液相色譜質譜聯用方法對鹽酸克倫特羅殘留檢測的研究進展

伍曉紅，聶 婉，陳秋玲，周 柳，王琤韋華*（江西科技師范大學生命科學學院，南昌 330013）

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液相色譜質譜聯用方法對鹽酸克倫特羅殘留檢測的研究進展

伍曉紅，聶 婉，陳秋玲，周 柳，王琤韋華*
（江西科技師范大學生命科學學院，南昌 330013）

摘 要：液相色譜系統與質譜系統進行聯用對鹽酸克倫特羅檢驗的手段已經逐漸普及，同時更先進的串聯檢測系統正不斷發展。該文特對此現狀，就液相色譜質譜聯用方法對鹽酸克倫特羅殘留檢測的研究進展作一概述。

關鍵詞：液相色譜；質譜；鹽酸克倫特羅

鹽酸克倫特羅（Clenbuterol，CL）俗稱“瘦肉精”是β-興奮劑的一種，由于對支氣管平滑肌的擴張作用顯著，在醫學上作為一種平喘藥被應用。后人們發現將其添加于飼料、飲水中被豬攝入會顯著提高其胴體瘦肉率，而人進食含CL的畜產品后會產生嘔吐、抽搐、發燒等中毒癥狀。由于誤食CL導致的食物中毒事件影響惡劣，我國明令禁止將CL飼喂于豬。在目前開發出的多種針對CL的檢測方法中，作為常規檢測手段的液相色譜法（LC）已十分成熟，并常與質譜法（MS）聯用以進行更精確的測定。本文總結了其他學者建立的鹽酸克倫特羅液質聯用檢測方法，并對現有相關的檢測手段作一論述。

1 液相色譜法與質譜法的基本原理

1.1 液相色譜法

LC根據色譜柱的原理，將待分離的混合物由流動相（液體部分）帶入色譜柱，根據混合物中各組分對固定相（固定部分）和流動相的親和力不同，使之在經過色譜柱時呈現不同的移動帶，從而實現各組分的分離。根據固定相的類型，可將LC分為柱色譜法、紙色譜法、薄層色譜法；根據吸附力不同，可分為離子交換色譜、吸附色譜、分配色譜、凝膠滲透色譜。傳統的LC不能分析熱不穩定的物質和金屬鹽類，而目前普遍采用的、通過加載高壓液流系統而建立的高效液相色譜法（HPLC）則可以克服這一缺點。

1.2 質譜法（MS）

MS是在待測物中各組分進行電離形成離子束后，使離子束經過加速電場進入質量分析器，依據離子的荷質比不同而導致不同的偏轉程度后發生聚焦，最后根據聚焦點得到的質譜圖而推算待測物的質量。MS能對純化后的物質進行高效的定性分析，但難以定量分析復雜的有機化合物，而色譜法雖難以對其進行定性分析，但可以對混合物進行分離和定量分析。因此MS常與LC進行聯用，二者結合互補優劣勢，以得到更精確的檢測結果。

2 液相色譜與質譜聯用的檢測方法

2.1 液相色譜-質譜法（LC-MS）

LC-MS是將液相色譜儀與質譜儀聯用而建立的檢測方法，兼備液相色譜有效分離物質和質譜高效鑒定組分的優點，可以得到具有較強特征性的離子碎片，但存在分離效率較低的缺點，因此目前在與質譜儀聯用時，更多地將高效液相色譜儀代替液相色譜儀。

2.2 高效液相色譜-質譜法（HPLC-MS）

HPLC-MS是將LC-MS中的色譜柱改進為高壓色譜柱的檢測方法。利用高壓形成的高速流動相能大幅提高分離效率，有效分離LC-MS無法分離的熱不穩定物質。夏雙梅采用HPLC-MS對豬肉、豬肝、豬尿樣本進行檢測時，在重現性實驗中相對標準偏差（RSD）＜1.5%。陳海玲等對豬尿中的CL和萊克多巴胺同時進行檢測時，向尿樣分別加入1.00 mL 濃度為5.0、10.0和50.0 μg·kg-1的CL和萊克多巴胺混合標液，平均回收率分別達到76.2%和77.4%。吳慶潔等建立的固相萃取前處理方法提高了HPLC-MS的前處理效率，且可以同時檢測豬肉中土霉素、金霉素、四環素、氯霉素和CL。

