2014年某市麻疹檢測結果的分析

張立偉（遼陽市疾病預防控制中心，遼寧 遼陽 111000）

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2014年某市麻疹檢測結果的分析

張立偉
（遼陽市疾病預防控制中心，遼寧 遼陽 111000）

【摘要】目的 分析2014年遼陽市麻疹實驗室檢測結果，了解遼陽麻疹的流行狀況、野毒株基因型特征，為我市麻疹防控提供科學依據。方法 采集疑似麻疹病例的血清標本690份，進行麻疹IgM抗體檢測；56份咽拭子標本，提取核酸后進行PCR檢測；核酸陽性的樣品進行基因分型檢測。結果 690份血清標本中IgM抗體陽性467份，陽性率67.68%；56份咽拭子標本PCR陽性45份，陽性率80.36%；基因型為H1a。結論 2014年遼陽市麻疹暴發流行，以基因型H1a為主，與全國的流行趨勢基本相同。

【關鍵詞】麻疹病毒；IgM抗體檢測；核酸檢測；麻疹病毒基因分型

麻疹是嚴重威脅我國人群健康的傳染病，該病毒屬副黏病毒科麻疹病毒屬，為單股負鏈RNA病毒。麻疹病毒只有一個血清型，有多個基因型，截至2005年，已發現8個基因組（A～H），22個基因型（A、B1～B3、C1、C2、D1～D9、E、F、G1～G3、H1、H2）在世界各地流行。我國以H1基因型為優勢流行基因型，其中又以H1a為主要的流行亞型[1]。

1 材料與方法

1.1 標本來源：2014年遼陽市疾控中心共收集散發及暴發的麻疹疑似病例血清標本690份，咽拭子標本56份。血清標本-20 ℃保存，咽拭子標本-70 ℃保存。

1.2 儀器和試劑：麻疹IgM抗體檢測試劑由德國維潤賽潤研發有限公司生產提供；病毒RNA提取試劑由德國QIAGEN公司的Rneasy min Kit提取試劑；實時熒光定量PCR試劑由江蘇碩世生物科技公司生產提供，試劑均在有效期內使用。設備為瑞士帝肯Sunrise全自動酶標儀、伯樂IQ5實時熒光定量PCR儀。

1.3 檢測方法

1.3.1 麻疹IgM抗體檢測嚴格按照德國維潤賽潤麻疹試劑的說明書操作，大于cutoff上限判定樣品為陽性，小于cutoff下限判定樣品為陰性。

1.3.2 病毒核酸檢測：使用real-time RT-PCR方法檢測，嚴格按照說明書進行操作。①反應體系：RT-PCR反應液7.5 μL、酶混合液5 μL、模板RNA 4 μL、無RNA酶水3.5 μL。②反應條件：逆轉錄反應50 ℃，30 min；變性95 ℃，10 s，55 ℃，40 s，45個循環。③結果判斷：陰性結果Ct值>38或未檢出；陽性結果Ct值≤35；如35≤Ct值<38時，應重復檢測。

1.3.3 病毒分離培養：病毒分離方法將處理好的標本接種到長成單層的Vero/SLAM細胞上。每細胞瓶接種0.3 mL，37 ℃吸附1.5 h后加維持液進行培養。逐日觀察細胞病變（CPE）和液體pH值變化情況。CPE達到75%～90%時將細胞瓶置于-80 ℃凍存以備傳代或鑒定。未發生CPE的繼續培養至第3代，仍無CPE則判為陰性[2]。Vero/SLAM細胞為國家麻疹實驗室提供。①病毒分離物使用 Rneasy mini kit 試劑盒提取MEV的RNA。用 One-Step RT-PCR kit 擴增MEV H和N基因，使用Quick Gel Extraction Kit對陽性產物進行純化，以上試劑盒均由QIAGEN公司提供。RT-PCR反應條件及引物序列參照文獻[3]。②基因序列測定和結果分析：將純化產物送上海立菲生物技術有限公司測序。調出WHO MV 24個基因型的31個參考株序列，使用Sequencher4.0.5和MEGA 4.0.2軟件對這些參考株和本文分析的13株序列在N基因羧基末端的450個核苷酸的片段進行核苷酸和氨基酸的變異比對分析（p-distance模型）和構建進化樹（鄰位-連接法，bootstrap檢驗，抽樣次數500，Kimura-2 Parameter模型）[4]。

2 結 果

通過檢測發現，遼陽市690份血清標本中IgM抗體陽性467份，陽性率67.68%；56份咽拭子標本PCR陽性45份，陽性率80.36%；45份核酸陽性的咽拭子分離培養出11株毒株，將11株麻疹病毒N基因COOH末端450個核苷酸序列與WHO 24個基因型參考序列、中國1993年～1994年流行的H1基因亞型參考株和中國滬191疫苗株對應序列做基因親緣性關系分析[5]。結果顯示，11株麻疹野病毒均為H1基因型的H1a基因亞型 。

3 討 論

麻疹病毒的基因組中，核蛋白（Nucleoprotein，N）基因和血凝素（Hemagglutinin，HA）基因是變異較大的基因，特別是核蛋白N基因羧基（COOH）末端450個核苷酸是麻疹病毒基因組中變異最大的區域，在不同的麻疹野毒株之間變異程度可達12%。故N基因是國際上公認對麻疹毒株鑒定的重要指標。我國自1995年起，經20個省（自治區、直轄市）連續8年的病毒學監測證實Hl型是中國本土優勢基因型，并將Hl基因型進一步劃分為Hla、Hlb、Hlc基因亞型[6-10]。經檢測遼陽市2014年的麻疹流行與全國的流行趨勢基本相同。

參考文獻

[1] 張燕,許文波,朱貞,等.中國2003年流行的麻疹野病毒分子流行病學分析[J].中國計劃免疫,2005,11(3):165-174.

[2] 許文波,朱貞,張珍英,等.麻疹野病毒H1基因型在中國流行的分析[J].中國計劃免疫,2003,9(1):l-7.

[3] 田疆,孫英杰,馬艷,等.遼寧省麻疹病例病毒分離結果及基因型分析[J].中國公共衛生,2002,18(5):86.

[4] 寧夏,姚文清,王艷,等.遼寧省2001～2003年麻疹流行病學分析[J].中國公共衛生,2004,20(11):106.

[5] 王晶.泰安市1985-2008年麻疹流行特征分析[J].中國公共衛生, 2011,27(7):944.

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[8] 王繼健,杜丹.營口地區麻疹局部暴發病例血清學分析[J].中國公共衛生,2006,22(10):1156.

[9] 顧全忠.舟山市1998-2007年麻疹監測結果分析[J].中國公共衛生,2009,25(7):877-878.

[10] 邊疆,李凡,易世紅.吉林省流行麻疹野病毒的核蛋白基因特征[J].中國公共衛生,2007,23(1):97-98.

中圖分類號：R511.1

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）09-0079-01