基于“腎主生殖”理論探討卵巢顆粒細胞增殖機理研究

蔚建斌　連　方

1.山東中醫藥大學，山東　濟南　250000 ；2.山東中醫藥大學附屬醫院，山東　濟南　250000

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基于“腎主生殖”理論探討卵巢顆粒細胞增殖機理研究

蔚建斌1連方2

1.山東中醫藥大學，山東濟南250000 ；2.山東中醫藥大學附屬醫院，山東濟南250000

【摘要】卵巢顆粒細胞的增殖是體現人類生殖能力的重要環節。筆者通過概述GPER/EGFR/MAPK信號轉導通路中相關蛋白促進顆粒細胞增殖的機制及其中西醫研究進展，初步探討此通路與人類生殖的關系并豐富“腎主生殖”理論，以期能夠從微觀化的角度為卵巢顆粒細胞增殖在中西醫生殖領域的治療提供新的研究思路與方法。

【關鍵詞】信號通路；細胞增殖；中西醫；腎主生殖

腎藏精，主生殖。精子、卵細胞及受精卵都應當列入生殖之精的范圍,相關研究發現中醫藥在卵巢顆粒細胞的增殖中發揮重要作用，可能通過GPER/EGFR/MAPK信號轉導通路發揮作用。

1腎藏精，主生殖

生殖之精是腎精的重要組成部分，是形成子代胚胎的原始物質?！鹅`樞·經脈》曰“人始生，先成精，精成而腦髓生”，精子、卵細胞及受精卵都應當列入生殖之精的范圍[1]?！杜普凇V嗣總論》指出“男精壯女經調，有子之道也”，揭示受孕的機理在于男女腎氣充盛，天癸成熟，精壯經調，適時和合，而成胎孕。

2卵巢為奇恒之臟，卵巢藏瀉體現“腎主生殖”

現代輔助生殖技術的發展與應用，使得“腎主生殖”理論的研究深入到了分子水平，為“腎主生殖”內涵的不斷拓展提供了科學依據。卵巢屬于胞脈范疇，形態實質與五臟相似，功能上能生成和排出卵子與六腑類同，可稱為奇恒之臟[2]。解剖上通過卵巢固有韌帶與子宮相連，藏瀉有時，于卵泡期積腎之陰陽，以陰長為主促進卵泡的發育成熟，陰長之極，重陰轉陽，于氤氳之時瀉出元精，之后，重陰轉陽，陰重陽旺，陰陽俱可，為孕育胞胎提供條件。卵巢顆粒細胞為卵泡發育成熟后隨之泄出的人之元精，在一定程度上可以反映機體腎陽之盛衰。腎氣虛，則沖任虛衰不能攝精成孕；腎陽虛，命門火衰，則生化失期，有礙子宮發育或不能觸發氤氳樂育之氣以致不能攝精成孕；腎陰虛而致熱擾沖任血海，均不能攝精成孕，以致女性生殖功能下降。有研究已經證實補腎中藥能夠從基因、分子生物學、蛋白質等多個層次影響卵細胞質量，改善人類生殖能力。

3“生殖之精”之卵巢顆粒細胞增殖機理探討

基于GPER/EGFR/MAPK信號轉到通路探討“生殖之精”之卵巢顆粒細胞增殖機理。G蛋白偶聯雌激素受體(GPER)是上世紀90年代從不同的細胞株中克隆獲得的一種蛋白偶聯受體家族中的新型雌激素受體[3]，廣泛分布于多個系統的組織細胞中，包括神經系統、生殖系統、泌尿系統、免疫系統及循環系統等，卵巢、子宮、胎盤、前列腺、腦、心臟、肝臟、淋巴、乳腺等組織均發現了該受體的分布[4-6]，且發現其在多種癌細胞包括乳腺癌[3]、卵巢癌[7]、子宮內膜癌[8]、甲狀腺癌[9]、睪丸生殖細胞癌[10]以及前列腺癌[11]中均有表達。其作用方式主要是通過與雌激素受體結合后活化并釋放肝素結合性表皮生長因子激活EGFR，進而產生增殖效應以調控細胞增殖。表皮生長因子受體(EGFR)是受體酪氨酸蛋白激酶(RPTK)受體家族中的一員，為單次跨膜受體，其配體表皮生長因子(EGF)與生長、分化、免疫、腫瘤等有密切的關系。近年來有研究發現EGF能夠調節卵巢顆粒細胞的增殖與分化。如文獻報道[12]，EGF能夠通過旁分泌的方式與其受體結合，從而調節卵巢顆粒細胞的增殖和性激素的分泌，從而影響卵泡的生長發育與生殖功能的調節。馬會明等[13]通過動物實驗證明一定劑量的EGF 對小鼠顆粒細胞增殖效應明顯，EGF能夠通過活化小鼠卵巢顆粒細胞的PI3K/AKT信號通路，促進顆粒細胞生長、增殖。絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)是哺乳動物體內廣泛存在的一種激酶，主要參與調控細胞的增殖、分化與凋亡。其作用途徑主要有三條：第一，細胞外信號調節蛋白激酶(extracellularsignal regulated kinase，ERK)途徑；第二，JNK途徑；第三，p38MAPK途徑。其中ERK途徑是細胞增殖分化的重要途徑。有報道指出，ERKl/2通路參與了FSH 對卵巢顆粒細胞甾類激素生成的調控過程[14]，是卵巢顆粒細胞增殖的重要信號通路，并主要通過細胞周期蛋白而發揮作用。

