鵝病的血清學(xué)檢驗(yàn)

殷劍 （重慶市長壽區(qū)鳳城街道畜牧獸醫(yī)站 401220)

鵝病的血清學(xué)檢驗(yàn)

殷劍 （重慶市長壽區(qū)鳳城街道畜牧獸醫(yī)站 401220)

鵝病的血清學(xué)檢驗(yàn)也是獸醫(yī)臨床工作中常采用的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。包括凝集試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)等。

1 凝集試驗(yàn)

凝集反應(yīng)具有重要的實(shí)踐意義，利用已知抗原 （稱為凝集原）檢查未知抗體 （稱為凝集素）；也可用已知抗體診斷未知抗原 （如被檢病料中分離的未知病菌），從而達(dá)到鑒定抗體 （或抗原）和診斷疾病的目的。

1.1 玻板凝集試驗(yàn)

以大腸桿菌為例，用吸管吸取大腸桿菌相應(yīng)的抗體1滴（0.05ml），滴在玻板上。用接種環(huán)通過無菌方法挑取待檢大腸桿菌少許，放在玻板上，與抗體混勻。在2min內(nèi)判定結(jié)果，同時(shí)做陽性、陰性對(duì)照。結(jié)果判定：2min內(nèi)出現(xiàn)顆粒狀或塊狀凝集者為陽性反應(yīng)；在2min內(nèi)不出現(xiàn)凝集者為陰性反應(yīng)。

1.2 凝集試驗(yàn)用于細(xì)菌的血清群和型的鑒定

以檢測(cè)沙門氏菌為例。

1.2.1 分群

取一張潔凈玻片，取1滴 （0.05ml）沙門氏菌多價(jià)O血清 （A～F群）至玻片上。再用接種環(huán)挑取疑為沙門氏菌的純培養(yǎng)物少許，與玻片上的多價(jià)O血清混勻，再稍動(dòng)玻片。若在2min內(nèi)出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，即可初步確定該菌為沙門氏菌。同時(shí)，用生理鹽水做對(duì)照，以免由于細(xì)菌的自凝而判斷錯(cuò)誤。被A～F多價(jià)O血清凝集者，依次用O4、O3、O10、O7、O8、O9、O2和O11因子血清做凝集試驗(yàn)。視其被哪一群O因子血清所凝集，則確定被檢沙門氏菌為該群的沙門氏菌。

1.2.2 定型

菌群決定后，用該群所含的各種O因子血清和被檢菌做玻片凝集試驗(yàn)，以確定其含哪些O抗原。同理確定其H抗原。根據(jù)檢出的O和H抗原列出被檢菌的抗原式，查對(duì)抗原表即可知被檢菌為哪種沙門氏菌。例如，某一菌的O抗原為O1、O4、O5、O12，而H抗原為i：1，2，其抗原結(jié)構(gòu)式為1，4，5，12：i：1，2，查知這個(gè)菌為鼠傷寒沙門氏菌。

2 血凝試驗(yàn)與血凝抑制試驗(yàn)

某些病毒表面具有凝集動(dòng)物紅細(xì)胞的物質(zhì)，稱之為血凝素。獸醫(yī)臨床上能凝集動(dòng)物紅細(xì)胞的病毒有鵝副黏病毒、流感病毒等。對(duì)新分離的這些病毒材料，可用血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)、血細(xì)胞吸附和吸附抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、空斑減數(shù)試驗(yàn)和熒光抗體技術(shù)等方法加以鑒定。但迄今為止，血凝試驗(yàn) （HA）和血凝抑制試驗(yàn) （HI）仍是一種快速準(zhǔn)確的傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室手段。

以鵝副黏病毒為例介紹血凝試驗(yàn)與血凝抑制試驗(yàn)的操作方法，使用的器材為V形96孔血凝板。

2.1 血凝試驗(yàn) （HA)

鵝副黏病毒可以凝集多種動(dòng)物紅細(xì)胞，但有的凝集性能不夠穩(wěn)定，故通常多采用雞的紅細(xì)胞。被檢材料可用含毒雞胚尿囊液，或含毒細(xì)胞培養(yǎng)液 （要凍融2～3次，使細(xì)胞破裂釋出病毒）。操作方法：將各種試驗(yàn)材料加入各孔中，混合均勻，置于室溫 （20～30℃）或37℃10min。每5分鐘觀察一次，以對(duì)照孔的紅細(xì)胞完全沉淀為準(zhǔn)，開始判定結(jié)果。或置于18～22℃中45～60min后觀察結(jié)果。能夠使雞紅細(xì)胞發(fā)生完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)，稱為該病毒的血凝滴度。能夠使雞紅細(xì)胞完全凝集的最高稀釋倍數(shù)的病毒液作為一個(gè)血凝單位。在做血凝抑制試驗(yàn)時(shí)，病毒液需含4個(gè)血凝單位量的病毒。

2.2 血凝抑制試驗(yàn) （HI)

要檢測(cè)抗副黏病毒血清的效價(jià)，必須在利用血凝試驗(yàn)測(cè)定出4個(gè)血凝單位病毒的基礎(chǔ)上進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)。血凝抑制試驗(yàn)的操作方法與血凝試驗(yàn)操作方法類似。凡能使4個(gè)血凝單位的病毒凝集紅細(xì)胞的作用完全受到抑制的血清最高稀釋倍數(shù)，稱為血凝抑制價(jià) （血凝抑制滴度）。由于血凝抑制試驗(yàn)通常用2倍比法進(jìn)行稀釋，因此其結(jié)果可以表示成以2為底數(shù)的負(fù)對(duì)數(shù)。如陽性血清的效價(jià)為6lg2，是指在稀釋到第6孔可以完全抑制4個(gè)血凝 （HA）單位病毒的凝集作用；也可表示陽性血清的血凝抑制 （HI）效價(jià)為1:64。

1%雞紅細(xì)胞的制備：①用滅菌注射器通過翅靜脈采抗凝血1ml（抗凝劑使用3.8%枸櫞酸鹽）；②將抗凝血放入離心管中，并加入10ml滅菌生理鹽水，輕輕混勻，切勿用力吹打，以免紅細(xì)胞破裂；③用低速離心機(jī)以1500轉(zhuǎn)/min離心3min后，小心地吸去上清液；④管底的紅細(xì)胞用10ml滅菌生理鹽水輕輕混勻，再離心，如此重復(fù)3次，用生理鹽水配制成1%的紅細(xì)胞懸液，使用前應(yīng)輕輕吹打混勻。