馬齒莧口服液灌胃治療大鼠非酒精性脂肪肝療效觀察

馬齒莧口服液灌胃治療大鼠非酒精性脂肪肝療效觀察

牛美蘭1，李高申1，丁素英2， 劉勇華1

(1黃河科技學院，鄭州450063；2鄭州大學第一附屬醫院)

摘要：目的 觀察馬齒莧口服液灌胃治療大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)的效果。方法將65只大鼠隨機分為模型組15只和對照組、羅格列酮組、馬齒莧1組、馬齒莧2組、馬齒莧3組各10只。對照組給予基礎飼料喂養；其余5組制作NAFLD模型，馬齒莧1、2、3組分別給予馬齒莧112.5、225、450 g/(kg·d)灌胃，羅格列酮組給予羅格列酮40 mg/(kg·d)灌胃。飼養12周后測量肝濕重，觀察肝組織病理變化，進行肝組織炎癥活動度評分，并檢測各組血清ALT、AST。結果模型組肝細胞呈重度彌漫性脂肪變性；馬齒莧1、2組肝組織病理改變程度較模型組輕；馬齒莧3組、羅格列酮組肝細胞脂肪變較輕。對照組肝濕重及肝組織炎癥活動度評分均低于其余5組，馬齒莧2、3組及羅格列酮組肝濕重低于模型組，馬齒莧3組及羅格列酮組肝組織炎癥活動度評分低于模型組(P均<0.01)。模型組、馬齒莧1組血清ALT、AST高于對照組，馬齒莧3組血清ALT、AST水平低于馬齒莧1組，馬齒莧3組、羅格列酮組血清ALT、AST水平低于模型組(P均<0.01)。結論 馬齒莧口服液灌胃能明顯改善NAFLD大鼠肝組織病理改變，對NAFLD有較好的治療效果。

關鍵詞：馬齒莧；非酒精性脂肪肝；動物實驗模型

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.39.011

中圖分類號：R575.5文獻標志碼：A

基金項目：鄭州市科技攻關項目(20140787)。

收稿日期：(2015-08-01)

非酒精性脂肪肝(NAFLD)近年來發病率呈上升趨勢[1]，加強對NAFLD的防治有重要意義。西醫防治NAFLD長期療效不明確，且在控制肝臟纖維化方面效果欠佳。近年來，關于馬齒莧對血脂代謝影響的報道甚多，2014年5月，我們觀察了馬齒莧口服液治療大鼠NAFLD的效果。現報告如下。

1材料與方法

1.1實驗動物及主要材料健康雄性SD大鼠65只，體質量130~150 g，清潔級，購自山東省魯抗醫藥集團有限公司。儀器設備、基礎飼料及高脂飼料均由黃河科技學院動物實驗中心制備。馬齒莧口服液(馬齒莧30~45份，丹參25~35份，決明子10~20份，生山楂10~20份，澤瀉10~15份)由河南省中醫藥研究院制劑室提供。羅格列酮購自成都恒瑞制藥有限公司。

1.2NAFLD模型制作及馬齒莧用藥方法將65只大鼠隨機分為模型組15只和對照組、羅格列酮組、馬齒莧1組、馬齒莧2組、馬齒莧3組各10只。對照組給予基礎飼料喂養；其余5組以高脂飼料喂養制作NAFLD模型，同時馬齒莧1、2、3組分別給予馬齒莧112.5、225、450 g/(kg·d)灌胃[2]，2次/d，羅格列酮組給予羅格列酮40 mg/(kg·d)灌胃，2次/d。分別于喂養8、10、12周自模型組隨機挑選2只大鼠處死，觀察建模情況。藥物干預各組共6只大鼠因灌胃操作不當而死亡，故剔除。

1.3肝濕重測量飼養12周后分別取各組大鼠處死，腹腔靜脈采血后及時取出大鼠肝臟，自然光下觀察大鼠肝臟顏色、大小及形狀，稱肝濕重。

1.4肝組織病理學觀察大鼠腹腔麻醉后，從肝右葉和肝左葉中部各取一塊肝組織，10%甲醛固定，48 h后用不同濃度的酒精進行脫水，二甲苯透明，常規石蠟包埋，4 μm厚連續切片，HE染色后鏡下觀察。