細胞周期是細胞生命活動的基本過程,細胞在周期時相的變遷中進入增殖、分化、衰老和死亡等生理狀態。隨著近年來研究的進展,細胞周期蛋白的種類越來越多，CyclinD是1991年由Motokura等[15]在研究甲狀旁腺癌時首先分離,它的主要功能是調節細胞周期中G1/S期的過渡,其合成是在G1早期,并到G1后期達高峰,進入S期前降解,隨后合成的是cycnilE。CyclinE是哺乳動物的另一種G1 期細胞周期蛋白,與相應的細胞周期蛋白依賴激酶結合，參與細胞進入S期。在卵巢顆粒細胞中，FSH通過cAMP-PKA信號轉導通路激活細胞外調節蛋白激酶(ERK)，促進細胞周期蛋白cyclinD2 表達，進而推動顆粒細胞增殖[16-17]。

4GPER/EGFR/MAPK信號通路促進人類生殖能力的研究

張明敏等[18]通過研究補腎安胎方(菟絲子、桑寄生、川斷、丹參、黃芪、當歸)對胚胎著床障礙小鼠子宮內膜EGFR表達的影響，證實補腎中藥能夠提高EGFR的表達。許靜云等[19]通過研究補腎中藥對EGF表達的影響，證實菟絲子提取物可以促進大鼠卵巢顆粒細胞EGF的表達，六味地黃丸、菟絲子黃酮可以促進雷公藤多苷對生殖損傷的恢復。李嵐等[20]通過研究補腎化瘀方對PCO大鼠卵巢顆粒細胞表皮生長因子受體表達的影響，證實補腎化瘀中藥能夠改善PCO大鼠卵巢顆粒細胞EGFR的表達。

5展望

近年來，由于生活方式的變化、妊娠年齡的推后以及一大批高齡失獨家庭的出現，不孕不育患者人數逐年增加，如何改善人類生殖能力，提高人類生育水平成為輔助生殖領域亟待解決的問題。GPER/EGFR/MAPK信號通路可能參與促進顆粒細胞增殖并為“腎主生殖”理論的提供微觀化解釋。關于此信號轉到通路介導細胞增殖的研究目前了解尚少，尚有待于臨床與科研的進一步研究和考證。

參考文獻

[1]張建偉,連方,孫振高,等.中藥二至天癸顆粒對控制性超排卵周期卵泡液IL-1β、IL-6以及對胚胎質量的影響[J].生殖與避孕,2007,(11):714-717.

[2] 連方,辛明蔚,穆琳,等.卵巢為奇恒之臟之我見[J].天津中醫藥.2007,(02):125-126.

[3]王潔.GPER:雌激素相關疾病治療的新靶點[J].上海交通大學學報(醫學版)，2013，33(2)：225-227.

[4]Thomas P，Pang Y，Filardo EJ，et al． Identity of an estrogen membrane receptor coupled to a G protein in human breast cancer cell[J].Endocrinology，2005，146(2): 624-632．

[5]Filardo E，Quinn J，Pang Y，et al．Activation of the novel estrogen receptor G protein-coupled receptor 30(GPR30)at the plasma membrane[J].Endocrinology，2007，148(7):3236-3245．

[6]Hazell GG，Yao ST，Roper JA，et al． Localisation of GPR30，a novel G protein-coupled oestrogen receptor，suggests multiple functions in rodent brain and peripheral tissues[J]．J Endocrinol，2009，202(2):223-236．