2.3 液相色譜-串聯質譜法（LCMS/MS）

LC-MS/MS是在LC-MS的基礎上進一步串聯MS系統的一種檢測方法，將在LC-MS系統中待測物裂解的離子碎片轉入MS系統進一步裂解，使最終得到的質譜結果更精確。葉培等對豬肉中包括CL在內的28種β2-受體激動劑進行檢測時發現，LC-MS/ MS在2.5～25 μg/L范圍內線性關系良好，目標檢測物出峰附近不存在干擾測定的雜質峰，特異性較強[1]。劉佳等通過將前處理步驟中改用MCX固相萃取柱，并將使用的提取液改進為正丁醇：甲基叔丁基醚（6∶4），將檢測時間縮短至15 min[2]。王旭峰等同時檢測包括CL在內的23種違禁藥物時，日內RSD為1.0%～8.6%，日間RSD＜4.7%～18%[3]。

2.4 高效液相色譜-串聯質譜法（HPLC-MS/MS）

HPLC-MS/MS是由HPLC-MS系統串聯MS系統而建立的檢測方法，兼備HPLC的高效分離優點和LCMS/MS的精確定性檢測的優點。張罡等應用HPLC-MS/MS對停止飼喂CL 32 d后的豬的毛發中CL殘留進行檢查時，仍能檢出CL，殘留量為87 μg/kg，檢測時在0.1～1 000 ng/ mL的樣本濃度的線性方程內相關系數均大于0.99[4]。周煒等對豬尿中23種受體激動劑同時進行檢測時，分離效果較好，峰形理想，加標平均回收率為68%～115%，批間RSD為0.6%～14.1%[5]。

2.5 超高效液相色譜-串聯質譜法（UPLC-MS/MS）

UPLC-MS/MS是在HPLC-MS/ MS的基礎上將色譜柱中的固定相改進為小顆粒、高性能的微粒，再配合使用超高壓輸液泵，將分離速度、靈敏度和分離效果分別提高9倍、3倍和1.7倍。李丹妮等在研究用UPLC-MS/ MS檢測16種受動劑時，發現選擇乙腈∶0.1 % 甲酸（20∶80）作為流動相時，甲酸濃度在0.1%以上時會產生離子抑制，導致檢測的靈敏度降低。李瑩瑩等同時測定豬肉中包含CL的7種受動劑，采用2 mL甲酸甲醇洗脫時，運行12 min后即獲得較滿意的結果。加標1、2、10 μg/kg，CL的加標回收率為72.3%～79.2%，RSD 為0.75%～2.43%。李丹等采用叔丁醇∶叔丁基甲醚（6∶4）作為萃取劑，提取豬尿樣本中的20種受動劑并進行UPLC-MS/MS檢測，CL的加標回收率達到77.7%～106.1%[6]。朱英才等檢測豬尿中的CL時采用Oasis MCX固相萃取柱進行凈化，相對于常用的SCX柱和HLB柱的回收率有大幅度提高到92.6%，其 RSD＜8.5%[7]。

3 小結

CL對人們的健康威脅依然存在，因此對CL的檢測要求仍在提高。液相色譜-質譜檢測方法雖然已經日趨成熟，但依然有很大的發展空間。液相色譜法和質譜法與其他檢測系統具有較強的兼容性，因此在液質聯用的基礎上開發新型聯用技術的前景十分廣闊。

參考文獻

[1] 葉培，岳振峰，肖陳貴，等.液相色譜-串聯質譜法檢測豬肉中28種β2- 受體激動劑[J].食品安全質量檢測學報，2013，4（3）：682-688.

[2] 劉佳，梁桂榮，謝云峰，等.液相色譜-串聯質譜法檢測豬尿中26種β2-受體激動劑類藥物殘留[J].食品安全質量檢測學報，2014，5（9）：2757-2764.

[3] 王旭峰，趙麗，張高奎，等.液相色譜-串聯質譜法同時測定豬尿中23種違禁藥物[J].分析化學，2013，41（8）：1254-1258.

[4] 張罡，王鳳美，湯志旭，等.高效液相色譜-串聯質譜法研究克倫特羅在豬毛發中殘留及蓄積代謝規律[J].食品安全質量檢測學報，2014，5（12）：3778-3783.

[5] 周煒，朱聰英，應永飛，等.高效液相色譜-串聯質譜法測定動物尿液中23 種β-受體激動劑[J].中國獸藥雜志，2013，47（9）：46-52.

[6] 李丹，孫雷，畢言鋒，等.超高效液相色譜-串聯質譜法檢測豬尿中20種β-受體激動劑殘留[J].中國獸藥雜志，2013，47（12）：50-56.

[7] 朱英才，彭強.超高效液相色譜-串聯質譜法檢測豬尿中4種β-興奮劑藥物殘留[J].畜禽業，2015（3）：34-36.

收稿日期：（2015-12-09）

通訊作者，王琤韋華（1982-），男，副教授，博士，研究方向：動物營養。E-mail：616051233@qq.com。

作者簡介：伍曉紅（1994-），女，本科，專業：生物科學。E-mail：sakura-1130@qq.com。

基金項目：江西科技師范大學第九屆本科生創新、創業訓練計劃項目，2015江西省農牧漁業科研項目。