1.5肝組織炎癥活動度評價肝組織炎癥活動度評分參考中華醫學會2006年2月修訂的《NAFLD診療指南》[3]。

1.6血清ALT、AST檢測采用全自動生化分析儀檢測大鼠血清ALT、AST。

2結果

2.1各組肝臟組織病理學改變對照組肝組織細胞無炎性變及壞死、無脂肪變性。模型組肝小葉結構破壞，肝細胞呈重度彌漫性脂肪變性。馬齒莧1組呈中度肝細胞大泡性脂肪變,肝小葉病理改變程度較模型組輕。馬齒莧2組見少數微小脂肪滴沉積于肝細胞質內，肝小葉內少量炎癥細胞浸潤。馬齒莧3組肝小葉結構基本完整，肝小葉周圍可見輕微脂肪變性。羅格列酮組肝細胞脂肪變減輕，胞質內脂肪滴較少或消失，肝細胞內僅有少量炎癥細胞浸潤。

2.2各組肝濕重、肝組織炎癥活動度評分及血清ALT、AST水平比較對照組肝濕重低于其余5組，馬齒莧2、3組及羅格列酮組肝濕重低于模型組(P均<0.01)。對照組肝組織炎癥活動度評分低于其余5組，馬齒莧3組及羅格列酮組肝組織炎癥活動度評分低于模型組(P均<0.01)。模型組、馬齒莧1組血清ALT、AST高于對照組，馬齒莧3組血清ALT、AST水平低于馬齒莧1組，馬齒莧3組、羅格列酮組血清ALT、AST水平低于模型組(P均<0.01)。見表1。

表1　 各組肝濕重、肝組織炎癥活動度評分

及血清ALT、AST水平比較( ± s)

表1　 各組肝濕重、肝組織炎癥活動度評分

組別n肝濕重(g)肝組織炎癥活動度評分(分)ALT(U/L)AST(U/L)馬齒莧1組813.42±1.38*3.30±0.47*41.55±1.90*141.74±7.06*馬齒莧2組911.45±0.89*#2.79±0.47*37.50±2.16*138.81±6.65*馬齒莧3組99.13±0.78*#2.25±0.53*#35.28±3.20#△125.35±13.20#△羅格列酮組89.34±1.14*#1.97±0.53*#35.17±2.91#125.96±4.76#模型組916.74±0.97*3.85±0.91*84.32±4.77*246.11±12.38*對照組107.39±0.470.70±0.2336.17±2.00125.47±6.11

注：與對照組相比，*P<0.01；與模型組相比，#P<0.01；與馬齒莧1組相比，△P<0.05。

3討論

目前公認的NAFLD發病機制學說為“二次打擊學說”，炎癥因子和氧化應激刺激下，肝小葉細胞發生炎癥，進而出現肝細胞脂肪變、缺血、肝細胞間質纖維化、壞死等[4，5]，炎癥因子侵入肝組織，促使單純性脂肪肝向NAFLD轉變，且肝細胞炎癥程度與肝纖維化進展相關[6]。馬齒莧為是我國傳統的藥食兩用的植物。其地上部分藥用，具有清熱解毒、涼血止血的作用。研究[7~9]表明，馬齒莧含有大量多糖、氨基酸、去甲腎上腺素等活性成分，具有消炎抑菌、增強免疫等作用。馬齒莧提取物對二甲苯致小鼠耳廓炎癥模型具有抗炎作用[10]，其機制可能與降低TNF-α和細胞間黏附分子(ICAM-1)表達有關。Ali等[11]研究發現馬齒莧可用于膽梗阻誘導的肝纖維化的防治。馬齒莧水提物還可保護雞胚肝組織免受順鉑誘導的肝毒性損傷，其作用機制可能是提高抗氧化酶活性，并使ALT、AST、堿性磷酸酶和乳酸脫氫酶活性恢復正常[12]。我們發現馬齒莧1、2組肝組織病理改變程度較模型組輕微，馬齒莧3組、羅格列酮組肝細胞脂肪變、肝細胞炎癥反應較輕，提示馬齒莧和羅格列酮均能減輕NAFLD病理改變，且馬齒莧的保肝作用與劑量有一定相關性。本研究中馬齒莧2、3組及羅格列酮組肝濕重低于模型組，馬齒莧3組及羅格列酮組肝組織炎癥活動度評分及血清ALT、AST水平低于模型組，提示馬齒莧有減輕肝細胞炎癥反應、抑制脂肪變的作用。

馬齒莧的成分比較復雜，其具體抗炎機制尚未明確。已知馬齒莧中含有大量維生素E，能降低低密度脂蛋白水平，升高高密度脂蛋白水平，增加TC吸收率，加速脂質排泄，有顯著的降脂、預防動脈粥樣硬化的作用。有學者[13]研究發現馬齒莧乙醇提取物可顯著降低高脂血癥大鼠體內TC和TG水平，其療效與阿伐他丁相當。我們推測，馬齒莧可能通過降脂、抗炎、抗氧化進而發揮對脂肪性肝炎的預防和治療作用，并因此緩解NAFLD的進展。

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