拮抗劑方案在體外受精-胚胎移植周期中的應用

張　娟，董　麗，凌秀鳳

(南京醫(yī)科大學附屬南京婦幼保健院生殖中心，江蘇 南京 210004)

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拮抗劑方案在體外受精-胚胎移植周期中的應用

張娟，董麗，凌秀鳳

(南京醫(yī)科大學附屬南京婦幼保健院生殖中心，江蘇 南京 210004)

[摘要]隨著體外受精-胚胎移植技術日益發(fā)展，促性腺激素釋放激素拮抗劑(GnRH antagonist，GnRH-ant)方案的應用逐漸增加，拮抗劑方案較常規(guī)方案具有更多優(yōu)勢，且可輔以激動劑扳機，可有效降低卵巢過度刺激綜合征(OHSS)的發(fā)生率。

[關鍵詞]體外受精-胚胎移植；周期；拮抗劑方案；臨床妊娠

控制性超促排卵(controlled ovarian hyperstimulation，COH)是體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)技術的關鍵環(huán)節(jié)，通過COH使用外源性腺激素增強女性卵巢功能，超越自然周期限制，獲取多枚優(yōu)質(zhì)卵子，形成多枚胚胎，盡可能保持COH過程中子宮內(nèi)膜與胚胎發(fā)育的同步性，提高妊娠成功率。同時通過選擇合適的個體化治療方案和藥物以提高卵子治療、胚胎質(zhì)量，進而提高胚胎種植率和臨床妊娠率已成為共同追求的目標。促性腺激素釋放激素激動劑(GnRH-a)進行垂體降調(diào)節(jié)是促排卵治療方案里程碑式的進步。GnRH-a迅速抑制內(nèi)源性黃體生成素(luteal hormone，LH)，迅速抑制LH峰，調(diào)控卵泡同步發(fā)育，從而預防提前排卵和卵泡黃素化，同時改善卵泡募集和子宮內(nèi)膜與卵泡發(fā)育同步化，更易獲得高質(zhì)量的卵子增加獲卵數(shù)和優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)，提高妊娠率。但是，GnRH-a是GnRH類似物，在用藥早期可結合GnRH受體，使其分泌FSH和LH，引起用藥初期的激發(fā)作用(flare-up)。GnRH-a長期應用后有對垂體抑制較深，導致促排卵時間延長、Gn用量增加、患者承擔費用較高、卵巢過度刺激綜合征等不足，并會抑制顆粒細胞類固醇激素的合成，不利于胚胎著床和繼續(xù)妊娠[1]。

近年來，促性腺激素釋放激素拮抗劑(GnRH antagonist，GnRH-ant)因用藥時間短，用藥劑量少且無“flare-up”效應，而被臨床醫(yī)生采用。GnRH-ant是上世紀末期出現(xiàn)的分子合成的多肽，通過與促性腺激素釋放激素(GnRH)競爭性結合垂體GnRH受體快速抑制內(nèi)源性GnRH對垂體的興奮作用，防止內(nèi)源性LH峰過早出現(xiàn)所致卵泡黃素化或排卵，達到垂體“降調(diào)節(jié)”的目的。使用GnRH-ant降調(diào)節(jié)的促排卵方案稱為拮抗劑方案。由于GnRH-ant抑制垂體分泌GnRH的作用迅速、高效，與GnRH-a的“flare up”后再降調(diào)節(jié)的長方案相比，拮抗劑方案療程簡化、用藥少、時間短、更加符合生理過程；由于其募集卵泡少，E2水平低，且可輔以激動劑扳機，可有效降低卵巢過度刺激綜合征(OHSS)的發(fā)生。據(jù)統(tǒng)計，在控制性促排卵過程中中重度OHSS發(fā)生率為3%～6%，而在卵巢高反應人群中(如多囊卵巢綜合癥等)，OHSS發(fā)生率可高達14%～16%，如何控制和降低卵巢高反應人群中重度OHSS發(fā)生率是臨床醫(yī)生最關注的問題之一，1998年，拮抗劑開始應用到控制性促排卵中，與激動劑長方案相比，2011年來源于Cochrane數(shù)據(jù)庫顯示拮抗劑方案重度OHSS發(fā)生相對危險度下降57%，因OHSS導致住院的風險下降54%。循證醫(yī)學Ia級證據(jù)顯示拮抗劑方案降低重度OHSS風險、減少因OHSS住院、減少停用促性腺激素(coasting)、取消周期等二級干預。因此拮抗劑方案在卵巢高反應人群中的使用日益增加，目前國外70%中心采用拮抗劑方案，在國際范圍內(nèi)拮抗劑方案有取代傳統(tǒng)長方案的趨勢，成為主導促排卵方案之一。隨著2014年拮抗劑在國內(nèi)的全面上市，國內(nèi)越來越多的中心嘗試使用拮抗劑方案。作為一種新興方案，如何提高拮抗劑方案的成功率，是生殖專家關注的熱點。現(xiàn)將拮抗劑用藥方案的探索總結如下：

