正交試驗超聲提取滿山紅中黃酮類物質的工藝研究

唐志國　(綏化市食品藥品檢驗檢測所，黑龍江綏化 152061)

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正交試驗超聲提取滿山紅中黃酮類物質的工藝研究

唐志國(綏化市食品藥品檢驗檢測所，黑龍江綏化 152061)

滿山紅(FoliumRhododendridaurici)又名達子香，為杜鵑花科屬植物安杜鵑(RhododendrondauricumL.)的干燥葉，主產于東北地區，具有止咳、祛痰的功效，用于治療急、慢性支氣管炎、哮喘等病癥[1]。從滿山紅已分離得到的化學成分主要有黃酮類和揮發油等[2-4]。

目前國內關于滿山紅中黃酮物質提取工藝的研究文獻報道較少，多采用傳統工藝乙醇回流的方法進行提取，該方法提取時間較長[5]。超聲波提取是基于超聲波的空化作用用來加速物質分子盈動的頻率和速度，增加溶劑穿透能力，以提高藥物溶出速度和次數，從而有利于植物有效成分的提取，而它的次數效應，如機械振動、乳化、擴散、擊碎等也能加速欲提取成分的擴散釋放并充分與溶劑混合，有利于植物中有效成分的提取，超聲波提取還避免了高溫加熱對有效成分的破壞[6-7]。筆者在此采用正交設計超聲波提取的方法對滿山紅中黃酮的提取工藝進行優選，以原料粒度、料液比、提取功率、提取溫度等為考察因素，采用液相方法測定金絲桃苷、槲皮素、山奈酚和杜鵑素4個黃酮類活性成分的總含量。

1材料與方法

1.1儀器Waters2695高效液相色譜儀(2996 DAD檢測器、Empower工作站)；KQ-500DE型數控超聲波清洗器(昆山市超聲波儀器有限公司)；METTLER AE240電子天平(梅特勒儀器公司)；RE52-86A旋轉蒸發儀(上海亞榮生化儀器廠)。

1.2試藥滿山紅干燥葉(產地伊春)；金絲桃苷(批號111521-201406)、槲皮素(批號100081-200907)、山柰酚(批號110861-201209)、杜鵑素(批號110850-200604)均購自中國食品藥品檢定研究院，純度均大于98%；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

1.3方法

1.3.1滿山紅中黃酮類物質含量測定。

1.3.1.1色譜條件。Agilent zorbax SB C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相為甲醇(A)-0.02%磷酸水(B)，梯度洗脫，0～10 min(40%～45%A)、10～18 min(45%～50%A)、18～35 min(50%～80%A)、35～37 min(80%～90%A)、37～60 min(90%A)、60～65 min(90%～40%A)；洗脫時間為65 min；檢測波長0～30 min 為360 nm，30～65 min為299 nm；流量1.0 ml/min；柱溫為25 ℃，進樣量20 μl。

1.3.1.2標準曲線及線性范圍。準確稱取金絲桃苷、槲皮素、山奈酚和杜鵑素對照品適量，加甲醇制成240、70、20、80 μg/ml的混合溶液，分別進樣10、20、30、40、50 μl，按“1.3.1.1”色譜條件作HPLC 分析。以峰面積對進樣量進行回歸處理，得金絲桃苷、槲皮素、山奈酚和杜鵑素的線性回歸方程和線性范圍。

1.3.2樣品測定。精密吸取20 μl樣品溶液，在“1.3.1.1”項色譜條件下測定，記錄峰面積，分別計算相應黃酮類物質的含量，再計算總量。

1.3.3正交試驗。以滿山紅中4種黃酮類物質的含量的總量為指標，在固定提取溶劑為80%乙醇、浸漬時間為2 h和提取時間為30 min等參數的條件下，分別以提取功率、料液比、提取溫度和原料粒度為主要因素及不同水平進行L9(34)正交設計(表1)，篩選最佳工藝。

2結果與分析

2.1標準曲線按照“1.3.1.2”方法操作，得出金絲桃苷、槲皮素、山奈酚和杜鵑素的線性回歸方程和線性范圍，由表2可知，4種黃酮類物質的標準曲線線性良好，采用高效液相色譜法同時測定金絲桃苷、槲皮素、山奈酚和杜鵑素是可行的，該方法簡便易行。

表1　正交試驗因素及水平

表2　4種黃酮標準曲線

2.2正交試驗結果由表3可知，提取功率的差值最大，其次是提取溫度，故對黃酮類物質提取效果的影響大小順序是A> C > D > B，綜合考慮，選擇最佳方案為A2B2C2D2，即粒度為65目的原料在50 ℃的80%乙醇(料液比1∶25)中浸漬2 h，超聲功率80 W提取30 min。

