條件性刺激誘導大鼠建立異丙酚復吸行為

王本福，楊曉瑋，賴苗軍，周文華，連慶泉

（1.溫州醫科大學附屬第二醫院 麻醉科，浙江 溫州 325027；2.寧波大學 行為神經科學研究中心寧波戒毒研究中心，浙江 寧波 315010）

?論 著?

條件性刺激誘導大鼠建立異丙酚復吸行為

王本福1，楊曉瑋1，賴苗軍2，周文華2，連慶泉1

（1.溫州醫科大學附屬第二醫院 麻醉科，浙江 溫州 325027；2.寧波大學 行為神經科學研究中心寧波戒毒研究中心，浙江 寧波 315010）

目的：利用條件性刺激誘導大鼠建立異丙酚復吸行為。方法：在固定比率（FR=1）程序下連續訓練14 d建立自身給藥，大鼠24只，隨機分為3組（n=8）：戒斷1 d（R1）組、戒斷14 d（R14）組和戒斷30 d（R30）組。大鼠進行復吸測試2 h（前1 h為實驗籠空間環境誘導，后1 h為條件性刺激誘導），記錄動物在2 h內的有效或無效鼻觸數。結果：異丙酚自身給藥訓練14 d，建立了穩定的異丙酚靜脈自身給藥行為。和無效鼻觸相比，有效鼻觸數明顯增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。與R1組比，R14組有效鼻觸數顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.01），R30組有效鼻觸數亦升高，但差異無統計學意義（P=0.057）。條件性刺激誘導的有效鼻觸反應比實驗籠空間環境的誘導作用更強烈（P＜0.05）。結論：條件性刺激可以誘導大鼠建立異丙酚復吸行為，異丙酚具有明顯的復吸特性。

異丙酚；復吸；環境線索；自身給藥

異丙酚是常用的靜脈麻醉藥物，廣泛用于麻醉和ICU鎮靜。異丙酚可以產生欣快感、愉悅和性興奮，具有明顯的獎賞效應[1-3]。有文獻[4]報道異丙酚依賴患者1 d需要注射藥物100多次，也有患者戒斷后出現復吸。這些證據表明異丙酚具有明顯的精神依賴性，存在復吸現象。條件性刺激誘導的復吸模型是研究成癮藥物的神經生物學機制和干預措施的常用方法[5-8]，本研究旨在利用條件性刺激誘導大鼠建立異丙酚復吸行為。

1 材料和方法

1.1 動物選擇與分組 清潔級雄性SD大鼠24只（由浙江省實驗動物中心提供），體質量240～270 g，年齡14周。單籠飼養，自由進食進水，24 h晝夜交替飼養，控制室溫與濕度。建立異丙酚（批號：EF834，AstraZeneca公司，意大利）靜脈自身給藥后隨機分為3組（n=8）：戒斷1 d（R1）組、戒斷14 d（R14）組和戒斷30 d（R30）組。

1.2 靜脈自身給藥模型建立[3]大鼠麻醉后，行右頸外靜脈插管。靜脈導管由3.5 cm硅膠管（外徑0.94 mm，內徑0.51 mm）和10 cm聚乙烯管（PE-20）組成，聚乙烯管部分通過背部穿出體外。0.2 mL青霉素100 000 U抗感染和0.1 mL肝素鈉溶液（50 U/mL）抗凝1周。第8天開始實驗，每天訓練3 h，連續14 d。每次實驗前檢查大鼠的給藥血管是否通暢、有無滲漏，實驗期內禁食。計算機自動記錄有效鼻觸、無效鼻觸和藥物注射次數，整個實驗系統由計算機自動控制。實驗程序為固定比率1∶1（FR=1），即大鼠鼻觸1次有效開關注射1次異丙酚1.7 mg/kg，同時開關上方的綠色信號燈在注射期間閃爍，注射完畢后熄滅，注射期間上壁的籠燈熄滅，進入不應期30 s。在不應期，大鼠如再次觸動有效開關則不誘發藥物注射，但記錄有效鼻觸次數。大鼠觸碰無效鼻觸則大鼠不能獲得藥物，綠色信號燈不改變。實驗期間由計算機控制每隔1 h給予大鼠1次強制注射，每天訓練限定最高注射次數為50次。如果已經達到注射50次，此后鼻觸開關關閉不再記錄。

