血瘀證與NF-kB信號通路的相關性探討※

● 胡小勤 周 蓓 王 強 吳燕春

血瘀證與NF-kB信號通路的相關性探討※

● 胡小勤*周 蓓 王 強 吳燕春

血瘀證見于多種疾病，是一種綜合性的病理狀態，形成機理非常復雜。研究證明，血瘀證形成與炎癥反應、免疫失調關系密切。NF-κB通過調控眾多靶基因的轉錄表達而在免疫應答、炎癥反應等許多生理學過程中發揮重要作用。血瘀證與NF-κB信號通路從理論和實驗中的研究結果表明：NF-κB信號通路在血瘀證形成中扮演重要角色。血瘀證與NF-κB信號通路的相關性探討，將進一步揭示血瘀證炎癥、免疫機制的分子生物學基礎，深化血瘀證形成機理的研究。

血瘀證 NF-κB信號通路 理論探討

證候本質的研究一直是中醫基礎理論研究的重要內容。血瘀證見于多種疾病，是一種綜合性的病理狀態，形成機理非常復雜。研究證明，血瘀證形成與炎癥反應、免疫失調關系密切[1]。現代醫學認為，NF-κB(核因子-κB)信號通路在機體的免疫應答、炎癥反應等方面發揮重要作用[2，3]。信號通路的研究對象是機體的調控網絡，是整體觀指導下的生物分子間相互作用及其傳遞規律，符合中醫學證候復雜性[4]的特點。血瘀證與NF-B信號通路雖然分屬中醫學和分子生物學兩個理論體系，但都與炎癥、免疫密切相關。

1 血瘀證與炎癥免疫

近年來，血瘀證一直是中醫學和中西醫結合研究中較為活躍的領域。血瘀證與炎癥反應及免疫失調密切相關，相關研究已有大量文獻報道。

邵愛紅等[5]通過檢測血清樣本超敏C反應蛋白(hs-CRP)與急性心肌梗死(AMI)患者血瘀證的相關性，結果發現AMI患者的血清hs-CRP表達較對照組顯著升高，且血瘀證組高于非血瘀證組；血瘀證與hs-CRP水平呈正相關(r=0.239，P<0.05)，認為AMI患者具有一定程度炎性反應而在血瘀證中表達更為明顯。

陳嬋等[6]探討了氣虛血瘀證與單核細胞(PBMC)的相關性及其可能的炎癥機制，通過復制心梗氣虛血瘀證動物模型，采用半定量RT-PCR技術檢測模型組及假手術組動物術后第7天、14天、28天外周血單核細胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1的表達情況。結果發現不同時間點模型組動物單核細胞TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1的表達均高于假手術組動物(P<0.05)。認為氣虛血瘀證(心肌缺血)與單核細胞活化密切相關，可能成為該證候重要的微觀指標。包怡敏等[7]通過皮下注射鹽酸腎上腺素復合冰水浴造成大鼠血瘀證模型。發現模型組血清細胞因子TNF-α濃度與正常對照組比較顯著升高，差異有統計學意義(P<0.001)。江泳等[8]將受試者分為陰虛熱盛證、濕熱困脾證、氣陰兩虛證、陰陽兩虛證4組，每組之中再分成兼血瘀證和無血瘀證兩個亞組，檢測血漿可溶性細胞間黏附分子-1(sICAM-1)等細胞因子含量。結果兼血瘀證組sICAM-1濃度顯著大于無血瘀證組(P<0.05)。認為血瘀證貫穿于糖尿病始終，且與血管內皮細胞功能障礙具有相關性。

以上研究表明血瘀證與CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、sICAM-1等炎性因子存在密切相關性。

血瘀證與免疫功能失調關系密切。劉雅等[9]發現氣虛血瘀證大鼠外周血T細胞亞型計數以CD8+T的減少更為顯著，3H-TdR摻入量顯著降低，腎上腺皮質功能先亢進而后又轉入了抑制狀態。認為氣虛血瘀證動態演變過程中始終存在以T細胞數量、T細胞轉化能力以及HPA軸免疫調節功能異常為主的免疫功能失衡。張博生等[10]對缺血性中風血瘀證患者的紅細胞免疫功能進行了測定。結果表明，患者RBC-C3bRR明顯低于正常，而RBC-ICR則明顯高于正常，均有非常顯著意義。認為缺血性中風血瘀證的發病與紅細胞免疫功能減退有密切關系。

以上研究表明：血瘀證與外周血T細胞數量、T細胞轉化能力、HPA軸免疫調節功能異常及紅細胞免疫功能減退等相關。

馬曉娟等[11]利用表達譜芯片技術，按照單通道芯片差異基因的篩選原則，分別篩選與冠心病血瘀證和非冠心病血瘀證相關的差異基因，兩者共同的部分認為是血瘀證相關的差異基因。結果發現與炎癥免疫相關的基因有5個，5條通路涉及炎癥免疫反應。認為炎癥和免疫反應在一定程度上介導了血瘀證的發生發展。

