GeXP分析儀：7種豬病原體的多重PCR檢測(cè)

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GeXP分析儀：7種豬病原體的多重PCR檢測(cè)

基于GenomeLab Gene Expression Profiler (GeXP)分析儀，一種新的高通量方法被提出，即利用多重PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）可實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)豬7種病原體的檢測(cè)。該方法可檢測(cè)的病原體包括：偽狂犬病毒（PRV）、豬瘟病毒（CSFV）、非洲豬瘟病毒（ASFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）、豬細(xì)小病毒（PPV）、豬圓環(huán)病毒2型（PCV-2）和日本腦炎病毒（JEV）。

7對(duì)嵌合引物，由病原體的特異性序列融合到一個(gè)通用序列的5'端，用于啟動(dòng)PCR，之后一套通用引物被用于后續(xù)的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物用毛細(xì)管電泳分離，并用熒光分光光度法測(cè)定。該研究采用單一和混合病原體的cDNA 和DNA模板對(duì)分析儀的特異性進(jìn)行檢測(cè)，GeXP分析儀檢測(cè)到7種病原菌的特異性DNA產(chǎn)物擴(kuò)增峰，且在對(duì)照組未檢測(cè)到DNA擴(kuò)增產(chǎn)物。采用對(duì)含有病原體特異序列的質(zhì)粒進(jìn)行10倍濃度稀釋的研究方法，檢測(cè)(GeXP)分析儀的靈敏度，結(jié)果表明：在優(yōu)化條件下，以單一病原體樣品為模板，該試驗(yàn)的靈敏度為100～1 000拷貝/μL；以7種病原體混合樣品為模板，試驗(yàn)靈敏度為1 000拷貝/μL。此外，與常規(guī)PCR方法相比，GeXP-PCR分析儀檢測(cè)58個(gè)臨床樣品的特異性為100%。總之，該方法快速、經(jīng)濟(jì)、靈敏度高、特異性強(qiáng)，并能實(shí)現(xiàn)同時(shí)對(duì)7種豬病原體的高通量檢測(cè)。

（編譯自：http：//www.sciencedirect.com/science/ article/pii/S0166093415003882）