1.3 復吸模型的建立 建立異丙酚自身給藥行為后，大鼠放入飼養籠喂養進行戒斷，期間自由飲水進食。戒斷期后，大鼠返回實驗籠進行環境線索誘導的復吸測試，共2 h。前1 h測定實驗籠空間環境線索誘導的復吸，所有條件性刺激（籠燈、鼻觸燈、注射泵聲音）全部關閉，僅記錄“有效”和“無效”鼻觸反應；后1 h自動給予1次條件性刺激，提示進入下一測試階段，此時所有燈光和設備控制與異丙酚自身給藥訓練時一樣，每觸發1次有效鼻觸可獲得1次條件性刺激，但沒有異丙酚注射，觸發1次無效鼻觸不給予條件性刺激。記錄動物在2 h內的有效或無效的鼻觸數。

1.4 統計學處理方法 應用SPSS13.0統計軟件進行數據分析。計量資料以±s表示，統計方法采用獨立樣本t檢驗、單因素方差分析和重復測量方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 異丙酚自身給藥大鼠模型的建立 有效鼻觸次數隨著異丙酚自身給藥訓練天數的增加而逐漸增加，有效鼻觸數和藥物注射次數處于穩定狀態，而無效鼻觸次數一直處于較低水平。和無效鼻觸數相比，有效鼻觸次數明顯增加，差異有統計學意義[F （1，46）=1 517.002，P＜0.01]，建立了穩定的異丙酚靜脈自身給藥行為。見圖1。

圖1 異丙酚自身給藥模型的建立

2.2 環境線索誘導的復吸測試 與R1組比，R14組大鼠的有效鼻觸次數顯著升高[F（2，23）=236.625，P＜0.01]，R30組大鼠的有效鼻觸次數也升高，但差異無統計學意義[F（2，23）=236.625，P=0.057]。復吸測試前1 h為實驗籠空間環境誘導的鼻觸反應，后1 h為先前與異丙酚注射相伴的條件性燈光刺激誘導的鼻觸反應，見圖2。在測試期間，R14組大鼠條件性刺激誘導的有效鼻觸反應比實驗籠空間環境誘導的有效鼻觸反應更強烈（F=15.862，P＜0.01），見圖3。結果表明利用靜脈自身給藥技術可以建立條件線索誘導的異丙酚模型，異丙酚具有明顯的復吸特性。

圖2 戒斷大鼠復吸測試時的鼻觸反應

圖3 R14組大鼠復吸測試的鼻觸反應

3 討論

復吸是藥物依賴者戒斷用藥一段時間后由于某些因素的激發，重現渴求感受藥物精神效應欲望而產生的強迫性用藥和覓藥行為，是藥物成癮的主要特征之一，也是困擾成癮治療的首要問題。近年來藥物依賴研究已主要轉向對成癮藥物復吸的治療，因此建立有效的復吸行為的動物模型是問題的關鍵。

異丙酚為一種全憑靜脈麻醉藥，因其臨床性能良好，廣泛地用于麻醉誘導、維持和ICU鎮靜。臨床上發現異丙酚不僅可以引起欣快感、愉悅感，而且停藥后還使用藥者產生了想再次用藥的渴求，甚至濫用死亡[9-11]。動物研究也發現異丙酚可以建立位置偏愛實驗和自身給藥實驗，我們前期也建立了異丙酚的自身給藥模型[12-13]。1995年至2005年間，美國醫療部門醫務人員有18%濫用異丙酚，比過去10年增加了5倍，其中28%的濫用患者死于藥物過量[14]。有3例患者通過醫療手段停用異丙酚后不久復發（復吸）[4]。2009年，著名歌星邁克?杰克遜死于異丙酚的濫用。調查研究韓國的38名異丙酚依賴患者顯示：89%的患者1周至少注射異丙酚2～3次，13.2%的患者出現了戒斷綜合征[15]。這些證據表明異丙酚具有明顯的濫用和復吸現象，目前異丙酚復吸的機制還不清楚。因此，建立異丙酚復吸行為的模型對探索異丙酚復吸和生物學機制具有重要意義。