1拮抗劑方案在不同反應人群中的應用

卵巢高反應：尚無公認的診斷標準，參考文獻標準[2]，同時滿足獲卵數(shù)≥15且血清E2>4 000pg/mL。第3天優(yōu)質(zhì)胚胎判定標準[3]：取卵后第3天觀察胚胎，細胞數(shù)≥7，同時碎片<10%確定為優(yōu)質(zhì)胚胎。根據(jù)2011年歐洲人類生殖與胚胎學會(ERHRE)共識[4]，定義卵巢低反應(poor ovarian response, POR)診斷標準為以下3條滿足兩條：高齡(≥40 years)或具有卵巢低反應的其他危險因素；之前有卵巢低反應病史(常規(guī)刺激方案獲卵數(shù)≤3個)；卵巢儲備功能檢測結果異常如：AFC5～7個，或者AMH 0.5～1.1ng/mL。如果患者不屬于高齡或者卵巢儲備功能檢測結果正常，最大刺激后發(fā)生兩次卵巢低反應的患者可定義為低反應患者。多項研究結果的Meta分析結果提示：對于卵巢低反應人群，與長方案比較，雖然拮抗劑方案組其獲卵數(shù)、周期取消率及妊娠率均無改善，但可減少Gn刺激時間[5]；而部分meta分析則認為，卵巢低反應人群中應用拮抗劑方案可以有助于提高臨床妊娠率[6]。對于卵巢高反應人群，與長方案比較，繼續(xù)妊娠率及活產(chǎn)率類似，但拮抗劑方案顯著降低OHSS發(fā)生率。同時在卵巢功能正常而采用GnRH-a與GnRH-ant方案超促排卵結局分析得出，臨床妊娠率無明顯差別，二組可以獲得相似的臨床妊娠率，因此認為在卵巢功能正常患者中采用GnRH-ant并不導致妊娠率降低，對卵母細胞質(zhì)量及胚胎質(zhì)量并無影響；同時部分學者的研究分析認為二組在臨床妊娠率上存在一定差異，主要原因為GnRH-ant抑制存在于卵巢、子宮內(nèi)膜、子宮肌層中GnRH受體，同時可能會造成與胚胎著床相關因素表達的缺失，進而影響妊娠率。

