高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應用

潘若凡哈爾濱市譽衡藥業股份有限公司

高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應用

潘若凡
哈爾濱市譽衡藥業股份有限公司

目的：探討高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應用。方法：對高效液相色譜法在頭孢他美酯含量、有關物質、聚合物及體內藥代動力學和生物等效性研究的應用情況進行綜述，并對未來發展趨勢進行探討。結果：高效液相色譜法廣泛應用于頭孢他美酯藥物分析工藝研究、質量控制過程、體內藥代動力學、生物等效性研究中。結論：隨著新型固定相、檢測器的研究以及聯用技術的發展,高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應用前景廣闊。

高效液相色譜法；抗生素；藥物分析

高效液相色譜法是藥物分析中常用的一種色譜分析方法，它采用規則均勻的顆粒(通常直徑在10μm以下)作為固定相，通過高壓輸液泵輸送流動相，利用樣品中不同的組分被流動相攜帶移動的速度不同從而被分離檢出。高效液相色譜法自1985年被收錄于《中國藥典》后,經過三十年的發展，在藥品檢驗過程中的作用日益顯著，已成為藥品檢驗中最為重要的分析方法[1]。本文以頭孢他美酯為研究對象探討高效液相色譜法在抗生素類藥物分析中的應用情況，并對未來發展趨勢進行探討。現報道如下：

1.高效液相色譜法在頭孢他美酯藥物分析中的應用

與經典色譜分析方法相比分析耗時短，分離效率大為高。隨著高靈敏檢測器的開發和廣泛應用，檢測靈敏度大為提高，為實現藥品的快速、高效、準確的質量控制奠定了基礎。高效液相色譜法廣泛應用于頭孢他美酯藥物分析工藝研究、質量控制過程、體內藥代動力學、生物等效性研究中。

1.1 含量、有關物質

頭孢他美酯是以3-乙酰氧基-7-氨基頭孢烷酸為原料，與氨噻肟乙酰氯經過縮合后，再水解得到頭孢他美，頭孢他美與特戊酸溴甲酯發生酯化反應生成頭孢他美酯[2]。生產合成工藝較為繁瑣，反應過程受到反應溫度、酸堿度、時間影響，導致底物的分解、副反應的發生，致使所得產品的含量、雜質種類、聚合物情況復雜。《中國藥典》中鹽酸頭孢他美酯采用等度洗脫法進行有關物質檢查，王建[3]等學者研究發現改用梯度洗脫法，采用極性更大的流動相洗脫2 min后逐步調整不同極性的流動相比例，至乙腈-甲醇-水-磷酸鹽緩沖液(540‥142.5‥250‥22.5)維持15 min，大量在《中國藥典》條件下不能出峰的極性小的雜質得到充分的洗脫和檢出。此外進行檢測對鹽酸頭孢他美酯，7-ADCA、頭孢他美酸、AE活性酯等合成過程中的中間產物，酸堿破壞、氧化破壞、高溫等分解產物等雜質在233nm波長處均有相似的紫外吸收，使用二極管陣列檢測器檢測靈敏度更高。

1.2 聚合物的測定

采用分子排阻色譜法對頭孢他美酯中的高分子量聚合物進行檢查，根據高分子量聚合物的分子量大小選擇不同孔徑的葡聚糖凝膠色譜柱，藥物分子量較小，隨流動相進入色譜柱后進入滯留于固定相表面的孔穴中,在色譜柱中所走的途徑較長,保留時間也較長。聚合物分子空間尺寸較大、隨流動相進入色譜柱后不會進入固定相表面的孔穴中而直接通過色譜柱，保留時間短。采用高效液相色譜法，能夠實現體積不同的分子的分離和測定。

