2 363例新生兒4個常見遺傳性耳聾基因突變篩查結果分析

唐俊湘，孫玉秀，王朝紅，王亞群，童克婷，朱健生(安徽醫科大學婦幼保健臨床學院遺傳中心，安徽省婦幼保健院，合肥230000)

2 363例新生兒4個常見遺傳性耳聾基因突變篩查結果分析

唐俊湘，孫玉秀，王朝紅，王亞群，童克婷，朱健生
(安徽醫科大學婦幼保健臨床學院遺傳中心，安徽省婦幼保健院，合肥230000)

摘要:目的分析2 363例新生兒4個常見遺傳性耳聾基因突變情況，為遺傳性耳聾的防治提供依據。方法選擇出生48～72 h的新生兒2 363例，采集其足底血，采用基質輔助激光解吸/離子化飛行時間質譜技術檢測GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體12S rRNA 4個常見遺傳性耳聾基因(共20個位點)的突變情況。結果2 363例新生兒中，檢出突變基因攜帶者152例( 6.43%)，其中GJB2突變71例( 3.00%)、SLC26A4突變66例( 2.79%)、GJB3突變10例( 0.42%)、線粒體12S rRNA突變5例( 0.21%) ; GJB2、GJB3、SLC26A4突變類型均為雜合，線粒體12S rRNA突變類型均為同質性。結論合肥地區新生兒GJB2基因雜合突變率最高，SLC26A4其次，GJB3和線粒體12S rRNA突變較為少見。

關鍵詞:遺傳性耳聾;新生兒;基因突變

耳聾是最常見的感覺障礙性疾病，我國每年約有30 000例先天性耳聾患兒出生［1］。其中超過50%的患兒有遺傳基礎，其臨床表現往往單一且具有早期不易察覺的特點［2～4］。提早發現耳聾新生患兒或耳聾易感新生兒，對于早期干預和治療意義重大。目前臨床已經發現和定位的與遺傳性耳聾相關的基因有60多個，其中GJB2、GJB3、SLC26A4、線粒體12S rRNA是我國常見或在我國耳聾患者中已經被克隆的致聾基因［5］。本研究我們對合肥地區出生的2 363例新生兒進行了上述4個耳聾基因(共20個位點)的突變篩查，現分析其突變特點，以期為遺傳性耳聾的及早診斷提供理論依據。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2014年9～12月于安徽省婦幼保健院足月生產的新生兒2 363例，均出生48～72 h。其中，男1 258例，女1 105例;出生體質量2.70～4.10 kg，平均3.10 kg; 2 363例新生兒聽力篩查結果全部通過，其中65例初篩未通過，復篩后通過。本研究均獲得新生兒監護人知情同意。

1.2耳聾基因檢測采集新生兒足跟血約0.15 mL，制成干燥血片。采用基質輔助激光解吸/離子化飛行時間質譜技術進行4個常見耳聾基因(共20個位點)的突變檢測，包括GJB2 ( 235delC、299 _ 300delAT、176 _ 191del16、35delG、167delT)、GJB3 ( 538C＞T、547G＞A)、SLC26A4 ( IVS7-2A＞G、2168A＞G、1174A＞T、1229C＞T、1226G＞A、1975G＞C、2027T＞A、2162C＞T、281C＞T、589G＞A IVS15 +5G＞A)及線粒體12S rRNA( 1494C＞T和1555A＞G)。應用法醫樣品DNA磁珠提取試劑盒提取DNA，紫外分光光度計進行定量和純度檢測根據突變位點的位置和基因型設計擴增引物對和延伸引物。PCR反應體系: 10×hotstar PCR緩沖液2.5 mmol/L MgCl2、2.5 mmol/L dNTP、引物和模板DNA。PCR反應條件: 94℃、5 min，94℃、45 s 72℃、45 s，72℃、5 min，共30個循環。利用蝦堿式磷酸酶對PCR產物進行消化，去除多余dNTP。在純化后的PCR產物中加入2 μL延伸引物，進行單堿基延伸反應。延伸引物包括10×iPLEX緩沖液iPLEX ddNTP混合物、iPLEX延伸引物混合物iPLEX單堿基延伸酶;擴增條件: 94℃、30 s，94℃5 s，52℃、5 s，80℃、5 s，72℃、3 min，共40個循環利用陽離子交換樹脂純化單堿基延伸產物，去除鹽離子后再次純化。將純化后的延伸產物用質譜儀進行檢測，具體步驟參照Sequenom Spectro CHIP Ar rays說明書操作。