2拮抗劑方案的使用方法

在控制性卵巢刺激過程中使用的GnRH-ant不影響FSH水平，在連續(xù)用藥時可維持對LH的抑制作用且呈劑量相關，而停藥后抑制作用可在48小時內(nèi)解除;根據(jù)拮抗劑開始使用的時間將拮抗劑方案分為兩種：固定方案和靈活方案。固定方案可自卵巢刺激的第5或第6天(約在卵巢刺激開始后96～120小時)開始給予思則凱(0.25mg/日)，持續(xù)整個促性腺激素治療過程至誘發(fā)排卵的當日(包括誘發(fā)排卵當日)，可導致某些患者內(nèi)源性LH的過早抑制；靈活方案自月經(jīng)周期的第2/3天，使用Gn進行卵巢刺激。當優(yōu)勢卵泡直徑≥14mm時，或者優(yōu)勢卵泡直徑>12mm且血清E2>300pg/ml時開始使用，另外亦可在LH>10IU/L、和/或優(yōu)勢卵泡平均直徑>12mm、和/或血清E2>150pg/mL時開始使用，開始給予思則凱(0.125～0.25mg/日)，持續(xù)整個促性腺激素治療過程至誘發(fā)排卵當日，有利于改善卵巢反應，減少GnRH-ant的用量。GnRH-ant方案的劑量學研究提示固定方案中應用拮抗劑0.25mg在抑制早發(fā)LH發(fā)生及提高種植率方面達到最佳平衡。Meta分析結果提示靈活方案顯著減少GnRH拮抗劑支數(shù)及Gn用量，但其妊娠率略低于固定方案(P>0.05)。需注意：靈活方案開始拮抗劑的時間不宜太晚，如超過促排第8天時給予GnRH-ant，妊娠率顯著降低。GnRH-ant方案抑制效果呈劑量依賴性。因此，對于卵巢低反應人群應權衡拮抗劑添加時機，在避免LH提前升高以及增加獲卵數(shù)之間尋找最佳平衡[7]。

3拮抗劑方案中扳機藥物類型的選擇

hCG扳機是臨床上的常規(guī)用藥，誘發(fā)卵母細胞的最后成熟和促發(fā)排卵。其半衰期長，持續(xù)時間約為7天，能夠刺激卵巢釋放血管活性物質(zhì)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)等多種血管活性因子，在OHSS的發(fā)生中起了關鍵性的作用。高反應人群選擇拮抗劑方案時采用hCG扳機，并不能完全避免OHSS的發(fā)生。OHSS的發(fā)生與hCG扳機劑量密切相關。常規(guī)HCG扳機劑量為5 000～10 000IU。卵巢高反應者，文獻報道2 500～5 000IU是安全有效的扳機劑量[8]。研究表明hCG 5 000IU與10 000IU相比，能夠促進卵子的最后成熟，但并不影響獲卵率、受精率、妊娠率以及活產(chǎn)率。提示適當降低hCG扳機劑量對卵子和胚胎質(zhì)量并無不良影響，但能顯著降低OHSS的發(fā)生率。2013年，耿旭景等回顧性臨床研究表明hCG最低有效劑量為2 000～3 300IU[1]。

拮抗劑方案也可以采用GnRH-a扳機。拮抗劑的特點是競爭性結合垂體細胞表面GnRH受體，并不導致受體的耗竭，使用后即時產(chǎn)生抑制效應，抑制Gn的分泌，對LH的抑制呈劑量依賴性，其抑制作用可以被大劑量的GnRH所逆轉。在拮抗劑周期中，GnRH-a從垂體的GnRH受體上，替換掉GnRH-ant，誘發(fā)了flare-up的FSH和LH峰，模仿了自然周期促性腺激素的上升；模擬排卵前LH峰促成的卵泡和卵母細胞最終成熟和排卵。但此種方法不適用于GnRH-a 降調(diào)節(jié)方案，且GnRH-a扳機比自然LH峰持續(xù)時間短。因此，拮抗劑方案可以選擇GnRH-a扳機，逆轉拮抗劑對垂體的抑制作用，促發(fā)垂體產(chǎn)生LH峰，誘發(fā)卵泡的最后成熟。早發(fā)OHSS的發(fā)生主要與外源性hCG應用相關，既往研究發(fā)現(xiàn)，GnRH-a代替hCG扳機可以顯著降低甚至完全避免早發(fā)型中重度OHSS發(fā)生，但并不能避免妊娠產(chǎn)生的內(nèi)源性hCG導致晚發(fā)型OHSS的發(fā)生。為避免早發(fā)和晚發(fā)OHSS的發(fā)生，可以采用拮抗劑方案聯(lián)合GnRH-a扳機，同時進行全胚冷凍或者卵子冷凍，尤其適用于既往有重度OHSS病史的患者、高危OHSS的卵巢高反應周期以及贈卵的IVF供者。