1.3 體內藥代動力學和生物等效性研究

目前臨床上廣泛采用高效液相色譜法進行血藥濃度監測以及藥物體內代謝產物的含量測定，用于體內藥代動力學和生物等效性研究。林茵[4]等學者選取健康的志愿者16例，所有實驗者禁食12h后于次日清晨空腹口服鹽酸頭孢他美酯0.5g，分別于用藥前及用藥后定時抽取靜脈血約3ml，分離血清，精密量取待測血漿0.2ml，加入6%的高氯溶液0.2ml，振蕩后離心，取上清液作為供試品溶液，注入高效液相色譜儀，通過測定服藥后不同時間段內的血漿中頭孢他美酯活性物的含量分析藥物體內代謝過程及時間，為臨床合理用藥提供數據支持。

2.HPLC及其聯用技術在藥物分析中的應用

隨著研究的深入，高效液相色譜儀的輸液泵、色譜柱、檢測器均有了新的發展,特別是檢測器的發展,隨著各個部件的改進，方法的靈敏度不斷提升。如：小角度激光散射檢測器(LALLSPD)可以用于多糖、蛋白質類高聚物的高分子質量物質及分布的快速檢測,且不需要標準品對照。與此同時多種聯用技術的發展為高效液相色譜法在藥物分析中的應用帶來了新的生機。如高效液相色譜-熱噴霧-質譜聯用，用于同一樣品溶液中不同組分的同步分離和測定，極大的提高了檢驗效率，樣品量及流動相的消耗大大下降；高效液相色譜-質譜聯用和高效液相色譜-核磁共振聯用在藥物雜質檢測中，能夠對準分子離子進行多級裂解，從而提供化合物的相對分子量以及豐富的碎片信息[5]，實現結構信息的準確分析，且分離檢驗過程中不受流動相中的緩沖鹽溶液的干擾。特別是在雜質研究和藥物動力學研究階段，通常雜質含量以及血藥、尿液等體液樣本中藥物濃度很低，分析難度大且干擾多，液質聯用技術能夠快速準確地測定藥物分析中的痕量物質[6]。在體內藥物代謝過程臨床用藥監測的研究中有著廣闊的發展前景，監測血藥濃度的同時對其相關的代謝產物進行確證，操作簡便快捷，靈敏度高。

3.討論

抗生素的發現和使用開啟了人類對抗感染的新篇章，挽救了無數人的生命。天然抗生素的種類較少且均已產生了耐藥性，人工合成的抗生素已成為主導。每年有數以萬計的患者死于與之相關的藥源性疾病，藥品的安全性逐漸引起人們的重視。這些不良反應一方面與藥物本身的藥理活性有關，更主要的是藥品中所存在的毒性雜質密切相關。抗生素的分離、分析是藥物分析中較困難的領域。微生物法、分光光度法、化學方法所需時間較長、專一性較差，正逐漸被取代。采用高效液相色譜法進行抗生素類藥物分析具有快速、簡便、靈敏、準確的特點,隨著今后各種新型固定相、檢測器的研究和開發，聯用技術的不斷發展,使該方法抗生素類藥物分析中的應用不斷加大。

[1]孫會敏,田頌九.高效液相色譜法簡介及其在藥品檢驗中的應用[J].藥學研究,2011,30(1):38-42.

[2]唐曉光.頭孢他美酯的合成研究[J].赤峰學院學報:自然科學版,2012(12):47-48.

[3]王建,王丹丹,洪利婭.HPLC法測定鹽酸頭孢他美酯中的有關物質和聚合物[J].藥物分析雜志,2015(2):295-300.

[4]林茵,覃逢超,伍俊妍.頭孢他美酯藥物的體內藥代動力學研究[J].中國醫藥指南,2012(25):469-470.

[5]高佳,程曉昆,等.液質聯用技術的應用與發展[J].當代化工研究,2016(5):86-87.

[6]王磊君,李鋼,鄭賽晶,等.高效液相色譜-質譜聯用技術同時測定人體尿液中11種代謝物[J].分析化學,2015(1):121-126.

潘若凡（1987-），女，漢，吉林長春人，碩士研究生，職稱：中級（工程師），作者單位：哈爾濱市譽衡藥業股份有限公司，研究方向：藥品檢驗。