晚發型子癇前期患者血清、尿液2-甲氧雌二醇水平及胎盤COMT蛋白表達及意義

黃麗瓊，張元珍( 1咸寧市中心醫院同濟咸寧醫院，湖北咸寧437000;武漢大學中南醫院)

晚發型子癇前期患者血清、尿液2-甲氧雌二醇水平及胎盤COMT蛋白表達及意義

黃麗瓊1，2，張元珍2
( 1咸寧市中心醫院同濟咸寧醫院，湖北咸寧437000;2武漢大學中南醫院)

摘要:目的探討2-甲氧雌二醇( 2-ME)、兒茶酚胺氧位甲基轉移酶( COMT)蛋白在晚發型子癇前期( PE)發病中的作用。方法選取孕周＞34周的晚發型PE患者25例(觀察組)，同期正常單胎妊娠孕婦35例(對照組)。采用全自動酶標儀檢測血清及尿液2-ME水平，Western blotting法檢測胎盤組織COMT蛋白相對表達量。結果觀察組血清、尿液2-ME分別為( 595.3±21.8)、( 407.8±16.3) pg/mL，對照組分別為( 407.8±23.9)、( 298.4±18.1) pg/mL;兩組比較，P均＜0.05。觀察組胎盤COMT蛋白相對表達量為1.48±0.66，對照組為1.39±0.58;兩組比較，P＞0.05。結論晚發型PE患者血清、尿液2-ME水平升高，胎盤COMT蛋白表達無明顯變化; 2-ME可能是其發病過程中的一種代償性保護因子，而COMT蛋白可能與晚發型PE的發生關系不大。

關鍵詞:晚發型子癇前期;兒茶酚胺氧位甲基轉移酶; 2-甲氧雌二醇

子癇前期( PE)是一種以血壓升高及蛋白尿為臨床特征的疾病，早期妊娠時滋養細胞的淺植入導致胎盤功能不良是早發型PE的發病機制之一，而關于晚發型PE的發病機制尚不明確［1，2］。兒茶酚胺氧位甲基轉移酶( COMT)是一種甲基化酶，17β雌二醇經細胞色素P450酶羥基化后，經COMT甲基化，繼而形成2-甲氧雌二醇( 2-ME)。近期研究表明，早發型重度PE患者血清2-ME水平及胎盤COMT蛋白表達明顯低于正常妊娠孕婦［3］，但是其在晚發型PE發生中作用的研究相對較少。為此，我們進行了如下研究。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2013年1月～2014年1月咸寧市中心醫院同濟咸寧醫院收治的孕周＞34周的晚發型PE［4］患者25例(觀察組)，同期正常單胎妊娠孕婦35例作為對照組，兩組均為單胎孕晚期、剖宮產分娩，排除合并慢性高血壓、肝腎疾病、心臟病、糖尿病及甲狀腺功能亢進或減退者。觀察組年齡( 30.3±3.2)歲，孕周( 35.3±1.6)周，孕前BMI ( 23.0±2.8) kg/m2，收縮壓( 172.8±13.5) mmHg、舒張壓( 110.3±8.2) mmHg;對照組年齡( 30.4± 4.3)歲，孕周( 38.2±1.2)周，孕前BMI( 21.9± 2.8) kg/m2，收縮壓( 115.8±12.4) mmHg、舒張壓( 75.3±7.8) mmHg。兩組基本資料除血壓外均具有可比性。

1.2血清及尿液2-ME水平檢測兩組均于剖宮產術前30 min用EDTA抗凝管采集外周肘靜脈血3 mL，1 000 r/min離心15 min，取上層血漿置于－80℃冰箱保存待測。無菌容器留取新鮮尿液5 mL，1 500 r/min離心20 min，取上清液置－80℃冰箱保存待測。采用全自動酶標儀檢測血清及尿液2-ME，標本均同批測定，批內變異＜5%。