在拮抗劑方案中，GnRH-a聯(lián)合低劑量hCG雙扳機(1 000～2 500單位)，既能改善單獨GnRH-a扳機導致鮮胚移植周期臨床妊娠率低，同時與單獨hCG扳機相比，可以顯著降低中重度OHSS發(fā)生率[9]。但需要注意的是，雙扳機方案給予了小劑量hCG，不能完全避免中重度OHSS發(fā)生。對于OHSS高風險的周期，單獨予GnRH-a扳機是最安全可靠的措施。

2014年，Cochrane數(shù)據(jù)庫納入14篇RCT研究比較分析GnRH-a扳機和hCG扳機在拮抗劑方案中的應用，Meta分析提示GnRH-a扳機可以顯著降低OHSS發(fā)生率，但與hCG扳機相比，新鮮胚胎移植周期活產(chǎn)率低，流產(chǎn)率高。單獨GnRH-a扳機黃體功能不足，子宮內(nèi)膜容受性降低，影響IVF臨床結局。因此在單獨使用GnRH-a扳機鮮胚移植周期中，需要加強黃體支持：適當添加低劑量hCG或者強化雌孕激素的使用，能夠提高鮮胚移植周期臨床妊娠率。但對于OHSS高危的卵巢高反應患者，黃體支持應避免使用hCG。在卵巢高反應患者中，應用拮抗劑方案可以顯著降低OHSS的發(fā)生率，但不能全避免OHSS的發(fā)生。正確識別和判斷卵巢高反應患者，制定合適的Gn起始劑量，選擇GnRH-a扳機或降低hCG扳機劑量，可以有效的避免中重度OHSS的發(fā)生。因此提示GnRH-ant方案應用GnRH-a扳機建議應用在有卵巢過度刺激風險的患者中，沒有卵巢過度刺激風險的患者仍建議hCG誘發(fā)排卵，仍可獲得與GnRH-a方案相似的妊娠結局。

4拮抗劑方案中黃體支持的選擇

目前，拮抗劑方案的臨床妊娠結局仍無法比擬傳統(tǒng)激動劑方案，如何提高拮抗劑方案的妊娠結局需要更多進一步研究。拮抗劑方案單用GnRH-ant扳機有快速不可逆的溶黃體作用，移植日E2水平明顯下降，嚴重影響黃體功能，如果不采用強化的黃體支持(E2+P)，將導致妊娠率低、流產(chǎn)率高，影響新鮮周期移植成功率。也有研究認為，拮抗劑方案中加強黃體支持，可明顯改善妊娠結局，獲得與激動劑降調(diào)節(jié)方案相似的持續(xù)妊娠率和活產(chǎn)率[10]。

近年來的研究發(fā)現(xiàn)，在使用GnRH-a扳機后給予改良黃體支持方案，改善移植周期結局。改良黃體支持方案1：使用GnRH-a扳機，但在取卵當日(取卵后)追加1 500IU hCG刺激黃體,再給予標準劑量的黃體酮進行黃體支持。方案2：扳機+強化黃體支持，GnRH-a扳機加雌孕激素黃體支持，僅依賴外源性甾體激素的支持。方案3：雙重扳機，即GnRH-a加一個額外低劑量的hCG(1 500IU～2 000IU)扳機，聯(lián)合常規(guī)的黃體支持。