自身給藥法是檢驗藥物是否具有精神依賴性的可靠方法，由于大鼠靜脈自身給藥模型較好地模擬了人類的用藥行為，國內外主要是利用此技術建立復吸行為模型[16-18]。與之前應用藥物相關的環境和條件性刺激能夠激發成癮者的藥物渴求和情感反應，該因素更好地模擬了人類藥物濫用的復吸行為，即吸毒、離開原來環境脫毒、再次回到原來環境遇到與其以前用藥時相關聯的人或隨身物品誘發復吸[19-21]。故本研究采用大鼠靜脈自身給藥技術建立條件性刺激誘導的大鼠異丙酚復吸行為。

本研究建立穩定的異丙酚自身給藥模型，分別戒斷1、14和30 d后觀察環境線索誘導的覓藥行為。結果顯示R14組和R30組2組戒斷大鼠出現了明顯的復吸行為。與R1組相比，R14組和R30組大鼠的有效鼻觸次數明顯升高，R14組大鼠的有效鼻觸次數升高更顯著。在復吸測試過程中，和實驗籠空間環境相比，R14組大鼠條件性刺激誘導的鼻觸反應更強烈，測試期間大鼠的鼻觸反應主要發生在與異丙酚相伴的有效鼻觸。這些結果表明利用條件性刺激可以誘導大鼠建立異丙酚復吸的行為，該模型可以用來研究異丙酚復吸的機制和干預方法。

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（本文編輯：趙翠翠）

Propofol relapse induced by drug-related environmental cues

WANG Benfu1, YANG Xiaowei1, LAI Miao-jun2, ZHOU Wenhua2, LIAN Qingquan1.
1.Department of Anesthesiology, the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325027; 2.Laboratory of Behavioral Neuroscience, Ningbo Addiction Research and Treatment Center, School of Medicine, Ningbo University, Ningbo, 315010

Objective: To induce rat establishing propofol relapse behavior, conditioned cues was utilized.Methods: Rats received propofol self-administration 3 h session per day for a total of 14 days under FR=1 (fi xedratio=1) schedule.Twenty-four rats well trained for propofol self-administration were divided into 3 groups (n=8): Relapse 1 day (R1), Relapse 14 days (R14) and Relapse 30 days (R30).After withdrawal, those rats reintroduce to training-chambers for consecutive 1 hour relapse testing induced by contextual and contingent discreet conditioned cues respectively.Results: Stable propofol self-administration was established after 14 days training sessions.Compared to inactive nose-poke response, the number of active nose-poke response increased signifi -cantly (P＜0.01).Compared to active nose-poke response of R1, the number of active nose-poke response of R14 increased signifi cantly after 14 withdrawal days (P＜0.01).And the number of active nose-poke response of R30 also increased after withdrawal 30 days, but there was no statistic difference compared with that of R1 (P=0.057).The number of active nose-poke response of contingent discreet conditioned cues was strongly higher than that of contextual (P＜0.01).Conclusion: Propofol relapse can be induced by drug-related environmental cues, and propofol has obvious characteristics of relapse.

propofol; relapse; environmental cues; self-administration

R971

A

10.3969/j.issn.2095-9400.2016.12.002

2016-01-15

國家自然科學基金資助項目（81271469）；溫州市科技局科研基金資助項目（Y20140692，H20100060）；浙江省醫藥衛生科技項目（2014KYB161）。

王本福（1980-），男，浙江溫州人，主治醫師，碩士。

連慶泉，主任醫生，教授，Email：lianqingquanmz@ 163.com。