1.3胎盤COMT蛋白表達檢測采用Western blotting法。兩組胎盤娩出5 min內，避開鈣化、壞死及出血區，于胎盤中央母體面取0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的組織，立即置于液氮冷凍，－80℃低溫冰箱保存待測。取適量組織樣品采用RIPA裂解液充分勻漿，12 000 r/min離心5 min后取上清，提取組織總蛋白。BCA法測定蛋白濃度，SDS PAGE電泳后將目的蛋白和內參蛋白( GAPDH)轉移到PVDF膜上( 4℃，100 V，120 min)，洗膜后5%脫脂奶粉封閉1 h。加入一抗4℃孵育過夜充分洗膜，加入二抗37℃孵育1 h。再次洗膜后加ECL化學發光液，暗室曝光顯影。目的蛋白相對表達量以目的蛋白與GAPDH的條帶灰度值的比值表示。

1.4統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以珋x±s表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

兩組血清及尿液2-ME水平、胎盤COMT蛋白表達比較見表1。

表1　兩組血清及尿液2-ME水平、胎盤COMT蛋白表達比較(珔x±s)

3　討論

目前多數國內外學者認為，胎盤血管形成不良導致胎盤缺氧是PE發病的關鍵因素。2-ME是17β雌二醇的代謝產物之一，主要由胎盤COMT甲基化產生，大量研究證實其具有抗增殖、促進凋亡及抗血管生長等作用［5，6］。新近研究顯示，2-ME在缺氧情況下可通過促進絨毛滋養細胞浸潤生長和血管生成來改善胎盤血液循環，并影響胚胎生長［3，7］?？扇苄匝軆绕どL因子受體1( sFlt-1)是參與PE發病的重要因子，可導致促血管生成因子下降、內皮細胞損傷以及滋養層侵襲不足等。缺氧誘導因子1a ( HIF-1a)在缺氧狀態下上調sFlt-1表達，而2-ME可以通過抑制HIF-1a的活化來改善胎盤缺氧狀態［8］。

研究發現，重度PE患者胎盤組織中COMT表達降低［9］。有研究將孕鼠的COMT基因敲除后發現，孕鼠血清2-ME水平降低、HIF-1a升高，產生類似PE的表現;而補充2-ME后，HIF-1a水平降低，PE樣癥狀減輕，表明COMT/2-ME缺陷在PE的發病中起重要作用［3］。本研究中，觀察組血清、尿液2-ME水平均顯著高于對照組，而兩組胎盤COMT蛋白相對表達量比較則無統計學差異。表明晚發型PE患者血清中2-ME水平升高不是由于腎臟排泄減少而引起的，推測2-ME是晚發型PE發病過程中的一種代償保護因子，而COMT蛋白可能與晚發型PE的發生關系不大。

COMT/2-ME如何參與PE的發病目前尚不明確。研究發現，2-ME可能通過抑制HIF-1a和sFlt1以外的機制保護血管并維持其正常功能［10］，其內皮血管舒張作用可能對高血壓、肺動脈高壓、腎病、缺血性腦損傷的防治均有積極意義［11］。研究發現，胎盤COMT表達降低與妊娠期高血壓疾病的發生有關聯。Lee等［12］研究發現，COMT缺乏可能是PE發生的啟動因素。Hertig等［13］研究發現，PE孕婦孕早期時伴有血清2-ME水平下降，孕32～34周時與正常妊娠孕婦比較無明顯差異，而晚發型PE患者血清2-ME水平高于正常妊娠孕婦。Palmer等［14］和Seol等［15］研究發現，重度PE患者胎盤COMT表達與正常足月妊娠孕婦比較無統計學差異。以上研究結果與本研究存在差異，可能與研究人群的種族、孕齡及檢測方法不同有關。

參考文獻:

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收稿日期:( 2015-01-07)

文章編號:1002-266X( 2015) 32-0070-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R714.244

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.32.029