factor（HDGF） expression by immunohistochemical staining,30 cases taken to detect the expression levels of p53 protein in CRC tissue.Results 80 cases of CRC in HDGF positive rate 66.7%,while the colorectal mucosa normal population was negative.The positive rate of 30 cases of CRC of p53 protein was 70.0%,while the normal colorectal mucosa were negative.Conclusion The expression of HDGF and P53 protein in colorectal cancer tissues was significantly higher than that in normal colorectal cancer tissues.

【Keyword】CRC，HDGF

doi：10.3969/j.issn.1674-9316.2016.04.122

【中圖分類號】R735.3

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）04-0171-02