不同劑型銀杏葉制劑的溶出度研究

2016-01-25 03:21:20齊惠珍周霞瑾王明霞田培虹

河北醫(yī)藥 2015年16期

齊惠珍　周霞瑾　王明霞　田培虹

不同劑型銀杏葉制劑的溶出度研究

齊惠珍周霞瑾王明霞田培虹

【摘要】目的比較三個廠家不同劑型銀杏葉制劑總黃酮醇苷的溶出度。方法本課題采用HPLC法測定3種劑型銀杏葉制劑總黃酮醇苷的溶出度。色譜柱為NOVAPAK C18柱(3.9mm×150mm，5 μm)。流動相為甲醇－0.4%磷酸溶液(50∶50)，流速1.0ml/min，檢測波長360 nm，柱溫35℃，進樣量10 μl。溶出度的測定采用轉(zhuǎn)籃法，實驗數(shù)據(jù)按威布爾分布模型計算。結(jié)果不同劑型銀杏葉制劑的溶出度有明顯差異。銀杏葉分散片的溶出度優(yōu)于薄膜衣片劑和軟膠囊，分別為99.73%、98.35%、95.02%，其中，T50最大的是最小的11.1倍。結(jié)論銀杏葉分散片劑、薄膜衣片劑、軟膠囊劑的體外溶出度存在較大差異，這也是臨床反映的不同廠家不同劑型的銀杏葉制劑療效不穩(wěn)定的因素之一。

【關(guān)鍵詞】銀杏葉薄膜衣片;銀杏葉分散片;銀杏葉軟膠囊;總黃酮醇苷

【中圖分類號】R 917.4

【文獻標識碼】A

【文章編號】1002－7386(2015)16－2519－03

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.16.041

收稿日期:(2015－02－15)

項目來源:河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點課題(編號:20100419)

作者單位: 050011石家莊市，河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院藥品科

銀杏葉制劑是一種天然植物提取物制劑，主要活性成分為黃酮類化合物和銀杏總內(nèi)酯，作用于心腦和外周末梢血管系統(tǒng)，改善末梢血液循環(huán)和促進血液運行，具有活血化瘀、通絡(luò)舒脈功效，臨床用于治療血瘀型腦動脈硬化引起的眩暈、冠心病、心絞痛等。銀杏葉制劑在防治心腦血管疾病中成藥中占有較大市場份額，市售品種多樣。患者反映不同廠家銀杏葉制劑效果不一。本課題采用HPLC法研究市場比較普遍劑型，分散片、薄膜衣片、軟膠囊，3個廠家銀杏葉制劑中總黃酮醇苷的溶出度，以期為評定藥品質(zhì)量提供依

據(jù)［1］。

1　儀器與試劑

1.1儀器ZRS-8G智能溶出測試儀(天津大學(xué)儀器廠); WATERS高效液相色譜儀(美國WATERS公司);電子分析天平(瑞士METTLER TOLEDO梅特勒-托利多)。

1.2試劑供試藥品為市售藥品隨機取樣。A:銀杏葉分散片(吉林某藥業(yè)有限公司，國藥準字Z20060440，批號140304); B:銀杏葉薄膜衣片(江蘇某藥業(yè)集團有限公司，國藥準字Z20027949，批號14111523); C:銀杏葉軟膠囊(石家莊某藥業(yè)有限責(zé)任公司，國藥準字Z20060457，批號501140601)。標示量每片均含總黃酮醇苷19.2mg，萜類內(nèi)酯4.8mg。

對照品:槲皮素(中國藥品生物制品檢定所，批號100081-200907)、山奈素(中國藥品生物制品檢定所，批號110861-200808)、異鼠李素(中國藥品生物制品檢定所0-201109)(中國食品藥品檢定研究院)。試劑:甲醇(色譜純);超純水。其他試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

2.1色譜條件WATERS 515泵高效液相色譜儀。色譜柱為NOVAPAK C18柱(3.9mm×150mm，5 μm)。流動相為甲醇－0.4%磷酸溶液(50∶50)，流速1.0ml/min，檢測波長360 nm，柱溫35℃，進樣量10 μl。

2.2對照品溶液的制備分別精密稱取對照品槲皮素、山奈素、異鼠李素適量，加甲醇配制成槲皮素濃度為0.065mg/ml，山奈素濃度為0.045mg/ml，異鼠李素0.031mg/ml的混合標準溶液。另取依據(jù)處方工藝配制的相應(yīng)空白輔料適量，同上方法配制成空白溶液。2.3供試品溶液的制備供試品溶液取銀杏葉分散片10片，研細后并精密稱定，置入帶塞錐形瓶，精密加入甲醇20ml后稱定重量，并超聲處理20min。置室溫后，再稱定重量，用甲醇補足失減的重量，搖勻并濾過。精密量取續(xù)濾液10ml置入100ml量瓶中，加甲醇10ml、25%鹽酸溶液5ml入內(nèi)，搖勻后，置于水浴中加熱回流30min，迅速冷卻到室溫，然后轉(zhuǎn)至50ml量瓶，用甲醇溶液稀釋到刻度并搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過得供試液A。