2 NF-κB信號通路與炎癥免疫

NF-κB是一類能特異性地識別結合DNA的Rel類蛋白質二聚體轉錄因子。NF-κB家族有5個成員，最常見的形式是由p65和p50組成的異源二聚體。在靜息細胞中，NF-κB與抑制性蛋白IκBs結合形成復合物，并被滯留于細胞質中而處于非活化狀態；當細胞受到各種胞內外刺激時，IκBs被迅速地降解，NF-κB得以釋放并進入細胞核，從而發揮其轉錄調節功能。NF-κB通過調控眾多靶基因的轉錄表達而在免疫應答、炎癥反應等許多生理學過程中發揮重要作用[12]。

3 血瘀證與NF-κB信號通路

信號轉導是當前生命科學研究的熱點[13]。目前，已有學者開始通過分析證候與信號轉導通路之間的相關性來研究證候實質。如李煒弘等[14]利用第一代功能分類基因芯片技術分析了老齡腎陽虛證與Wnt/β-catenin信號通路的相關性。

關于血瘀證與NF-κB信號通路的相關性，尚未見詳細報道。目前有少量文獻報道了血瘀證與NF-κB蛋白表達之間的關系。如黃政德等[15]發現血瘀證心肌缺血再灌注損傷(IRI)兔心肌細胞NF-κB蛋白表達顯著增高。本課題組在以往的研究中發現，血瘀證大鼠血管內皮細胞黏附分子ICAM-1、VCAM-1及炎癥酶iNOS表達增高[16]，而這些炎癥細胞因子和炎癥酶的基因均為NF-κB的靶基因[17]。

血瘀證與NF-κB信號通路從理論和實驗中的研究結果表明：NF-κB信號通路在血瘀證形成中扮演重要角色。血瘀證與NF-κB信號通路的相關性探討，將進一步揭示血瘀證炎癥、免疫機制的分子生物學基礎，深化血瘀證形成機理的研究，也為尋找新型活血化瘀藥物作用靶點提供實驗依據，同時，將為中醫學證候實質研究提供方法學上的借鑒，具有重要的理論意義和應用價值。

[1]李林森，田金洲，蔡藝靈，等.血瘀證生物學基礎研究進展[J].山東中醫雜志，2010，29(12)：863-865.

[2]ZHANG YiAn，WEI Zheng，LI Jing，et al.Molecular pathogenesis of lymphomas of mucosa-associated lymphoid tissue-from(auto)antigen driven selection to the activation of NF-kB signaling[J].Life Sciences，2015，58(12)：1246-1255.

[3]Li Huang，Changjiang Weng.Encephalomyocarditis Virus 3C Protease Attenuates Type I Interferon Production and Disrupts TANK Inhibition Effect on TRAF6-mediated NF-kB Signaling through Cleavage of TANK[J].Scientific Program.

[4]郭 蕾，王學偉，王永炎，等.論高維高階與證候的復雜性[J].中華中醫藥雜志，2006，21(2)：76-78.

[5]邵愛紅，齊 新，賈文軍，等.急性心肌梗死血瘀證患者纖維蛋白原、超敏C反應蛋白與補體系統表達變化[J].天津中醫藥大學學報，2016，35(4)：234-237.

[6]陳 嬋，郭淑貞，王 偉，等.氣虛血瘀證(心肌缺血)大鼠模型單核細胞炎性因子表達的相關性探討[J].中醫藥學報，2010，38(4)：16-19.

[7]包怡敏，趙妍，李梅，等.銀杏酮酯對急性血瘀證大鼠血液流變學和免疫功能調控[J].中國中醫基礎醫學雜志，2013，19(8)：904-906.

[8]江 泳，徐蓉娟，李 紅，等.血瘀證與血管內皮功能障礙的關系[J].遼寧中醫藥大學學報，2013，15(6)：57-59.

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[10]張博生，徐 運.缺血性中風血瘀證紅細胞免疫功能研究[J].遼寧中醫雜志，1995，22(12)：529-530.

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[12]Cheng Weiyang，Yuezhi Lee，Ya-Qi Qiu，et al.Study on the upstream Effectors of NF- B/PKC/JNK and PI3K/PDK1/PP2A/eEF2 Pathways for Tylophorine Elevated c-Jun Protein Level in Carcinoma Cells[J].National Health Research Institutes，Miaoli.

[13]Bang Jiangfang，Jun Yishen，Hua Zhang；et al.Effect of emodin on mobility signal transduction system of gallbladder smooth muscle in Guinea pig with cholelithiasis[J].Asian Pacific Journal of Tropical Medicine 2016，9(10)：991-996.

[14]姜曉琳，張立德.脾氣虛證模型大鼠中BNP介導的cAMP- PKA信號通路對bFGF表達的影響[J].中國病理生理雜志，2016，32(2)：251-255.

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[16]胡小勤，陳利國，屈援.生化湯對血瘀證大鼠血管內皮細胞黏附分子表達的影響[J].中成藥，2006，28(9)：1330-1333.

[17]林 瀅，林 青.NF-κB信號通路在腎移植排斥中作用的研究進展[J].細胞與分子免疫學雜志，2014，30(12)：1341-1343.

廣西壯族自治區中醫藥管理局中醫藥科技專項課題(GZKZ10-039)；廣西中醫藥大學重點課題(ZD2010005)

胡小勤，男，醫學博士，教授。主要從事血瘀證臨床和基礎研究。

廣西中醫藥大學(530001)