既往有前瞻性隨機試驗，將305例行GnRH-ant方案的患者隨機分為：10 000 IU hCG扳機組及0.5 mg GnRH-a扳機+1 500IU hCG取卵日黃體補救組，結果在獲卵數(shù)、卵成熟、2PN數(shù)、優(yōu)胚率兩組相同。可見GnRH-a扳機取卵日添加1500IU hCG，能獲得與hCG扳機相似的扳機效果，甚至MII卵子數(shù)和2PN數(shù)有升高趨勢。hCG扳機組OHSS發(fā)生率為2%，GnRH-a扳機組無一人發(fā)生OHSS。有研究發(fā)現(xiàn)GnRH-ant扳機使用GnRH-a，未補充hCG，僅添加雌+孕激素，臨床妊娠率顯著降低，可能與GnRH-a扳機導致黃體功能不足，影響子宮內(nèi)膜容受性，單純補充雌、孕激素無法彌補黃體功能不足的危害；而在使用GnRH-a扳機后12小時和35小時分別添加1000 IU和500 IU hCG也仍然無法達到hCG扳機誘發(fā)卵子成熟同樣的妊娠率，提示單獨補充雌孕激素或僅添加小劑量hCG均無法取代hCG黃體支持的優(yōu)勢。

5拮抗劑方案的妊娠結局

GnRH-ant方案與常規(guī)方案在促排卵結局、妊娠率上具有爭議。最新循證醫(yī)學數(shù)據(jù)庫Meta分析結果提示：與長方案相比，GnRH-ant方案顯著降低OHSS發(fā)生率，但其臨床妊娠率顯著下降，活產(chǎn)率、繼續(xù)妊娠率有降低的趨勢，流產(chǎn)率無差異。對于贈卵周期的研究提示，拮抗劑方案其胚胎發(fā)育，胚胎著床率及繼續(xù)妊娠率與長方案無明顯差異，同時GnRH-ant方案組子宮內(nèi)膜基因表達譜更接近于自然狀態(tài)[11]。部分中心數(shù)據(jù)顯示與長方案相比，雖然拮抗劑方案降低新鮮周期妊娠率，但不影響復蘇周期妊娠率影響，因而認為拮抗劑并不影響胚胎質(zhì)量，其對妊娠率的影響可能與子宮內(nèi)膜容受性有關[12]。在對卵巢低反應人群中研究分析發(fā)現(xiàn)與常規(guī)短方案相比，拮抗劑方案更有助于提高臨床妊娠率，可能與GnRH-ant并無過度降調(diào)節(jié)的垂體抑制相關。

綜上所述，拮抗劑方案較常規(guī)方案具有不同的優(yōu)勢，作為公認較為安全、方便的卵巢刺激方案，GnRH-ant已成為臨床常備方案，但目前國內(nèi)拮抗劑方案妊娠結論結局不容樂觀，尚處于摸索、總結、完善、優(yōu)化階段，能否全面取代長方案需經(jīng)過時間的考驗。

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[專業(yè)責任編輯：王興嶺]

[收稿日期]2015-12-03

[基金項目]國家自然科學基金(812707010,81471457)

[作者簡介]張娟(1981-)，女，主治醫(yī)師，碩士在讀，主要從事生殖醫(yī)學方面的工作。

[通訊作者]凌秀鳳，主任醫(yī)師/碩士生導師。

doi:10.3969/j.issn.1673-5293.2016.04.042

[中圖分類號]R321-33

[文獻標識碼]A

[文章編號]1673-5293(2016)04-0543-03

Clinical application of GnRH antagonist protocol in patients undergoning in vitro fertilization-embryo transfer

ZHANG Juan, DONG Li, LING Xiu-feng

(Reproductive Medical Center, Nanjing Maternal and Child Health Care Hospital Affiliated to Nanjing Medical University,Jiangsu Nanjing 210004, China)

[Abstract]With the development of in vitro fertilization-embryo transfer (IVF-ET) technique, the application of GnRH antagonist(GnRh-ant) protocol increases adually. GnRH-ant protocol has more advantages than conventional protocol, and it can assist the trigger of GnRH agonist. GnRH antagonist protocolcan effectively reduce the occurrence of ovarian hyperstimulation syndrom (OHSS).

[Key words]in vitro fertilization-embryo transfer (IVF-ET); cycle; GnRH antagonist protocol;clinical pregnancy

【生殖健康研究】