[7]Albanito L，Madeo A，Lappano R，et al． G protein-coupled receptor 30 (GPR30) mediates gene expression changes and growth response to 17beta-estradiol and selective GPR30 ligand G-1 in ovarian cancer cells[J]．Cancer Res，2007，67(4):1859-1866．

[8]Vivacqua A，Bonofiglio D，Recchia AG，et al． The G proteincoupled receptor GPR30 mediates the proliferative effects induced by 17β-estradiol and hydroxytamoxifen in endometrial cancer cells[J]．Mol Endocrinol，2006，20(3):631-646．

[9]Vivacqua A，Bonofiglio D，Albanito L，et al．17β-estradiol，genistein，and 4-hydroxytamoxifen induce the proliferation of thyroid cancer cells through the G protein-coupled receptor GPR30[J]．Mol Pharmacol，2006，70(4): 1414-1423

[10]Chevalier N，Bouskine A，Fenichel P． Role of GPER/GPR30 in tumoral testicular germ cells proliferation[J]． Cancer Biol Ther，2011，12(1):2-3．

[11]Chan QK，Lam HM，Ng CF，et al． Activation of GPR30 inhibits the growth of prostate cancer cells through sustained activation of Erk1/2，c-jun /c-fos-dependent upregulation of p21，and induction of G2 cell-cycle arrest[J]．Cell Death Differ，2010，17 (9):1511-1523．

[12]趙明,方芳,王會信,等. EGF對大鼠卵巢顆粒細胞增殖與分化影響的研究[J]. 生理學報,1993,(03):207-214.

[13]馬會明,黑常春,張永芳,等. EGF通過PI3K/AKT通路介導小鼠卵巢顆粒細胞增殖[J]. 寧夏醫科大學學報,2014,(05):483-486，490.

[14]Seger R，Hanoch T，Rosenberg R，et al．The ERK signaling cascade inhibits gonadotropin-stimulated steroidogenesis[J]JBiol Chem，2001(276) : 13957- 13964．

[15]Motokura T,Bbal、T,Km HG,etal A novel cyclin encoded by a bell-linked candidate oneogene[J],Nature,1991,350(6318):512-515.

[16] Kayampilly PP，Menon KM. Follicle-stimulating hormone inhibits adenosine 5′-m onophosphate-activated protein kinase activation and promotes cell proliferation of primary granulosa cells in culture through an Akt-dependent pathway [J]. Endocrinology，2009，150(2): 929-935.

[17] Escamilla-Hernandez R，Little-Ihrig L，Orwig KE，et al. Constitutively active protein kinase A qualitatively mimics the effects of follicle-stimulating hormone on granulosa cell differentiation[J]. Mol Endocrinol，2008 ，22(8):1842-1852.

[18]張明敏,黃玉琴,程亮亮,等. 補腎安胎方對胚泡著床障礙小鼠子宮內膜HB-EGF及其受體EGFR表達的影響[J]. 華中科技大學學報(醫學版),2008,(01):85-88.

[19]李嵐. 補腎化瘀方對PCO大鼠卵巢顆粒細胞上EGFR、TGFR基因表達的影響[D].長沙：湖南中醫藥大學,2010.

[20]許靜云. 補腎中藥干預GTW致雌性幼鼠生殖損傷及其對卵巢組織EGF表達影響的實驗研究[D].鄭州：河南中醫學院,2010.

Discuss the proliferation mechanism of ovarian granulosa cell Based on the theory of “kidney main reproductive”

YU Jianbin1LIAN Fang2

1.Shandong Traditional Chinese Medicine university,Jinan 250011,China;2.Reproductive and Genetic Center of Integrated Traditional and Western Medicine Affiliated Hosptal Shandong T.C.M University,Jinan 250011,China

Abstract:The ovarian granulosa cell proliferation is an important part of the human reproductive capacity. Based on the overview of GPER/EGFR/MAPK can promote protein involved in signaling pathways in granulosa cell proliferation ,we guess preliminarily it play a role its relationship with human reproduction and enrich the theory of "kidney main reproductive", hoping to provide new research ideas and methods for the ovarian granulosa cell proliferation in the field of Chinese and western medicine treatment .

Key words:signaling pathways； cell proliferation；traditional Chinese and western medicine ；kidney main reproductive

(收稿日期：2015.11.26)

【中圖分類號】R339.2+1

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)04-0073-02

作者簡介：蔚建斌,山東中醫藥大學2013年在讀碩士。通信作者：連方(1955-)，女，主任醫師。研究方向：中醫婦科。E-mail：yuyi1o@126.com

基金項目：基于關鍵基因表達調控網絡的腎主生殖理論基金(81473120)(國家自然科學基金)。