2　結果

2 363例新生兒檢出突變基因攜帶者152例152例新生兒4個遺傳性耳聾基因突變篩查結果見表1。

3　討論

GJB2是第1個被克隆和鑒定的遺傳性耳聾基因，編碼縫隙連接蛋白Cx26。Cx26在人類的耳蝸

表1　 152例新生兒4個遺傳性耳聾基因突變篩查結果

毛細胞中高表達，因此GJB2突變與耳聾密切相關，被認為是突變頻率最高的耳聾基因［6］。在遺傳性耳聾患者中已經發現了100多種GJB2突變類型，并且其在不同種族人群中的突變特點差別較為明顯［7，8］。本研究2 363例新生兒中，GJB2突變71例( 3.00%)，其中235delC雜合突變率最高，其次為299_300delAT，與孟培等［9］的研究結果基本一致，進一步證明了GJB2是突變頻率最高的遺傳性耳聾基因［5，6，9］。GJB2突變導致的耳聾多數為常染色體隱性遺傳，本研究結果可對GJB2基因突變攜帶者的婚育起到一定的指導作用。

GJB3是編碼縫隙鏈接蛋白的另一基因，其突變率較低，可以引起常染色體顯性或隱性遺傳性耳聾［9，10］。本研究2 363例新生兒中，GJB3基因雜合突變僅有10例，均通過聽力篩查，且隨訪無異常。但有報道顯示，GJB3( 538C＞T，547G＞A)雜合突變攜帶者臨床可表現為遲發型高頻聽力下降［11，12］。因此，對于GJB3基因突變檢出者，臨床上需告知其監護人定期對攜帶者進行聽力測試，當發生聽力下降時應及時就醫。

SLC26A4屬于離子轉運體家族，突變引起的耳聾多數為常染色體隱性遺傳［13］。本研究中，SLC26A4突變率僅次于GJB2，占2.79%，與全國范圍內進行的聾病分子流行病學調查結果基本相符。同時本研究中SLC26A4突變類型均為雜合，提示新生兒由此基因突變引起耳聾的可能性較低。由于凡是能引起顱內壓變化的因素均具有導致大前庭水管綜合征患者聽力下降的可能，因此及早進行SLC26A4基因突變篩查并加以有效預防，能夠延緩患者的聽力下降［13，14］。

氨基糖苷類藥物所致的藥物中毒性聾是常見的后天性耳聾之一，部分患者對氨基糖苷類抗生素有易感性，并通常是與線粒體12S RNA突變有關的母系遺傳［15］。本研究檢出線粒體12S rRNA( 1555A ＞G)同質性突變5例，出生時均通過聽力篩查。因此，耳聾基因篩查可以檢測到出生時聽力正常的耳聾高危患兒，此類患者需終身禁用氨基糖苷類藥物此外，該基因突變為母系遺傳，應提醒新生兒母親及其家族中其他成員進行相應檢測與預防。

綜上所述，合肥地區2 363例新生兒GJB2基因雜合突變率最高，SLC26A4其次，GJB3和線粒體12S rRNA突變較為少見。本研究結果提示，在新生兒中進行常見耳聾基因篩查，可以發現部分聽力篩查不能發現的高危耳聾患兒以及耳聾致病基因攜帶者，擴大預防和干預新生兒耳聾的范圍，對遺傳性耳聾的防治意義重大。本研究僅對4個常見耳聾基因進行了篩查，由于成本以及技術條件等限制，其他的耳聾基因以及位點并未被納入到檢測范圍。因此對于聽力篩查未通過而基因篩查通過的新生兒，還應該擴大基因檢測范圍并結合其他臨床特征進行深入分析。

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收稿日期:( 2015-03-13)

文章編號:1002-266X( 2015) 32-0076-03

文獻標志碼:B

中圖分類號:R764.43

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.32.032