表3　正交試驗結果

3討論

超聲提取滿山紅中黃酮類物質時，隨著提取功率的增大，收率也隨之增大，這是由于超聲波可使原料質點在其傳播空間內進入振動狀態，產生空化現象。強化溶質擴散，其能量不斷地被原料質點吸收而變成熱能，使溶劑的自身溫度升高且超聲波空化現象對原料可起到破碎作用，使得不宜被浸出細胞壁的化學成分可以與溶劑充分接觸。但黃酮類化合物穩定性差，隨著超聲波的功率增高，空化效應增強，提取溶劑溫度升高會加快提出的黃酮物質部分被氧化的速度，目標產物的收率會降低；且功率過高，破壁程度越高，雜質溶出的也在增多，給后續的分離帶來困難。

料液多可以使黃酮類物質更充分的溶出，但隨著料液比繼續增加，其收率會下降，即料液比過大，雜質溶出過多，進而消耗更多能量和時間，同時也會增加超聲波破碎細胞的阻力，使細胞破碎程度下降，降低提取率；如果料液比過小，沒有足夠的溶劑帶出已經附著在原料顆粒表面黃酮類物質，也會使提取率降低。

該研究采用HPLC法測定金絲桃苷、槲皮素、山奈酚和杜鵑素4種黃酮物質總量作為收率指標，使目標更加具體和明確，結果較傳統工藝縮短了提取時間，收率較高。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會．中華人民共和國藥典：2010年版一部[S]．北京：中國醫藥科技出版社，2010.

[2] 付曉麗，張立偉，林文翰，等.滿山紅化學成分的研究[J].中草藥，2010，41(5)：704-707.

[3] 劉永湰，傅豐永，謝昌曦，等.滿山紅化學成分的研究(第Ⅰ報)[J].化學學報，1976，34(3)：211-220.

[4] 傅豐永，劉永湰，梁曉天，等.滿山紅化學成分的研究( 第Ⅱ報)[J].化學學報，1976，34(3)：223-227.

[5] 趙璽，李連闖，車文實，等.滿山紅研究進展[J].黑龍江醫藥，2012，25(5)：690-692.

[6] 吳昊，宗志敏，石金龍.超聲波協同酶法提取銀杏黃酮的工藝研究[J].中國資源綜合利用，2012，30(11)：26-29.

[7] 歐陽娜娜，李湘洲，羅正，等.超聲波提取銀杏黃酮的傳質動力學研究[J].時珍國醫國藥，2012，23(5)：1155-1156.

摘要[目的]優選滿山紅中黃酮提取的最佳工藝。[方法]采用正交試驗法對滿山紅中黃酮的提取工藝進行優選，以原料粒度、料液比、提取功率、提取溫度等為考察因素，采用液相方法測定4個黃酮類活性成分(金絲桃苷、槲皮素、山奈酚和杜鵑素)的總含量。[結果]最佳工藝為粒度為65目的原料在50 ℃的80%乙醇(料液比1∶25)中浸漬2 h，超聲功率80 W提取30 min。[結論]該工藝合理，有效成分提取效率高。

關鍵詞正交試驗；滿山紅；黃酮類化合物；超聲波；提取工藝

Study on Extraction Technology of Flavonoids fromFoliumRhododendridaurici with Ultrasonic by Orthogonal Test

TANG Zhi-guo(Institute for Food and Drug Control of Suihua, Suihua, Heilongjiang 152061)

Abstract[Objective] Study on the optimum conditions for flavonoids from Folium Rhododendri daurici with ultrasonic extraction. [Method] The optimum extraction of flavonoids from Folium Rhododendri daurici was selected by orthogonal test, raw material size, the material liquid ratio, the extraction power, the extraction temperature and ultrasonic time as the examination factors, 4 flavonoids (Hyperoside, Quercetin, Kaempferol and Farrerol) of the total content as the index were analyzed by HPLC. [Result] The optimum extraction process conditions were as follow: the particle size of raw material was 65 meshes, soaked in that 50 ℃ 25 times amount of 80% ethanol for 2 h, and extracting for 30 minutes by supersonic power 80 W’s wave. [Conclusion] The optimum extraction process is reliable, with higher extracting ratio of the active components.

Key wordsOrthogonal test; Folium Rhododendri daurici; Flavonoids; Ultrasonic; Extraction process

收稿日期2015-10-08

作者簡介唐志國(1981-)，男，黑龍江綏化人，主管藥師，從事藥品檢驗及質量研究工作。

中圖分類號S 567

文獻標識碼A

文章編號0517-6611(2015)32-218-02