取銀杏葉薄膜衣片10片，其他制備過程同試液A，即得試液B。

取軟膠囊10粒，用針扎囊壁，擠出內(nèi)容物，放入燒杯中稱重，去皮，取相當于一粒軟膠囊重量，精密稱定，其他制備過程同試液A，即得試液C。

取三種供試品和混合對照品試液按2.1項下色譜條件進樣，測得各自色譜圖見圖1。

2.4標準曲線的制備［2］分別精密量取對照品溶液

各1、2、4、6、8、10ml加入10ml量瓶內(nèi)，用甲醇定容，0.45 μm微孔濾膜濾過后，按2.1項下色譜條件進樣10 ul。以濃度C(mg/ml)為橫坐標，峰面積(A)為縱坐標，得線性方程。槲皮素線性方程為: A = 70 086C －59.418相關(guān)系數(shù)r = 0.9995(線性范圍: 0.0065～0.065mg/ml);山柰素線性方程為: A = 80 059C－50.13相關(guān)系數(shù)r = 0.9993(線性范圍: 0.0045～0.045mg/ml);異鼠李素線性方程為: A = 69 717C－29.99相關(guān)系數(shù)r = 0.9994(線性范圍: 0.0031～0.031mg/ml)。混合標準液色譜圖見圖1。槲皮素、山奈素和異鼠李素的出峰時間分別為12.2min、21.6min和24.0min。

2.5溶出度測定方法采用轉(zhuǎn)籃法，隨機取銀杏葉樣品制劑6片(粒)，按《中華人民共和國藥典》2010版二部附錄XC溶出度測試法的第一法進行［3］。用0.1mol/l鹽酸作為釋放介質(zhì)，控制溫度為(37±0.5℃)，設(shè)定儀器轉(zhuǎn)速100 r/min。分別在5、10、20、30、45、60、90min各時間點，以注射器取樣5ml，同時立即補充上述同溫度釋放介質(zhì)5ml，分別以0.45 μm的微孔濾膜過濾，精密量取續(xù)濾液1.5ml于100ml量瓶中，按2.3項方法制備供試品溶液，取樣測定槲皮素、山奈素、異鼠李素的峰面積，參照標準曲線計算得出總黃酮醇苷的溶出量，同時取2.2項下配制的對照品試液，按上述色譜條件測定，計算出樣品各時間點總黃酮醇苷的溶出度，并繪制不同制劑的累積溶出度曲線，見表1、圖2。

圖1　HPLC色譜圖(1槲皮素2山奈素3異鼠李素)A分散片樣品B薄膜衣片樣品C軟膠囊樣品D混合標準品

表1　銀杏葉制劑的平均累積溶出百分率　n =6，%

2.6精密度試驗取“2.5溶出度測定方法”的供試品溶液作為樣品溶液，按“2.1”項下的色譜條件連續(xù)進樣測定5次，記錄各峰面積，相對標準偏差RSD為0.1%。

2.7穩(wěn)定性實驗按“2.5溶出度測定方法”配制供試品溶液，置室溫條件下放置，分別于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h、12 h取樣，按“2.1”項下的色譜條件分別進樣三次，記錄各點時的峰面積，RSD為0.2%(n =5)，結(jié)果表明，供試品溶液在室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8數(shù)據(jù)處理將各劑型在各時間點累積溶出度輸入計算機，按威布爾分布模型計算溶出參數(shù)T50、Td、m、AUC，并做方差分析［4］，見表2。實驗結(jié)果表明3種供試品中，溶出度參數(shù)各劑型間均有差異，銀杏葉分散片的溶出度優(yōu)于薄膜衣片劑和軟膠囊，其中，T50最大的是最小的11.1倍。

表2　各劑型樣品的溶出度參數(shù)　n =5，±s

劑型　T50(min)　 Td(min)　m　 AUC(0-90min)A分散片1.56±0.32　 3.15±0.24　 0.72±0.06　 100.11±9.65 B薄膜衣片　9.73±0.75　 14.34±1.92　 0.96±0.12　 67.34±6.15 C軟膠囊　17.31±1.23　 23.04±1.93　 1.21±0.37　 84.17±10.31

3　討論

3.1我們考察了不同轉(zhuǎn)速水平對溶出的影響，結(jié)果表明，在相同的時間點，轉(zhuǎn)速100 r/min高于75 r/min及50 r/min時藥物累積溶出百分率，因此，確定儀器轉(zhuǎn)速為100 r/min。

3.2溶出介質(zhì)以水、磷酸鹽緩沖液(pH = 6.8)和0.1mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì)，分別測定。結(jié)果表明，在所考察的溶出介質(zhì)中，以0.1mol/L鹽酸溶液中總黃酮醇苷的溶出度最大，且更接近于人體胃部環(huán)境，因此采用0.1mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì)。

3.3目前，有文獻表明，中藥片劑的崩解速度不能完全反映溶出速度，銀杏葉制劑也有此類問題［5］。

3.4由于溶出度實驗可部分反映固體制劑中主要的理化性質(zhì)、處方組成、輔料品種及性質(zhì)、生產(chǎn)工藝等方面的差異，目前對西藥固體制劑體外溶出實驗已廣泛地用于制劑的質(zhì)控手段，而中藥固體制劑中體外溶出實驗報道還相對較少。

3.5實驗結(jié)果表明目前市售不同劑型銀杏葉制劑的體外溶出性能存在較大差異，這也是導(dǎo)致臨床反映的不同廠家不同劑型的銀杏葉制劑療效不穩(wěn)定的因素之一，臨床用藥需要引起注意。